SOMMAIRE

INTRODUCTION

I- PROBLÉMATIQUE
II- OBJECTIFS
1-OBJECTIF GENERAL
2-OBJECTIFS SPECIFIQUES
III- MÉTHODOLOGIE
1-DESCRIPTION DU SITE DE RECHERCHE
2-ECHANTILLONAGE
3-DUREE D’ETUDE
4- PROTOCOLE

CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
 INTRODUCTION

Au Cameroun, environ 10000 personnes meurent d’une hépatite virale.

Selon l’OMS, le pays fait partie des 17 les plus touchés dans le monde
. Les hépatites les plus répandues sont l’hépatite B, dont le taux de
prévalence ( nombre de personnes infectées) est de 11,9% et l’hépatite
c dont la prévalence moyenne est de 13% soit plus de 2,5 millions de
personnes touchées. Le diagnostic se fait à travers les tests
sérologiques par simple prise de sang pour la recherche des anticorps
et des antigènes du virus de l’hépatite correspondant, mais aussi par
PCR pour la recherche du matériel génétique ( ADN,ARN) du virus
après amplification. Cependant, le problème se pose au niveau de
l’efficacité de chaqu’examen dans le dépistage des hépatites virales. Il
sera donc question pour nous de faire une comparaison minutieuse
entre le test sérologique et le PCR dans le diagnostic des hépatites
virales
 I-PROBLEMATIQUE

Les antigènes des virus des hépatites virales (VHB, VHA, VHC, VHE)
détectables dans le sang sont les marqueurs du virus lui- même. Alors,
lors d’une infection, le système immunitaire du patient va conduire à la
production des anticorps dirigés contre différents parties du virus.
Cependant, la sérologie peut être négative pendant une période allant
jusqu’à trois mois, c’est ce qu’on appelle la fenêtre sérologie, ainsi le
délai de fiabilité d’une sérologie négative est de trois mois après la
prise de risque. Par ailleurs le PCR( Polymérase Chain Réaction)
est une technique d’amplification d’un fagment d’ADN particulier
présent en très faible quantité au départ, elle offre donc le diagnostic
précoce de l’infection. Il se pose donc un problème de fiabilité et
d’efficacité entre ces deux examens de laboratoire. Quel est donc la
meilleure méthode dans le diagnostic des hépatites virales ?

HYPOTHÈSE DE RECHERCHE

Le PCR au détriment des test sérologique pourrait être la

meilleure technique possible dans le dépistage des hépatites
virales.
 II- OBJECTIFS

OBJECTIF GÉNÉRAL

Recherche de la meilleure technique dans le dépistage des hépatites virales(

PCR, test sérologique)

OBJECTIFS SPÉCIFIQUES
- Détailler le protocole d’exécution du test sérologique
- Détailler le principe et le protocole du PCR de l’hépatite virale
- Dénombrer et comparer les avantages et les inconvénients de chaque
pratiques
- A partir de cette comparaison, ressortir la meilleure méthode dans le
dépistage des hépatites virales
III- MÉTHODOLOGIE

1-DESCRIPTION DU SITE DE RECHERCHE

L’HÔPITAL GÉNÉRAL DE YAOUNDÉ

Historique

L’hôpital a été conçu par cacoub et buban Design group et construit

par SBBM & six construct. Il est créé en 1987 dans le cadre d’une
convention de cooperation signée entre la République du Cameroun et
le royaume de Belgique.

Localisation
Il est situé au quartier de Ngousso dans la ville de Yaoundé au
Cameroun.
Services de l’hôpital
L’hôpital dispose de la médecine générale, chirurgie, obstétrique,
gynécologie, pédiatrie. Il possède un centre de dialyse et depuis 2021,
l’hôpital a effectué plusieurs transplantations rénales.
Personnel
Le personnel de l’hôpital se compose en personnel administratif,
personnel soignant, personnel technique et personnel académique. Il
compte 564 employés, répartis comme suit : 70 médecins spécialistes,
plusieurs généralistes, 200 paramédicaux et 200 agents techniques.
 Le 16 novembre 2017, le ministre de la santé publique ANDRÉ
MAMA FOUDA nommé Essomba Asse Auguste en qualité de
président du conseil d’administration de l’hôpital générale de
Yaoundé.
Il couvre une superficie de 20301 mètres carrés et en 2001, il compte
302 lits.

2-ECHANTILLONNAGE

L’étude a porté sur les patients envoyés au laboratoire de l’hôpital

général de Yaoundé pour effectuer le test d’analyse.

Critère d’inclusion
- Âge confondu
- Présence du test de serologie de l’hépatite virale ( B,C,A,D,E)sur le
bulletin d’examen
- Présence du PCR pour l’hépatite virale sur le bulletin de patients
consentants
Critère de non inclusion
- Patients non consentants
- Absence de sérologie et de PCR pour l’hépatite virale sur le bulletin
d’examen
Taille de l’échantillon
Nous avons colligés 150 patients dans le service de l’hôpital
Durée
L’étude se fera sur 3 mois.
En
3-TECHNIQUES ET OUTILS DE COLLECTE

-Etude du fonctionnement du laboratoire du site d’étude

-Si le fonctionnement ne permet pas d’évoluer dans l’étude, se rapprocher du
personnel de laboratoire et suggèrer son propre protocole afin qu’il en tient
compte pour pouvoir avoir accès au matériel nécessaire pour avancer dans la
recherche
-circonscrire l’échantillonnage ( 150 échantillons)

4-PROTOCOLE
a- DESCRIPTION DU TEST SEROLOGIQUE DES HÉPATIQUES
VIRALES

Matériels utilisés

- Gants
- Coton
- Aiguilles (BD vacutaner éclipse, 20G,21G)
- Alcool 90°, solution hydroalcoolique
- Centrifugeuse
- Tube sec( rouge)
- Micropipette
- Ambou
- TDR( Test de Diagnostic Rapide)
- Kit de test ( kit HBV puma, kit HCV Puma, Xpert HCV, Genedrive)

Protocole

- Appeler le patient dans la salle de prélèvement

- Le faire assoir et l’informer du déroulement du prélèvement
- Apprêter son matériel ( coton sec, coton imbibé d’alcool, garrot, tube sec,
aiguille) devant le patient
- Chercher la veine du patient
- Fixer et purger son aiguille
- Faire le garrot en haut du site de ponction, nettoyer avec un coton imbibé
d’alcool)
- Introduire l’aiguille dans la veine en vérifiant que l’ouverture du Bissau
est en avant
- Pousser le piston en arrière pour recueillir le sang
- Retirer le garrot, poser un coton sec sur le lieu de ponction et retirer
l’aiguille de la veine
- Introduire le sang dans le tube sec et conduire au laboratoire
- Au laboratoire, passer le tube de sang dans la centrifugeuse en équilibrant
celui-ci avec un autre tube à même volume, (pendant 5 à 10 min)
- Ouvrir le sachet de TDR
- Fixer l’ambou sur la micropipette et régler à 50ml
- Prélever à l’aide de la micropipette 50 ml du sérum( liquide surnageant du
tube) et l’introduction sur la partie réservée sur le TDR
- Attendre 5 à 10 min
- Si l’on observe un trait rouge, le test est négatif, si l’on observe deux trait
le test est positif
- Lorsque le test est positif, il faut maintenant passer au test de
confirmation( il s’agit ici d’avoir rcours au même protocol en utilisant les
kit de test)
- NB : le test sérologique permet de détecter les anticorps contre le
virus de l’hépatite correspondant tandis que le test de confirmation
permet la détection des antigènes du virus dans le sang.

b- DESCRIPTION DU PCR DES HEPATITES VIRALES

Matériels utilisés

- Thermocycleur : plateau chauffant qui permet de programmer différents

températures pendant des durées différentes.
- tampon( Mgcl2) qui permet de neutraliser les charges négatives des
phosphates de l’ADN
- L’ADN double brin matrice qui est extrait de l’échantillon( sang,
sécrétion vaginales, sperme)
- Les Desoxyribonucleotides tri-phosphates ( dATP, dCTP, dGTP,
dTTP)
- Taq polymérase : enzyme thermorésistante qui permet l’élongation des
brins d’ADN isolée d’une bactérie aquatus qui vit dans les sources
chaudes
- 2 amorces : ce sont des fragments courts d’ADN capables de d’hybrides
de façon spécifique grâce à la complémentarité des bases, sur l’un des
deux brins d'ADN

Étapes

Le PCR( polymérase chain réactive) en français réaction en chaîne de

polymérase est une technique de biologie moléculaire qui permet
d’amplifier de manière spécifique et exponentielle une séquence d’ADN
donné. Les taux d’amplification peuvent atteindre 10^9 et permet donc de
mettre en évidence la présence d’une molécule unique d’ADN ou d’ARN.
Le mélange est introduit dans les tubes à PCR( ADN double brin, tas
polymérase, DnTPs, tampon, amorce) et introduit dans le thermocycleur.
Le PCR comporte 30 à 35 cycles qui est régulé au niveau de l’appareil.
Chaque cycle comporte 3 étapes successives à savoir :
•la denaturation des brins d’ADN : la température optimale est de 94°c
pendant 30s. On passe d’un double brin d’ADN a deux brins simples
d’ADN
•l’hybridation des amorces : les deux amorces vont venir se lier par
complémentarité des bases à chaque brin d’ADN, ensuite un nouveau brin
fils sera synthétisé à partir de l’amorce . La température optimale est de
50-60°c pendant 30s.
•l’elongation : lela tas polymérase va permettre l’élongation du nouveau
brin formé en utilisant les desoxynucleotides tri- phosphates. La
température optimale est celle de l’enzyme qui est de 72°c, le temps de
déroulement dépend du poids des bases, par exemple pur un gène de 3
kilo per de bases, on va programmer l’élongation de chaque cycle à 3
minutes.

Une fois les 39-35 cycles terminés, il t’aura une étape d’élongation finale
à 72°c pendant 5min puis l’arrêt de la réaction à 4 lin. Si on récapitule , on
aura au bout d’un cycle le double de l’ADN initial, au final on aura donc
2^30 soit 10^9 de copies de l’ADN de départ, l’ADN ainsi multiplié
pourra être détecter par électrophorèse sur gel d’acarose.

C- avantages et inconvénients de chaque méthodes

• avantages du test sérologique

- Rapide
- Investissement réduit
 - Moins coûteux
- •incovenients du test sérologique
- Moins fiable avec une possibilité d’erreur allant de 5% à 40 %

• avantages de la PCR
- Spécifique c’est-à-dire recherche une molécule unique
- Fiable
•inconvenient de la PCR
- Investissement important
- Le coût d’analyse est élevé
- L’interprétation est complexe
- La taq polymérase peut intégrer les erreurs lors de l’élongation des brins

d-Comparaison
A la différence de la PCR, le test sérologique ne renseigne pas si le virus
est présent dans l’organisme au moment du prélèvement mais si l’organisme a
été en contact d’un agent pathogène comme un virus, les cellules immunitaires
de l’organisme réagissent et sécrètent des anticorps qui reconnaissent
spécifiquement le virus en l’occurrence. Le test sérologique permet donc de
détecter la présence des anticorps dans le sérum. Cependant, cette méthode
présente des limites dans le sens où car il ne sera pas efficace si le patient avait
déjà été infecté auparavant. Car les anticorps produits par l’infection précédente
demeurent
Le test sérologique peut être fait en pharmacie et ne nécessite pas
beaucoup de temps tandis que la PCR se fait uniquement en laboratoire et
nécessita au moins 24h.
..

CONCLUSION

A la fin de cette étude qui avait pour objectif de faire une

comparaison du test sérologique et du PCR dans le diagnostic
de l’hépatite virale, nous avons pu en ressortir chaque
technique présente des différences flagrante dans le
déroulement de analyses et aussi dans les résultats d’examens.
Le test sérologique permet de détecter la présence d’anticorps
du virus de l’hépatite correspond dans le sang du patient tandis
que le PXR est plus spécifique car il recherche directement le
génome du virus par procédure d’amplification. L’utilisation
de la sérologie est très rapide mais le résultat n’est pas assez
fiable tandis qu’avec le PCR, le déroulement prend du temps
mais les résultats sont meilleurs. Vu dont l’importance de la
qualité des résultats pour un meilleur traitement, il est donc
judiciable d’opter pour la PCR dans le diagnostic des
hépatites virales.

BIBLIOGRAPHIE

- Cohenp. Les hépatites virales Rev presse med.1998, 28

- Buffet, c<<hépatite virale B>> n°3 ( juin 2005)
- Dent, Paul et Jean Nicolas <<Diagnostic virologique
d’une hépatite virale >>.revue française des
laboratoires, 1998 n•308
- www.em- consulté.com,article pcr
- Www.leparisien, société.sante
-