Examen cytobactériologique des liquides de

ponction

I. Objet :
Cette procédure décrit les différentes étapes de la réalisation d'un examen
cytobactériologique des liquides d'épanchement dont la composition et le volume
peuvent varier dans certaines conditions pathologiques.

II. Domaine d'application :

La présente procédure s'applique pour la réalisation d'un examen cytobactériologique
des liquides de ponctions.
III. Objectif :
Il faut faire le diagnostic d'une infection dans un site normalement stérile ou dans lequel
une infiltration a amené un épanchement liquidien pouvant héberger des bactéries
susceptibles de s'y multiplier. Les liquides internes concernés:
-Liquide articulaire ou synoviale
-Liquide pleural
-Liquide d'hydrocèle
-Liquide péritonéal
-Liquide d'ascite
-Liquide péricardique
IV. Responsabilités :
Cette procédure est destinée aux techniciens de paillasse sous la responsabilité des
biologistes du laboratoire.
V. Déroulement :
1. Enregistrement des données du patient sur la feuille de paillasse
-Nom et prénom du patient
-Age
-Date
-Numéro du dossier
-Heure du recueil / réception
2. Prélèvement
2.1 Conditions de prélèvement et matériel
Conditions de prélèvement
- Dès les premiers signes cliniques ou radiologiques d’épanchement ou d’infection
-Avant toute antibiothérapie
Matériel
-Poudrier stérile
-Tube sec stérile, en cas de demande de cytologie, utilisation possible d’un tube
hépariné en plus
-Flacons d’hémoculture à utiliser si liquide abondant et purulent
-NB : Pour le LCR, tubes en plastique stérile (15ml) type tube Falcon ou poudrier
stérile
Transmission au laboratoire :
-Fermer correctement le milieu de transport.
- Acheminer le plus rapidement possible au laboratoire.
- Si l’envoi est différé (<12H), il est préconisé de conserver l’échantillon entre
+2°C et +8°C (réfrigérateur).

2.2 Prélèvement
 Liquide de ponction (ascite, pleural,….)
Prélèvement effectué par un médecin
- Désinfection cutanée
- Recueil dans le tube stérile (indispensable)
- Quantité nécessaire ≥ 3ml
- Prélever également sur des flacons hémoculture
Liquide articulaire
Prélèvement effectué par un médecin
- Désinfection cutanée
- Recueil du liquide dans flacon à billes ou hépariné
- Quantité nécessaire ≥ 3ml
- Si quantité très faible (qq gouttes) adresser la seringue bouchée sans aiguille au
laboratoire et spécifier l’examen à privilégier : cytologie ou culture.
3. Examen macroscopique
-Couleur
-Limpidité
-Viscosité
4. Culture
-Gélose au sang frais
-Gélose au sang cuit Gélose
-Incubation à 37 °C pendant 48h en anaérobie
-Ensemencer avec 4 gouttes du liquide:
5. Examen microscopique
5.1 Cytologie
-Faire le comptage des GB et GR sur cellules de Malassez ou Kovaslide
-Noter la présence de cristaux.
-Dilution: Liquide purulent
-Dilution systématique pour liquides articulaire (visqueux)
5.2 Examen microscopique après coloration:
-Cet examen est pratiqué directement sur frottis du produit pathologique
-Gram : noter la flore bactérienne et richesse en germes.
-Bleu de méthylène: Formule leucocytaire
6. Lecture-Interprétation de la culture :
-Lecture des résultats à 24h et à 48h
- Critères de normalité d'éléments nucléés des liquides de séreuse:
 Liquide pleural: EN< 500/min
 Liquide articulaire : EN<200/mm²
 Liquide d'ascite: EN<100/mm²
Pour la formule leucocytaire, la proportion respectives des PN et des lymphocytes est
<25%
7. Antibiogramme :
-Faire la lecture de la galerie et l'antibiogramme en rendant les résultats et le
diamètre des disques selon les instructions d'EUCAST-CFM
-Validation -Saisie des résultats
-Remise des résultats au médecin ou au malade (à main propre