Partie expérimentale

1.Présentation de la structure d’accueil

Figure 03 : L’hôpital CHALABI Abdelkader

Le stage d’application est réalisé au niveau du laboratoire des urgences de

l’établissement public hospitalier (EPH) CHALABI Abdelkader
Le service porte le nom du martyre docteur (CHALABI Abdelkader), mis en service le
……
L’hôpital est composé de plusieurs services :

 Accueil des malades

 Une salle de réception
 UMC : urgences médicaux chirurgicales
 Consultation médicaux chirurgicales
 Salles observation : (femme -homme)
 Chambre d’isolement
 Salle de soin
 Laboratoire d’analyse médical
 Salle de plâtre
 Une salle de radiologie conventionnelle
 Cabinet dentaire
 Bloc opératoire
 Services pédiatrie
 Services Pneumo-phtisiologie
 Services PTS
 Gynécologie obstétrique
 Gastrologie
 Maternité
 Médecine femme et Médecine homme
 Chirurgie femme et chirurgie homme
 Hémodialyse

2.structure de laboratoire :
La salle de réception : c’est une salle pour l’accueille des patients.
Salle de prélèvement :

Salle d’analyses : ils Ya quatre services présente dans le tableau.

 Laboratoire d’analyses médicales

Salle de
Salle Rayon des Salle de Bureau du
prélève Vestiaire
d’attente Analyse réalisation chef
ment

Rayon de Rayon Rayon Rayon

biochimie microbiologique d’hématologie d’sérologie

Figure 02 : Organigramme de laboratoire de l’EPH CHALABI

Abdelkader
Le laboratoire de l’EPH fait plusieurs analyses biologiques dans plusieurs rayons est :
 Salle biochimie
 Glycémie
 Bilan hépatique (transaminases, phosphatases alcalines, bilirubine)
 Bilan lipidique (cholestérol total-triglycéride-HDL-LDL)
 Bilan rénal (urée- créatinine)
 Acide urique
 Protéine total (CRP)

Salle d’hématologie
 Groupe sanguin
 Numération Formule Sanguine (FNS)
 Vitesse de sédimentation (VS)
 TP -TCK

Salle sérologie
 ASLO- VIH -HBS -CRP

Salle bactériologie
Nos objectifs envisages au cours de ce stage sont :
 Connaitre le milieu de travail.
 S’ouvrir sur le monde professionnel.
 Connaitre les conditions de travail du personnel, et avoir une idée sur ce qui nous
ferons plus-tard.
 En savoir plus sur le domaine de la biologie médicale.
 Pour réviser, Tester et améliorerons connaissances dans ce domaine.
 Détermination des différents technique et tests appliqués dans le laboratoire et
comprendre le principe, les techniques, et les méthodes.

Les prélèvements biologiques

Le prélèvement est la première étape de toute analyses et le plus importantes c’est
l’obtention de l’échantillon a analyser qui peut être : le sang, les urines, les salles, les
liquide céphalo-rachidien (LCR), les pertes.

Les prélèvements sanguins

Le prélèvement sanguin est un soin réalisable par un infirmier, un technicien supérieur de
santé, un technicien de laboratoire médical, un inhalothérapeute, une sage-femme, un
Manipulateur en électroradiologie médicale, un biologiste médical, un médecin ou un
Technologiste médical
 Les types de prélèvement
Il permet de réaliser des examens de laboratoire sur un échantillon de sang prélevé par
ponction veineuse, capillaire ou artérielle.

Le prélèvement de sang veineux

Diagnostic non spécifique : toute analyse pouvant être faite Sur du sang veineux
Il est important afin d’éviter des erreurs d’identité, de ne pas effectuer ce soin « en série».
Ainsi, il vaut mieux sortir de la chambre entre deux prélèvements, même si l’infirmier
doit effectuer des prélèvements sanguins aux deux occupants.
Les lieux de ponction veineuse :
 Il faut éviter de prélever toujours la même veine, du fait du risque d’hématome.
 De même, il ne faut pas négliger de maintenir une pression douce du point de
 Ponction pendant 1 minute (si la personne n’a pas de troubles de la coagulation).
 Lorsque plusieurs tubes doivent être prélevés, il faut respecter un certain ordre
« Le sang veineux est l’un des échantillons d’examen les plus importants permettant la
confi ration d’un diagnostic médical. Le recours à une technique de prélèvement
Sanguin appropriée revêt donc un intérêt particulier. »
« La technique de prélèvement sanguin veineux, étape par étape, pour une approche
appropriée dans la pratique »

Le prélèvement capillaire
Prélèvement de sang provenant du système veineux capillaire par Piqûre transcutanée
Le prélèvement est effectué le plus souvent au niveau les veines du pli du coude, du
dos de la main ou dans la veine fémorale (bébé ou adulte dans certaines circonstances).
Le tableau de préconisation ci-joint oriente dans le choix des tubes de recueil des
échantillons en fonction des analyses prescrites.

Condition de prélèvement sanguin 

Pour préleveur :
1. Remplir entièrement le bon de prescription. Vérifier qu’il soit daté et signé.
2. Consulter le catalogue des examens pour s’informer sur les examens prescrits et les
heures d’ouverture du laboratoire.
3. Consulter le dossier du patient pour s’informer d’éventuelles précautions à prendre
pour le prélèvement.
4. Se laver les mains
5. Attacher le garrot sans trop le serrer
6. Repérer la veine, nettoyer la peau à l’alcool à 70°
7. Piquer dans la veine puis perforer le bouchon du tube pour y recueillir le sang
8. Dès que le sang commence à couler dans le 1er tube, relâcher le garrot pour ne pas
perturber certains paramètres tel que le potassium
9. Retourner le tube 2 ou 10 fois pour mélanger le sang à l’anticoagulant ou à l’activateur
de coagulation. Ne jamais agiter les tubes avec vigueur afin d’éviter l’hémolyse
10. Eliminer l’aiguille dans un container rigide pour objet contaminés piquants ou
tranchants
11. Bien comprimer la veine au niveau de la ponction et poser un pansement
12. Identifier les tubes
13. Si le prélèvement est effectué au laboratoire, renseigner le Système Informatique du
Laboratoire (SIL) avec le code préleveur, l’heure et éventuellement les tubes prélevés
14. Si un échantillon n’a pu être recueilli, renseigner le SIL.
15. Poser le pansement et raccompagner le patient.
NB : Chez les nouveaux nés et nourrissons, en fonction de la quantité de sang
nécessaire, le prélèvement est fait au niveau de : talon, veines fémorales, veine de
l’avant-bras ou exceptionnellement de la fontanelle

Pour le patient :

Le suit doit être trouve en état de repos : allongé et détendu

1. La position horizontale peut modifier certain dosage
2. Influence du jeune et des variations au cours du nycthémère
3. Les prélèvements sont généralement effectués le matin et à jeun.

Etape 1. Recueil ou vérification des informations administratives,

physiopathologiques et thérapeutiques
 S’assurer de l’identité du patient Demander au patient ses : Nom, Prénom et date de
naissance.
 Vérifier la concordance ordonnance ou la prescription du médecin avec la fiche de
prélèvement
 S’assurer de l’état de jeûne du patient (Certaines analyses ne peuvent être réalisées que
sur un sujet à jeun. En général un jeûne de 8 à 12 h est
 Suffisant. Dans tous les cas le jeûne permet plus facilement une comparaison des
résultats, notamment lorsque les analyses sont effectuées à plusieurs reprise).
 Prendre les renseignements cliniques et/ou thérapeutiques en fonction des analyses
demandées

Etape 2. Choisir le site de ponction

Le prélèvement d’un échantillon de sang peut s’effectuer à partir de toutes les veines
superficielles du pli du coude, de L’avant-bras et du dos de la main

Etape 3. Choisir le matériel : tubes, matériel de ponction

 Tubes : Sélectionner les tubes de prélèvement à utiliser en s’aidant du catalogue des
actes biologiques.
 Matériel de ponction : En fonction de la qualité de la veine et de l’âge du patient,
choisir :
 Soit l’une des aiguilles dans le cas d’un prélèvement sur veine normale.
 Soit l’une des unités de prélèvement, dans le cas d’un prélèvement sur un capital
veineux affaibli.
 Soit un adaptateur, dans le cas d’un prélèvement sur une voie veineuse en place
(cathéter, robinet...).

Etape 4. Préparer le matériel de ponction

 Aiguille + corps de prélèvement
 Unité de prélèvement à ailettes
 Adaptateur

Etape 5. Poser le garrot

Le garrot doit être posé au moment de la ponction veineuse afin de trouver la veine
avec plus de facilité.
Observer les règles suivantes :
 Le garrot doit être posé approximativement à 10 cm au-dessus du site de ponction.
 Le garrot ne doit pas interrompre la circulation artérielle du bras. Le retour veineux
doit être interrompu mais le Pouls doit rester palpable.
 On reconnaît un garrot trop serré lorsque le bras est cyanosé. Dans ce cas ôter le garrot
immédiatement.
 Si le bras est comprimé pendant plus de 3 minutes, les résultats d’analyses peuvent être
modifiés

Etape 6. Désinfecter le site de ponction

Il existe différents types d’antiseptiques, le choix de celui-ci doit tenir compte :
- de l’analyse demandée, en raison des effets secondaires de l’antiseptique
- du confort du patient
Etape 7. Réaliser la ponction veineuse
Etape 8. Terminer le prélèvement et comprimer le site de ponction
Toujours retirer le dernier tube du corps de prélèvement avant de retirer l’aiguille de la
veine lentement et avec Précautions.
Comprimer le site de ponction (ou le faire comprimer par le patient) avec un coton
jusqu’à formation d’un clou hémostatique soit 5 minutes au moins (ce temps de
compression est allongé si le patient est sous anticoagulant ou anti-agrégant
plaquettaire).
Etape 9. Eliminer le matériel de ponction
L’élimination de l’aiguille doit être effectuée dans un container adapté conforme à la
législation en vigueur.
Etape 10. Poser un pansement
Etape 11. Identifier les tubes de prélèvement
Une étiquette avec l’identité du patient, la date du prélèvement et l’heure de
prélèvement doit être apposée sur le tube contenant l’échantillon à analyser.
L’étiquetage des récipients contenant l’échantillon doit être réalisé au moment du
prélèvement par la personne ayant réalisé le prélèvement.

Etape 12. Viser l’ordonnance ou la fiche de prélèvement

Etape 13. Transmettre les tubes et le dossier patient pour analyses
selon la Procédure établie

Le temps des analyses médicales :

Certaines analyses sanguines nécessitent d'être à jeun, c'est-à-dire de ne rien manger ni
boire (sauf de l'eau) au moins 8 heures avant, Il est préconisé d'être à jeun de 12 heures
pour les analyses suivantes :
 Bilan lipidique (cholestérol, HDL, LDL, triglycérides)
 Glycémie
 Métabolisme du fer, folates, bilirubine.
 Test respiratoire

Les prélèvement Céphalo-rachidien LCR :

LCR : liquide produit principalement par les plexus choroïdes qui filtrent le sang, il est
résorbé par les villosités arachnoïdiennes, les parois des ventricules et les enveloppes
des nerfs spinaux. Le LCR baigne le cerveau et la moelle épinière.
Le LCR contient des anticorps et possède une certaine activité antibactérienne.
S'il n'y avait pas de liquide céphalo-rachidien, il se produirait deux choses : d'abord le
système nerveux n'aurait aucune cohérence centrale : la colonne de liquide
céphalorachidien (LCR) qui circule en son centre constitue une sorte de mât,
d'armature centrale qui permet aux structures molles que représentent les hémisphères
cérébraux, le cervelet, le tronc cérébral et la moelle épinière, de résister à la pesanteur.
La deuxième raison d'exister du liquide céphalo-rachidien est un maintien extérieur
grâce aux méninges dans lequel il circule, et une protection mécanique contre l'os par
lequel il est contenu. C'est donc un rôle d'amortisseur.
Par ailleurs, il a un rôle de défense contre les infections grâce aux rares globules blancs
qu'il contient
La ponction lombaire est demandée en cas de suspicion d’affections impliquant le
système nerveux central comme les méningites (voir notre article sur les symptômes de
la méningite) ou certaines affections encéphaliques (méningo-encéphalites, abcès
cérébraux, myélites). Les changements provoqués par une maladie du système nerveux
sont détectés plus tôt dans le LCR que dans le sang.

Matériel et méthode

4.Les analyse biochimiques

4.1. Bilan glucidique
4.1.1. Principe
Glucose oxydase (GOD)catalyse l’oxydation de glucose en acide gluconique. Le
peroxyde d’hydrogéné produit se détecte avec un accepteur chromogène, phénol,4-
aminophénazone(4-AF), en présence de la peroxydase (POD).

4.1.2. But de la glycémie

Le dosage du glucose est demandé en présence de symptômes évocateurs d’une
hyperglycémie ou d’une hypoglycémie. Cet examen est aussi prescrit pendant la
grossesse.la mesure de la glycémie est un examen de routine chez les personnes
diabétiques pour surveiller régulièrement leur taux de sucre et éviter ainsi les
complications, notamment d’ordre vasculaire.
Echantillon :
Le sang prélevé sur fluorure de sodium (tube gris) afin d’inhiber la glycolyse
En absence de fluorure, le glucose plasmatique diminue d’environ 5% par heure dans
du sang.
L’hémolyse invalide le test. En peut utiliser tube héparine (vert).

4.2.3. Matérielle utilisé :

Centrifugeuse Les tubes héparine (contienne le sérum)
L’étuve les tubes sec (pour fait le test)
Spectrophotomètre Micropipette et les emboues
4.2.4. Les réactifs : le tableau 15 représentées réactifs utilisés dans le dosage de
glycémie :
Tableau 15 : les réactifs de dosage de glycémie. (Prospectus
Chromates) :
Les réactifs Les compositions Les concentrations
R TRIS PH=7.4 100 mmol/l
Phénol 5 mmol/l
Glucose oxydase >10KU/l
Peroxydase >2KU/l
Amino-4-antipyrine 0.5mmol/l

Standard Glucose 100 mg/dl

NB : facteur de conversion :

g *2.58=m mol
m mol * 0.387= g

4.2.5.Mode opératoire :
Mettre le sang aprèse le prélèvement dans un tube héparine ensuite centrifuger à
4000t/min pendant 20 min ensuite récupérer le plasma.
On utilise 3 tubes secs :
Blanc
Standard
Echantillon
Selon le tableau 16 :
Tableau 16 : dosage colorimétrique de glycémie. (Prospectus
chromates)
Blanc Etalon Echantillon
Solution de 1 ml 1 ml 1 ml
travail
Etalon - 10 ul -
Echantillon - - 10 ul

Agiter bien les tube avant l’incubation à l’étuve qui doit être effectué pour 10 min à
37°C ou 30 min à 20-25°C, on fait le rinçage de spectrophomètre par l’eau distillé,
calibre par le blanc, confirmer par l’étalon, puis lire la valeur de l’échantillon.
4.2. Le bilan lipidique
4.2.1.Dosage le cholestérol total
4.2.1.1. Principe
Cette méthode de mesure de cholestérol total implique l’utilisation de 3 enzymes :
cholestérol estérase (CE), cholestérol oxydase (CO), peroxydase (POD) en présence de
ce dernier, le mélange de phénol et du 4-aminoantipyrine (4-AA) est condensée par le
peroxyde d’hydrogène pour former un colorant quinonéimine proportionnel à la
concentration de cholestérol dans l’échantillon. (Prospectus Chromates).

Cholestérol, estérifié + H2O glycérol + 3 RCOOH

Cholestérol libre + O2 cholesténone + H2O2

2 H2O2 + 46AAP + phénol colorant quinone-imine + 4 H2O

La méthodologie de travail est effectuée selon le prospectus (bio Maghreb)

Echantillon :
Le sang est prélevé sur un tube héparine le matin après 12h de jeune et centrifugé, en
cas de mesure du seul cholestérol total, le jeune n’est pas indispensable. Par contre la
réalisation d’un bilan lipidique complet le jeune est indispensable.

4.2.1.2 Matérielle utilisé :

Centrifugeuse Les tubes héparine (contienne le sérum)
L’étuve Les tubes sec (pour fait le test)
Spectrophotomètre Micropipette et les emboues

4.2.1.3. Les réactifs : le tableau 18 représente les réactifs utilisés dans le dosage de
cholestérol total.
Tableau 18 : les réactifs de dosage de cholestérol total. (Prospectus chromates)
Les réactifs Les compositions Les concentration
R1 TUYAUX ph =7 200 m mol/l
Phénol 4 m mol/l
Cholestérol oxydas >250 U/l
Cholestérol estérase >250 U/l
Peroxydas >1 KU/l
4-AA 0.33 mmol/l
Standard cholesterol 200 mg /dl

4.2.1.4. Mode opératoire :

Mettre le sang après le prélèvement dans un tube héparine ensuit centrifuger.
Perte les réactifs et échantillon (plasma héparine), on utilise 3 tubes secs :
Blanc
Standard
Echantillon
Selon le tableau 19 :
Tableau 19 : dosage de cholestérol total. (Prospectus chromastest)
Blanc Etalon Echantillon
Solution de 1 ml 1 ml 1 ml
travail
Etalon - 10 ul -
Echantillon - - 10 ul

Mélanètre et incuber les tubes pendant 5-10 min à température 37°C.

On fait le rincage de spectrophotom par l’eau distillé, calibrer par le blanc, confirmer
par l’étalon, puis lire la valeur de l’échantillon à 505 nm.

4.2.2.Dosage les triglycérides

4.2.2.1 Principe
Triglycéride + 3 H2O glycérol + 3 RCOOH
 Glycérol + ATP Glycérol-3-phosphate + ADP

Glycérole-3-phosphate + O2 dihydroxyacétone-phosphate + H2O2

H2O2 + Chromogène quinonéimine

Bilan protéique
4.3. Bilan rénale
4.3.1. L’urée
4.3.1.1. Principe du dosage
L’urée est hydrolysée en ammoniaque et CO2 par l’uréase. L’ammoniaque formée
réagit avec l’alpha-cétoglutarate et le NADH en présence de glutamate déshydrogénase
pour former du glutamate et du NAD+. La vitesse de disparition du NADH est
proportionnelle a la concentration en urée et est mesurée par spectrophotométrie.
L’urée est dosées cinétique selon la réaction suivante :

Uréase

Urée+H2O 2NH3+CO2

Lésions ammonium, en présence des réactifs de salicylate et d’hypochlorite de sodium

réagissent en formant un composé de couleur vert (Dicarboxylindophynol) dont
l’intensité est proportionnelle à la concentration en urée

4.3.1.2. But de dosage de l’urée

Le dosage de l’urée permet, avec d’autres mesures, d’évaluer la fonction rénale,
particulièrement la présence d’une insuffisance rénale.il est aussi prescrit pour
surveiller la fonction rénale des personnes atteintes de diabète ou ayant subi un
infarctus du myocarde.

 La méthodologie de travail est effectuée selon le prospectus (bio

Maghreb)
Echantillon : Le dosage est effectué sur plasma recueille sur tube héparine.
4.3.1.3.Les matérielle utilisé :
Centrifugeuse. Cuvette
L’étuve Les tubes sec (pour fait le test)
Spectrophotomètre. Micropipette et les emboues

4.3.1.4. Les réactifs utilisés :

Le tableau 23 représente les réactifs utilisés dans le dosage de l’urée dans le sang
Tableau 23 : Les réactifs de dosage de l’urée.

Les réactifs Les compositions Les concentrations

R1 Uréase >500 U/ml
R2 Phosphate PH=6.9 20 mmol/L
EDTA 2 mmol/L
Salicylate de sodium 60 mmol/L
R3 Nitroprussiate de 3.4 mmol/L
sodium 150 mmol/L
NaOH 10 mmol/L
Hypochlorite

Standard Urée 50 mg/dl

Méthode du dosage de l’urée

Faire un prélèvement sanguin d’un malade dans un tube hépariné (bouchon vert)

Centrifugé l’échantillon (4000toure /10min)

Prendre avec micropipette 1000ul de réactif (1) +10 ul de sérum

 (Sérum réactif 1)

L’ajout de 1000 ul de réactif (2) avec la solution incubée

Mesuré avec le spectrophotomètre et lire les résultats lorsqu’on remarque

changement de couleur entre jaune et selon la concentration

Diagramme représente la méthode de dosage de l’urée le sange

4.3.2. La créatinine
4.3.2.1. Principe

Dosage de la créatine se fait par une méthode cinétique dont le sang, La créatinine
forme en milieu alcaline avec l’acide picrique un complexe coloré (méthode de dosage
enzymatique et colorimétrique) la vitesse de formation de ce dernier est proportionnelle
a la concentration de créatinine.
Créatinine + Acide picrique complexe créatinine-picrate

4.3.2.2. But de dosage de créatinine

Le dosage de la créatine dans le sang permet une meilleure recherche des effectuions,
rénales et un contrôle de la fonction rénale. Cette mesure de la clairance de la
créatinine permet une bonne appréciation du taux de filtration glomérulaire (GFR).

 La méthodologie de travail est effectuée selon le prospectus (bio

Maghreb
4.3.2.3. Matérielle utilisé :
Centrifugeuse. Cuvette
L’étuve Les tubes sec (pour fait le test)
 Spectrophotomètre. Micropipette et les emboues

4.3.2.4. Les réactifs utilisés :

Le tableau 23 représente les réactifs utilisés dans le dosage de la créatinine dans le sang
Tableau 23 : Les réactifs de dosage de créatinine dans le sang
Les réactifs Les compositions Les concentrations
R1 Acide picrique 25 mmol/l
R2 Hydroxyde de sodium 300 mmol/l
Standard Créatinine 2 mg /dl

4.3.2.5.Mode opératoire :
4.3.2.5.1. Stabilité du réactif de travail :
-Mélanger les deux flacons de R1 et R2 (V à V) la solution obtenu et le réactif du
travail.
-Le réactifs du travail et stable à 7 jours dans un T 15 à 25 °C.
4.3.2.5.2.Procédure :
On utilise 2 tubes secs :
- Standard.
- Echantillon.
Selon le tableau 27
Tableau 27 : dosage de créatinine. (Prospectus Cromatest)

Les Réactifs Etalon Echantillon

Réactif de travaille 1 ml 1 ml
Etalon 100 ul -
Echantillon - 100 ul

- On mélange bien les tube et incubes 5 min à T ambiante.

- Ajuste le zéro du spectrophotomètre par l’eau distillé.
- On règle la langueur d’onde à 510.
- Calibrer par étalon après lire la valeur de l’échantillon.

4.3.3.Chimie des urines :

4.3.3.1. Principe de dosage :
Les bandellettes réactives sont constituées d’un support en plastique rigide sue lequel
sont fixée différent zones réactives séparées les autre, toutes les zone réactives sont
prolongés dans la solution et retirées immédiatement après. Et la lecture se fait en
comparent la couleur des zones réactive avec celle des témoins figurant sur l’échalle,
colorées .

4.3.3.2. Mode opératoire :

-Recueillir des urines dans un récipient propre et sec.
-Plonger toutes les zones réactives de la bandelette dans l’urine fraichement émise, non
centrifugée, et l’en retirer immédiatement.
-Tapoter la tranche de la bandelette sur le bord du récipient afin d’éliminer l’excès
d’urine.
-Comparer attentivement les zones réactives aux échelles colorimétriques
correspondantes de l’étiquette du flacon. Approcher la bandelette très près des blocs de
couleur et comparer rapidement.
Le respect des temps de lecture est essentiel pour obtenir des résultats corrects.

4.4. Le bilane hépatique

4.4.1. Les transaminase (TGO)
4.4.1.1. Principe
L’aspartate amine transférase (AST), initialement appelée transaminase glutamate
oxaloacétique (GOT) catalyse le transfert réversible d’un groupe Animique de
l’aspartate vers l’alpha-cétoglutarate a formation de glutamate et d’oxaloacétate.
L’oxaloacétate produit est réduit en malate en présence de déshydrogénées (MDH) et
NADH :
ASAT
L-Aspartate + 2-oxoglutarate L-glutamate + oxaloacétate

MDH
 Oxaloacétate + NADH + H+ L- malate + NAD+
La vitesse de réduction de la concentration en NADH au centre, déterminée photo
numériquement, est proportionnelle a la concentration catalytique d’AST dans
l’échantillon.

 La méthodologie de travaille est effectuée selon le prospectus (bio

Maghreb)
Echantillon : L’analyse est réalisée sur plasma hépariné
4.4.1.2. Les réactifs utilisés :
Les réactifs utilises sont regroupés dans le tableau 28 ci -dessous.

Tableau 28 : Les réactifs utilisés dans le dosage de TGO

R1 (substrat Tampon tris PH=7.8 121 mmol/l

ASAT) L- aspartate 362 mmol/l
MDH
>460 U/l
R2 (coenzyme NADH 1.3 mmol/l
ASALT) 2-oxaloacetat 75 mmol/l

4.4.1.3. Mode opératoire :

On mélange 4 ml de réactif R1 et 1 ml R2 la solution obtenu (solution de travaille ) et
stable 4 semaines à 2-8°C stoker la réactive du travail à l’abri de la lumière.
On suivi le tableau 29 :

Tableau 29 : dosage de taux de TGP.

Réactif de travail 1 ml 1 ml
Echantillon 50 µl 100 µl
Température de 37°C 30°C
réaction

On mélanger bien et on incube 1 mn et lire l’absorbance initial répéter la lecture et

mesurer la diminution de densité optique par automate.

4.4.2. Transaminases glutamique-pyruvique (TGP)

4.4.2.1. Principe
 L’alanine amine transférase (ALAT)initialement appelée transaminase Glutamique
pyruvique (GPT) catalyse le transfert réversible d’un groupe animique d’alanine vers
l’alpha-cétoglutarate a formation de glutamate et de pyruvate. Le pyruvate produit est
réduit en lactate en présence de lactate déshydrogénase (LDH) et NADH-

ALAT
L-Alanine + 2-oxoglutarate L-Glutamate + pyruvate

LDH
Pyruvate + NADH+H+ L-Malate + NAD+
La vitesse de réduction de la concentration en NADH au centre, déterminée
photométriquement, est proportionnelle a la concentration catalytique d’ALT dans
l’échantillon

 La méthodologie de travail est effectuée selon le prospectus (bio

Maghreb)
4.4.2.2. Les réactifs utilisés :
Les réactis utilisés dans le dosage de TGP sont présenté dans le tableau

Tableau 30 :les réactifs utilisés dans le dosage de

TGP

R1 (substrat Tampon tris PH=7.3 15 mmol/l

ALAT) L-Alanine 750 mmol/l
LDH >1350U/l
R2 (coenzyme NADH 1.3 mmol/l
ALAT) 2-oxaloacetat 75 mmol/l

4.4.2.2. Mode opératoire :

4.4.1.3. Mode opératoire :
On mélange 4 ml de réactif R1 et 1 ml R2 la solution obtenu (solution
de travaille ) et stable 4 semaines à 2-8°C stoker la réactive du travail
à l’abri de la lumière.
On suivi le tableau 31:
Tableau 29 : dosage de taux de TGP.
 Réactif de travail 1 ml 1 ml
Echantillon 50 ul 100 ul
Températeur de 37°C 30°C
réaction

4.4.3. La bilirubine
4.4.3.1. Principe
La mesure du taux de bilirubine, un composant organique formé durant le processus
normal ou anormal de destruction des globules rouges, est utilisée dans le traitement et
le diagnostic
Des désordres du foie, hémolytique, hématologique et métabolique, y compris
l’hépatite et l’obstruction de la vésicule biliaire ; il est mesuré par méthode
colorimétrique. La bilirubine totale est liée à l’albumine, par la réaction avec l’acide
sulfanilique diazote

5.Le bilan hématologique

5.1. Formule numération sanguine (FNS)
5.1.1. Principe
Hologramme permet de déterminer la nature des cellules présentes dans le sang, de les
quantifier et d’évaluer certains paramètres sanguins.

5.1.2. But de réalisation d’un FNS

Il est également prescrit en cas de suspicion d’anémie ou d’infection, ou pour vérifier
l’état nutritionnelle, l’exposition a des substances toxiques et même pour le patient
souffre de symptômes liés à une maladie du sang (hématomes, fatigue, douleurs
osseuse spâleur…)
5.1.3.Matériel utilisés :
Automate « Hémogramme »
Les méthodes manuelles : lame, lamelle, capillaire, microscope optique
L’échantillon : sang total prélevé sur anticoagulant EDTA.
Les réactifs (colorants) : May Grunwald Giemsa (MGG), Giemsa.

5.1.4. Mode opératoire :

a)- Méthode automatique :
-Prendre un tube avec sang total bien agité.
-Cliquer sur le bouton « start » bien rendre l’appareil en marche.
-Cliquer sur « messuring » pour l’insertion attendre jusqu’à afficher sur l’écran insérer
échantillon.
-Introduire le tube de sang totale à travers l’orifice ce dernier aspire sang totale puis
retirer le tube après quelques seconde les résultats sont affichés sur l’écran.
-Enregistrer les résultats et imprimer.
b) -Méthode manuelle :
-Déposer à 1 cm de l’extrémité d’une lame parfaitement propre, une goutte de sang à
l’aide d’un capillaire.
-Placer le bord de la lamelle à étalement en contact avec la lame, à proximité de la
goutte de sang.
-Faire glisser lamelle inclinée à 45°Csur la lame jusqu’à atteindre la goutte de sang. Le
sang s’étend par capillarité sur toute la largeur de la lamelle.
-Tirer la lamelle d’un mouvement régulier et rapide. Il faut conserver l’inclinaison et
ne pas trop appuyer sur la lamelle. Tout le sang doit être étalé d’atteindre le bout de la
lame.
-On colore avec MGG, car cette coloration donne de bons contrastes lors de
l’observation.
-On laisse sécher la lame. Attendre au moins 5 min avant l’examen microscopique des
frottis.

5.2. Le groupage sanguin

5.2.1 Le principe
Lorsqu’un corps étranger ou antigène (AG) est introduit dans notre organisme (organe
non compatible, sang anisogroupe, bactérie, virus, pollen…), notre système
immunitaire fabrique un anticorps (AC) capable de la neutraliser. Les réactions sont
complexes et mettent en jeu de nombreux éléments : polynucléaire, lymphocytes,
complément … En ce qui concerne le sang, les 4 groupes A, B, AB et O sont
déterminés par la présence ou l’absence de 2 protéines agglutinogènes, jouant le rôle
d’antigènes, a la surface des hématies et appelées A et B.
Pour le Rhésus est otalement indépendant de ces groupes. 85% des humains ont cette
protéine (agglutinogène) et sont Rh+ (DD ou Dd). 15% ne l’ont pas et sont Rh- (dd).
On utilise un sérum anti Rh (ou anti-D) pour la détermination. A noter cependant que
les anticorps anti Rh n’existent pas de façon naturelle dans le sang.
Remarque : sur les hématies de tous les groupes existe la substance H. Sur un groupe A
« fort », (ou B « fort » ou AB « fort »), il y en a très peu => anti H – Sur un groupe A
« faible », il y en a plus => anti H +. Chez une personne O : ni A, ni B =>uniquement H =>anti
H +. Anti H est + chez tous les O, mais n’est pas caractéristique de ce groupe.
 5.2.2. But de réalisation d’un groupage sanguin
La détermination du groupe sanguin est réalisée avant toute transfusion sanguine ou
don de sang. En effet, l’injection de produit sanguin d’un donneur non compatible avec
le groupe sanguin du receveur peut entrainer des accidents transfusionnels dramatiques.
Chez les femmes enceintes pour déterminer le risque d’avoir une incompatibilité
Rhésus entre la mère et le fœtus
 Les analyses hématologiques de l’inflammation

L’échantillon : sang total prélevé sur anticoagulant EDTA.

Les réactifs :
Le tableau … : les réactifs utilisés pour le test ABO + Rhé

R1 Anti-A
R2 Anti-B
R3 Anti-D

5.2.3. Mode opératoire :

Déposer 3 gouttelettes de sang dans une plaque puis anti-A,
Anti-B, anti-D sur chaque goutte, attendre quelques minutes puis lire les résultats. La
figure ... ci -dessous présente le résultat du test ABO-Rhésus durant la manipulation.

Figure … : le résultat du test ABO + Rh.

5.3. Hémostase
5.3.1. Principe de taux de prothrombine (TP)
Reposant sur le test d’A. Quick, l’essai mesure le temps écoulé jusqu’à la formation du
coagulum après avoir mélangé du plasma avec de la thromboplastine a 37°c (un extrait
de tissu riche en facteur tissulaire, phospholipides et calcium ) : la coagulation
commence avec l’activation du FVII avec le facteur Tissulaire. Le TQ mesuré pourra
entre converti en taux de prothrombine ou en (INR).

5.3.2. But de taux de prothrombine

Le temps de Quick est un test global qui explore la coagulation extrinsèque

Matériel utilisé :
-Analyseur de coagulation automatique.
-Papier millimétré.
-Micropipette.
-Bulle d’agitateur.

Les réactifs :
Tableau ... : présente les deux réactifs utilisé pour ce dosage
R1 Thromboplastine
(thromboplastine lyophilisée)
R2 Tampon de reconstitution
(tampon HEPES ,conservateur)

Méthode du dosage de (TP)

Prélèvement du sang dans un tube citraté bouchon bleu

Centrifugation (4000toure /10 min)

Avec micropipette on prend 100 ml de sérum dans bain-marie pendent 2 min

On prend avec micropipette 200 ml de réactif et faire ajiration jusq’a coagulation

 (Sérum + réactif)

Lire le TQ par seconde avec chronomètre

Lire le pourcentage de TP et le INR par le tableau

Diagramme représente méthode de réalisation de taux de prothrombine

6.BIilan Protéique
6.1 Ionogramme :
6.1.1 Principe
La principale technique est le potentiomètre utilisant une électrode sélective aux ions
(ISE), spécifique de l’électrolyte dosé ( mesuré de la différence de potentiel créée par
la solution contenant les ions de référence ).

Echantillon : sang prélevé avec garrot laissé moins d’une minute. Le tube de
prélèvement peut éventuellement contenir un anticoagulant «  citrate de sodium ».

6.1.2. Matériel utilisé :

Centrifugeuse micropipette
Potentiomètre Les tubes

6.1.3. Mode opératoire :

La méthode automatique :
Le sang recueilli doit être rapidement centrifugé, on récupère 100 ml du plasma on le
met dans une cuve après, on fait le test par le potentiomètre et on imprime les résultats
du dosage pour les trois ions (Cl+, Na 2+, K+)

7. Les examens sérologiques

7.1. La protéine réactive C (CRP)
7.1.1. Principe
Le CRP LATEX est un test rapide au latex pour la recherche de la Protéine C Réactive
(CRP). Les particules de latex, sensibilisées avec des anticorps spécifiques de la CRP
humaine, sont agglutinées en présence de sérum de patient contenant la CRP.
7.1.2. But d’examen de la CRP
Pour évaluer l’activité de l’inflammation et pour surveiller l’efficacité du traitement.
La CRP est également utilisée lors de la surveillance des patients après une
intervention chirurgicale ou d’autres actes invasifs, afin de détecter la survenue d’une
éventuelle complication infectieuse postopératoire.

Méthode du dosage de la CRP

Prélèvement sanguin dans un tube hépariné (bouchon vert)

Centrifugation (4000 Toure/10 min)

Pendre 50 ul d’échantillon avec micropipette

Agiter légèrement le flacon de réactif avant l’utilisation

Déposer une goutte de réactif CRP sur l’échantillon

Mélanger avec un agitateur unique pour chaque échantillon

Faire tourner la carte pendant 2 min pour bien mélanger

Observation à l’œil la présence ou absence d’agglutination

Diagramme représente mode de réalisation de CRP

7.2. Antistreptolysine O (ASLO)

7.2.1. Principe
Mise en évidence des anticorps antistreptolysine O (ASLO) par réaction
d’agglutination sur carte de particules de latex sensibilisées par de la streptolysine O
stabilisée. Le réactif est standardisé par rapport à l’étalon de l’O.M.S.
Méthode du dosage d’ASLO

Prélèvement du sang dans un tube hépariné (bouchon vert)

Faire une centrifugation (4000 Toure / 10 min )

 Sur le cercle du plaque ; mettre 50 ul de sérum du malade avec une
micropipette
Déposer une goute de réactif (ASLO)sur l’échantillon

Mélanger légèrement avec agitateur avec un usage unique pour chaque échantillon

Faire tourner la plaque pour bien mélanger pendent 2 min

Observer à l’œil la présence ou l’absence d’agglutination

Diagramme représente mode de réalisation (ASLO)

résultats et discussion
 Résultats et discussion

1. Les analyse biochimique

1.1 Résultates du dosage d’un bilan glucidique
1.1.1. Le bilan glucidique
Les résultates de la bilan glucidique sont en g/l dont, le nombre de malade et le sexe
ainsi que les normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)
Tableau .. : Résultats de la glycémie veineuse
Normes de glucose dans le sang 0.7-1.1 g/l
Sexe Femme
Homme
Patient 01 02 03
04
Résultats 0.5 2.4 3.26
0.90

Discussion des résultats

Le patient 04 est dans les valeurs normales de la glycémie se qui montre que cette
personne est saine.

Pour le patient 01 a une valeur basse que les normes alors une hypoglycémie. Cette
hypogllycémie peut être un singe de :
-Insuffisant thyroidienne, un état pré diabétique, un diabète mal équilibre , elle peut
être provoque par : un effort physique.

Pour les 2 autres patient 02 et 03 on a un taux élevé de glucose dans le sang qui est
unee hyperglycémie. Cette hyperglycémie peut être le sing :
-d’un diabète sucré (diabète de type 1, diabète de types 2) ;
-d’un diabète sucré secondaire à une lésion du pancréas pacréatite aigue chronique,

D’un état de choc, de stress, de brulures étendues,de traumatismes, de fièvre ; d’une

insuffisance rénale.
 1.2. Résultats du dosage d’un bilan lipidique
1.2.1. Le cholestérol total
1.2.2. Les résultates de cholestérol sont en g/l dont, le nombre de malade et le sexe ainsi que
les normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)
Tableau… résultats de dosage du cholestérol total

Sexe Homme Femme

Les nombres du 1.7-2.4 g/l (4.4-6.2
cholestérol mmol/l
Patients 1 2 3
4
Résultats 1.56g/l 2.61 g/l1.97g/l
1.80g/l

Discussion des résultats

On remarque que les patient 2 et 4 sont des cas normaux présent un taux dans
l’intervalle des normes du cholestérol
Le patient 03 représente un taux élebè du cholestérol total principales causes
d’augmentation du cholestérol :
-Apports alimentaires riches en graisse saturée (cause principale) ;
-Hypothyroide, syndrome néphrotique, diabète sucré, cirrhoses biliaires, traitement par
antiprotéase ; troisième trimestre de la grossesse.
-L’age (le taux de cholestérol augmente avec l’age)
Le patient 1 représente un taux inferieur au normes du cholestérol principales causes de
baisse du cholestérol :
-malnutrition.
-hyperthyroidie, insuffisances hépatiques sévères, sida.
-fièvre, inflammation.
-déficits en lipoprotéique de transport.
1.2.3. Les triglycérides (TG)
Les résultates des triglycérides sont en g/l dont, le nombre de malade et le
sexe ainsi que les normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans le
(Tableau..)
Tableau.. : Résultats de dosage des triglycérides

Sexe Hommes Femmes

Les normes du T.G 0.52-1.50 g/l
(0.60-1.70 mmol /l)
Patient 1 3
2 4
Résultats 1.11g/l 2.00g/l
0.40g/l 1.96g/l

Discussion les résultats

Pour les cas 3 et 4 on remarque un taux supérieur aux normes des triglycérides cette
valeur se rencontrent :
Une anomalie génétique héréditaire
De mauvaises habitudes alimentaires avec par exemple une consommation
excessive de graisses, et de sucres.
Des troubles métaboliques dont le diabète, le surpoids et l’obésité les hyper et les
hypothyroidies la goutte les maladies hépatique, les pancréatites aigue, la néphrose
lipoidique…
La prise de certains médicament tels que des corticoïdes, des antipsychrotiques ou
encore des antétroviraux.

Le patient 02 représente un taux normale des triglycérides c’est un cas sain.

1.3. Résultats du dosage d’un bilane protéique

1.3.1. Bilan rénal

1.3.1.1. L’urée

Les résultats de l’urée sont en g/l dont, le nombre de malade et le sexe ainsi que les
normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau.)

Tableau : Résultats du dosage de l’urée sanguin

Sexe Femme Homme

Normes de l’urée 0.10à 0.50g/l
dans le sang (2.5 à 10 m
mol/l)
Patient 1 3
2 4
Résultats 0.53g/l 0.14g/l
0.35g/l 0.6g/l

 Discussion des résultats

 1.3.1.2. La créatinine
Les résultats de la créatinine sont en g/l dont, le nombre de malade et le sexe ainsi que
les normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau.)
Tableau .. : Résultats de dosage du la créatinine.

Les malades Femme Homme Les normes

Créatinine 20.50 8 6-14 mg/l

 Discussion :
D’après les résultats ; Femme 1,le taux de créatinine est supérieur aux normes. Les
causes d’augmentation de la créatinine peuvent être classées en causes pré rénales et
rénales. cette taux élevé se signifie que ;
-chez les personne souffrent d’une de ces pathologie : leucémie, goutte, hyperthiroidie,
acromégalie, hypertension artérielle et insuffisance cardiaque.
-chez les femmes enceintes de prééclampsie (augmentation de 25 % )
-Chez les personnes déshydratées.
-Chez les personnes souffrant d’épuisement physique ou d’une blessure musculaire.
Et chez l’homme, le taux de créatinine est dans les normes qui signifie il est saine.
Chimies des urines
Les résultats des chimies des urines sont en g/l dont, le nombre de malade et le sexe
ainsi que les normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)

Tableau… : Résultats de chimies des urines

Les Glucos Protéine Sang PH cétone
composent e
Les - ++++ ++ -- -
résultats +

Discussion :
Pore le paient le taux de glucose et le PH , cétone les résultats normales, on noter la
présence des traces de protéines et de sang cela s’expliqué la présences d’élimination
urinaire des protéines et le sang ; donc le maladie peut être attente par une néphropathi

Bilan hépatique
Dosage transaminases :
Les résultates des transaminases sont en UI/l dont, le nombre de malade et les normes
usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)
Tableau… : Résultats des dosage de transaminase.
Les TGO:15-
normes du 40 UI/l
TGO et TGP:10-
TGP 41 UI/l
Patient 1 2 3 4
Résultats TGO :65 TGO : 58 TGO : 30 TGO : 25
UI/l UI/l UI/l UI/l
TGP : 42 TGP : 20 TGP : 18 TGP :60
UI/l UI/l UI/l UI/L

Discussion:
-Chez le patient 1 on observe une augmentation parallèle de la TGO et de la TGP
reflété l’étendue de la cytolyse hépatique dans les hépatites infectieuse virale ou
toxique.
-Chez le patient 2 on remarque une valeur élevée TGO seulement ce que indique :
 Ce taux sanguin élevé en ASAL est généralement lié à un infarctus du myocarde
ou à une insuffisances cardiaque. Cependant, il a été constaté que certaines situation
sont également associées à une augmentation du taux de l’ASAT dans le sang
-Chez le patient 3 le taux de TGO et TGP est dans les normes qui signifie il est saine.
-Chez le patient 4 représenté une valeur normale de TGO par contre un taux élevé de
TGP ;
Le taux sanguin d’ALAT est alors élevé en cas d’une destruction de cellules
hépatiques, entrainant alors la libération de l’ALAT dans la circulation sanguine.

La bilirubine (BI/BT/BD)
Les résultats de la bilirubine sont en mg/l dont, le nombre de malade et les normes
usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)

Tableau … : Résultats du dosage la bilirubine

Les normes du BD< 2 mg /l <4µmol/l

bilirubine BI <10 mg/l <17µmol/l
BT <12 mg/l <20µmol/l
Les patient 1 2
Résultats BD 4.3 mg /l BD 1.4 mg /l
BI 12.1 mg/l BI 6.2 mg/l
BT 8 mg/l BT 4.7 mg/l

Discussion et résultats
-le patient 1 représenté un état anormal de la bilirubine direct et indirect (valeur élevé)
revient aux :
Une augmentation de la bilirubine conjuguée direct peut être li singe :
Une atteinte hépatique (cirrhose, hépatite, alcoolique, tumeur
hépatique, hépatite toxique.

L’augmentation de la bilirubine libre indirect peut indiquer :

D’une anémie hémolytique (destruction massive des globules rouges)
 Pour la bilirubine totale a une valeur dans les normes
-le patient 2 c’est une personne saine a des valeurs de la bilirubine (BD/BT/BI) dans
l’intervalle des normes.

Les analyses hématologie

Formule numération sanguin (FNS)
Les résultats des transaminases sont en UI/l dont, le nombre de malade et les normes
usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)

Tableau… : Les résultats de formule numération sanguin (FNS).

Femme Valeur de
Homme références
Hématies 2.50 mm3 5.50 (3.9/5.5)*10^6/µl
mm3
Leucocytes 4.90 mm3 14 mm3 (5.2/13.9)*10^3µl
Hémoglobine 10.38 g/dl 17.3 (11.0/17.0)*10^3µl
mm3
Plaquette 100 mm3 400 mm3 (150/500)*10^3µl
VGM 91 µ3 87.8 µ3 (80/105)
TCMH 27pg 31 pg (27/32)
CCMH 29g/dl 35 g/dl (30/37)

Discussion et résultats
L’homme : L’analyse montre une baisse du nombre de globules rouges, inférieur aux
normes, c’est une anémie elle peut avoir plusieurs causes : une hémorragie, destruction
excessives des hématies.
La diminution de leucocytes peut évoquer certaine infection virales ou parasitaires,
donc elle est couplés a une diminution de globules rouges, elle apparait en général dans
le cas de maladies affectant la moelle osseuse ou le SIDA.
Représente un taux bas des plaquettes, lorsque leurs taux est trop bas les risques
d’hémorragie sont plus importants. Alors les pathologies les plus fréquente ; les
leucémies aigues, les métastases et la myélofibrose.

Femme : elle présente un taux trop élevé de leucocytes peut correspondre à une
inflammation ou beaucoup plus rarement a une leucémie.
Elle présente aussi un taux d’hémoglobine élevé peut être ce patient soufre d’une
maladie pulmonaire avancée telle que certaines tumeurs. mais les autres paramètres
sont dons les normes.

Groupage sanguin
Le système ABO + Rhésus :
Tableau .. : Les résultats du test ABO + Rhésus
Patient Anti-A Anti -B Anti-D
01 + - +
02 + - -
03 - + +
04 - + -
05 - - +
06 - - -
07 + + +

Discussion :
Réaction positive : les hématies sont agglutines entre elles par l’anticorps
correspondant.
 S’il y a une agglutination avec l’anti A le sang est de groupe A.
 S’il y a une agglutination avec l’anti B le sang est de groupe B.
 S’il y a une agglutination avec l’anti A et l’anti B le sang est de groupe AB.
 S’il y a aucune agglutination avec l’anti A et l’anti B le sang est de groupe O.
 S’il y a une agglutination avec l’anti D le Rhésus est positif.
 S’il n’y pas d’agglutination avec l’anti D le Rhésus négatif.
Bilan sérologique
Résultats du dosage d’un bilan sérologique
La protéine réactive C (CRP)
Les résultats de laprotéine réactive C sont en mg /l dont, le nombre de malade et les
normes usuelles de laboratoire sont rapportées dans (Tableau..)

Tableau … :Résultats de la protéine réactive C

Normes de CRP < 5 mg/l
Patient 01 02
Résultats Positif Négatif

Discussion et résultats :
Le teste négatif pour la personne 02 indique que la personne n’a aucune
infection.
Le test positif pour la personne 01 présence d’une agglutination. Un taux élevé de
CRP dans le sang peut être le signe :
D’une infection bactérienne, d’ une septicémie.
D’une infarctus du myocarde (nécrose ischémique).
D’une maladie inflamatoire (arthrite rhumatoïde, arthrite chronique, une pancréatite
aigue ; vascularités, rhumatisme inflammatoire aigue).

Antistreptolysine O (ASLO)
Les résultats d’antistreptolysine sont en U/ml dont, le nombre de malade et les normes
usuelles de laboratoire sont rapportées dans le (Tableau..)

Tableau … : Résultats d’antistreptolysine O (ASLO)

Normes d’ASLO Inférieur à 200 U /ml
Patient 01 02
Résultats Négative Positive

Discussion et résultats
 Le résultats de patient 01 est négatif (c’est -à-dire dans les normes),cela signifie
que le patient n’a pas été infecté récemment par un streptocoque.
Un résultat positif donne une agglutination se qui montre qu’un taux élevé
d’anticorps ASLO signifie que le patient 02 souffre peut être d’une complication post-
streptococcique un taux élevé d’ASLO aide à confirmer le diagnostic