Rapport de stage

Analyse Médicale aux services du

EHS : « HAMDANE BAKHTA » à Saida

Sous la direction de Dr.DAOUDI Zakaria Ahmed

Présenté par : ALLOUCHE MAROUA

*Période de stage : 15 jours*

 Tables des matières

R E M E R C I E M E N T :-----------------------------------------------------------------------------3
LISTE DES FIGURES :---------------------------------------------------------------------------------4
LISTE D’ABRÉVIATIONS----------------------------------------------------------------------------5
I. INTRODUCTION---------------------------------------------------------------------------------6
DÉFINITION DU LABORATOIRES D'ANALYSES DE BIOLOGIE MÉDICALES -------------------6
PRÉSENTATION DE L’ÉTABLISSEMENT:------------------------------------------------------------7
II. LE PRÉLÈVEMENT SANGUIN--------------------------------------------------------------7
MÉTHODE PRÉLÈVEMENT SANGUIN----------------------------------------------------------------7
MATÉRIELS DE PRÉLÈVEMENT----------------------------------------------------------------------7
RÉALISATION DU PRÉLÈVEMENT SANGUIN--------------------------------------------------------7
LES TUBES DE PRÉLÈVEMENTS SANGUINS---------------------------------------------------------8
III. LES ANALYSES EFFECTUÉES AU NIVEAU DU LABORATOIRE DE
BIOLOGIE DE L’EHS HAMDAN BAKHTA:-----------------------------------------------------9
1-PARAMETRES D’HEMOBIOLOGIE-----------------------------------------------------------------9
1-1- FNS :----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 9
1-2-Groupage sanguin (Gs) :------------------------------------------------------------------------------------------- 9
1-3- Bilan d’hémostase :----------------------------------------------------------------------------------------------- 11
2-PARAMETRES DE BIOCHIMIE --------------------------------------------------------------------12
2-1-Bilan glycemique :------------------------------------------------------------------------------------------------- 12
2-2- Bilan rénale:------------------------------------------------------- ----------------------------
14
2-3-Bilan hépatique:-------------------------------------------------------------------------------16
2-4-Bilan lipidique :------------------------------------------------------------------------------------------------------ 19
3-AUTRES PARAMÈTRES :---------------------------------------------------------------------------21
4-SÉROLOGIE :----------------------------------------------------------------------------------------23
IV. APPAREILLAGE--------------------------------------------------------------------------------23
1- AUTOMATE D’HÉMATOLOGIE-------------------------------------------------------------------23
2- AUTOMATE DE BIOCHIMIE-----------------------------------------------------------------------24
3-SPECTROPHOTOMÈTRE---------------------------------------------------------------------------25
4-CENTRIFUGEUSE-----------------------------------------------------------------------------------25
5-BAIN MARIE-----------------------------------------------------------------------------------------26
6- AUTOMATE DE L’IONOGRAMME SANGUIN----------------------------------------------------26
V. CONCLUSION-----------------------------------------------------------------------------------27
 REMERCIEMENT

Avant de commencer la présentation de ce rapport, nous profitons

l'occasion pour remercier du fond du cœur toute personne qui a
contribué de près ou de loin à la réalisation de ce travail, qui est le
fruit d’une période de pratique près de 15 jours.

Mes remerciements vont d’abord à Dr DAOUDI Ahmed Zakaria

l’encadreur de ce stage pour sa patience, sa disponibilité et surtout
ses conseils précieux qui ont alimenté ma réflexion. Toute ma
reconnaissance pour l’excellent directeur pour son engagement et
encouragement.
Je tiens aussi à remercier tout le personnel du laboratoire
 Liste des figures

Fig 1 : Tubes utilisés pour effectuer les analyses biologiques

Fig 2 : Groupe sanguin système ABO

Fig 3 : Réactifs utilisés pour la détermination du groupage sanguin

Fig 4 : Cuve pour automate de biochimie
Fig 5 : Automate d’hématologie
Fig 6 : Automate de biochimie Mindray BS-200
Fig 7 : Spectrophotomètre de biochimie
Fig 8 : Centrifugeuse
Fig 9 : Bain de marie pour l’hémostase
Fig 10 : Automate de l’ionogramme sanguin
 Liste d’abréviations

EDTA : Acide éthylènediamine

Gs : Groupage Sanguin.
FNS : Numération Formule Sanguine.
TP : Temps de Prothrombine.
TQ : Temps de Quick.
INR : International Normalized Ratio.
PCR (CRP) : Protéine C réactive.
Hb : Hémoglobine.
ASLO : Antistreptolysine O.
TGO : Glutamo-Oxaloacétate Transférase.
AST : Aspartate Aminotransferase.
ALT : Alanine Aminotransferase.
TGP : Glutamo Pyruvate Transférase.
VS : Vitesse de sidementation
 I. Introduction
Le stage que j’ai effectué, d’une durée de 15 jours (du 26/03/2023 au
06/04/2023).
Ce stage pratique a consisté à faire une tournée aux différentes unités
au sein du laboratoire d’analyses médicales de la structure hospitalière
spécialisé HAMDAN Bakhta.
Le laboratoire d’analyses médicales assure les prestations de routine et
d’urgence 24h/7j autour des malades hospitalisés.
Le but de ce rapport de stage n’est pas juste pour faire une présentation
complète de tous les aspects techniques que j’ai pu apprendre mais
aussi, d’une façon claire et prolixe, de faire un tour des aspects
humains auxquels j’ai été confronté.
1. Définition du Laboratoires d'Analyses de Biologie Médicales
Un laboratoire de chimie est un local équipé de divers
instruments de mesure où sont réalisées des expériences, des synthèses
de composés chimiques (synthèses organiques ou inorganiques), des
analyses chimiques ou biologiques et des mesures physiques. C'est un
cas particulier de laboratoire de recherche.
Les laboratoires d'analyse médicale ont une activité permettant
d'effectuer un grand nombre d'analyses biologiques (biochimie,
hématologie, hémostase, bactériologie ) Celles-ci aident au diagnostic,
au traitement, à la prévention des maladies humaines, ou font
apparaître une modification de l'état physiologique. Elles sont
effectuées à partir d'échantillons biologiques comme le sang, l'urine, ou
encore les liquides de ponction.
 2. Présentation de l’établissement
Le laboratoire de biologie médicale de l’établissement hospitalier
spécialisé mère-enfant HAMDAN Bakhta est un laboratoire polyvalent
fonctionnant 24 h/24 et 7 j/7. Il y a deux équipes de jour (8h à 16h) :
Equipe A : 03 laborantines de santé publiques et 03 biologistes.
Equipe B : 02 laborantines de santé publiques et 05 biologistes.
On note l’existence d’une équipe de la garde (16h à 8h du matin) avec
02 laborantines de santé publiques et 02 biologistes.
Le laboratoire de biologie regroupe deux paillasses.
 Biochimie
 Hémobiologie
 Hémostase
 Sérologie

II. Le prélèvement sanguin

1. Méthode prélèvement sanguin
Le prélèvement du sang veineux se fait habituellement aux veines du
pli de coude.

2. Matériels de prélèvement
Les gants, garrot médical, les seringues stériles, cathéter veineux, coton
sec, l'alcool médical, et enfin sparadrap

3. Réalisation du prélèvement sanguin

Le port de gants est fortement recommandé lors de tous prélèvements
sanguins.
- Préparer le matériel de ponction (aiguille et corps de
prélèvement) ainsi que les tubes nécessaires pour l’analyse.
- Serrer le garrot environ dix centimètres au-dessus du site de
ponction.
- Maintenir le bras incliné vers le bas.
- Demander au patient de serrer le poing.
- Identifier le site de ponction à l’aide de l’index ou du pouce.
Tapoter avec deux doigts si les veines ne sont pas apparentes.
- Désinfecter le site de ponction.
- Mettre une paire de gants.
- Tendre la peau pour immobiliser la veine, introduire l’aiguille
dans la veine d’environ un centimètre de manière à ce que
l’aiguille ne la traverse pas. Desserrer complètement le garrot.
- Retirer l’aiguille puis comprimer le site de ponction à l’aide d’un
coton.
- Demander au patient d’appuyer sur le coton et de ne pas plier
son bras.
- Eliminer immédiatement l’aiguille dans un container adapté.
Eliminer les gants.
- Identifier les tubes.
- Mettre un pansement sur le point de ponction après avoir vérifié
que le saignement se soit arrêté.
- Remplir ENTIEREMENT la fiche de renseignements infirmières
concernant le patient et y joindre les documents nécessaires à la
prise en charge (ordonnance…).
- Transmettre au laboratoire le plus rapidement possible les
prélèvements et documents accompagnants.

4. Les tubes de prélèvements sanguins

*Tube EDTA :
Correspond à l’acide éthylène diamine tétra-acétique, est utilisé
pour des analyses d'hématologie et immunohématologie dans le
sang total, tels que [FNS, Groupage, HBA1C glyquée,
Ferritine……].
*Tube héparine de lithium ou héparine de sodium :
Il est utilisé pour la biochimie (glycémie, urée, créatinine,
cholestérol, triglycérides, TGO, TGP, Albumine, calcémie,
bilirubine, protéine totale), et la sérologie (HIV, HBS, HCV,
TPHA)
*Tube citrate de sodium :
Il est utilisés pour le bilan d’hémostase (TP, TCA, Fibrinogène), le
groupage sanguin, VS (vitesse de sédimentation), fibrinogène et
D-Dimére.
*Tube sec :
Il est utilisé pour réaliser un bilan inflammatoire (CRP, ASLO), ne
contient pas un anticoagulant.
*Tube en verre :
Il est utilisé dans la technique manuelle du TP et TCA
 Fig 1 : Tubes utilisés pour effectuer les analyses biologiques

III. Les analyses effectuées au niveau du laboratoire

de biologie de l’EHS HAMDAN Bakhta:

1.Parametres d’hémobiologie

1.1.FNS :
Numération formule sanguine (NFS), est un examen fréquemment
prescrit. Il consiste à analyser les cellules sanguines, comme les
globules rouges (hématie ou érythrocyte), les globules blancs
(leucocyte) ou les plaquettes (Thrombocyte), et même l’hémoglobine
(Hb).

Le tube est placé sous la machine pour aspirer une quantité du sang et
passer à la lecture.

Intérêt :
La FNS est utilisée, comme un test pour rechercher des troubles tels
que l'anémie, l'infection, trouble d’hémostase ou de nombreuses autres
maladies.

1.2.Groupage sanguin (Gs) :

Un groupe sanguin correspond à l’identification de la présence ou
l'absence de substances antigéniques héritées à la surface des globules
rouges
 Intérêt :
Détermination du groupe sanguin ABO et rhésus se fait par deux
techniques (épreuve globulaire et épreuve sérique), et dans le cas où
une transfusion sanguine est nécessaire, le sang reçu doit être
compatible avec le sien. Il ne faut pas qu’ils soient mis en contact des
anticorps et antigènes du même type au risque d'engendrer un rejet ou
une coagulation du sang qui peut être mortel.

Fig 2 : Groupe sanguin système ABO

Il existe 04 types d’anticorps permettant l’identification du groupage

sanguin : Anti A, Anti B, Anti AB, Anti D (Rhésus)

Fig 3 : Réactifs utilisés pour la détermination du groupage

sanguin
 1.3.Bilan d’hémostase :
L'hémostase correspond à l'ensemble des phénomènes physiologiques
permettant d'arrêter un saignement en cas de rupture d'un vaisseau
sanguin (blessure).
Ce test peut s’effectuer en exprimant les paramètres suivants : TP, TQ,
INR et TCA,. Ce sont les examens biologiques les plus fréquemment
prescrits pour le dépistage d’une maladie hémorragique ou avant une
intervention chirurgicale.

1.3.1.Taux de prothrombine

Le taux de prothrombine (TP) permet l’exploration de la voie

extrinsèque de la coagulation. Le temps de Quick est converti en "taux
de prothrombine" (TP) permet d'évaluer l'activité des facteurs du
complexe prothrombinique en référence à un plasma normal à 100%.
Le déficit de l'activité prothrombinique est associé à diverses causes :

- Maladie hémorragique du nouveau-né.

- Insuffisance hépatique (cirrhoses, hépatites...).
- Avitaminose K ou administration d’antivitamines K
(AVK).
- Déficits congénitaux en un des facteurs associés au
complexe prothrombinique : prothrombine vraie (facteur II), pro
accélérine (facteur V), proconvertine (facteur VII) et facteur
Stuart (facteur X).
- Anticoagulants circulants.
- Fibrinolye
- CIVD (coagulation intravasculaire disséminée)

*Principe :

Cette technique est basée sur les travaux de Quick et Al. Le temps de
coagulation est mesuré à 37°C en présence de Thromboplastine
tissulaire et de calcium. Ce test reflète l’activité des Facteurs II
(Prothrombine), V (Pro accélérine) VII (Proconvertine), X (Facteur de
Stuart) et du fibrinogène. Le temps ainsi mesuré sera converti en TP
(%) ou en INR.

1.3.2.TCA
le temps de céphaline activée (TCA ou APTT en englais pour activated
partial thromboplastin time) est un test semi-global de la coagulation
sanguine, fait sur un prélèvement sanguin.

*Principe :

Les facteurs intrinsèques de la coagulation s’activent en présence d’un

complexe phospholipidique et d’un activateur soluble en plasma citraté
on mesure le temps écoulé après l’ajout du chlorure de calcium (CaCl 2)
jusqu’à la formation du caillot de fibrine.

*Intérêt clinique :

La mesure du temps d’APTT est la détermination la plus commune

avec celle du PT. L’APTT sert à déterminer les troubles de la
coagulation et est particulièrement sensible aux défauts de la
coagulation intrinsèque (Facteurs VIII, IX, XI, XII). On l’utilise
normalement pour surveiller les thérapies anticoagulantes avec
héparine1, 2. Le diagnostic clinique doit être réalisé en tenant compte
de toutes les données cliniques et de laboratoire.

2.Paramètres de biochimie

On distingue plusieurs bilans dans les analyses biochimiques :

2.1.Bilan glycémique :
2.1.1.Glucose
Le taux de sucre (glucose) dans le sang, Le taux normal de la glycémie
à jeun oscille entre 0.74g/L et 1.06 g/L, tout déséquilibre du taux de
glucose dans le sang entraîne des maladies chroniques (Diabète).

*Principe :
L’oxydation du glucose en acide gluconique est catalysée par le
glucose oxydase produisant également du peroxyde d’hydrogène.
Le peroxyde d’hydrogène réagit avec la 4-aminoantipyrine et l’acide p-
hydroxybenzoïque en présence de peroxydase pour donner un dérivé
quinonique coloré, dont la coloration est proportionnelle à la
concentration de glucose dans l’échantillon
 *Intérêt clinique :
La détermination du glucose dans le sérum ou l’urine est utilisée pour
l’évaluation des troubles du métabolisme des hydrates de carbone.
Le glucose est la principale source d’énergie pour les cellules de
l’organisme, l’insuline produite par les cellules pancréatiques, facile
l’entrée du glucose dans les cellules de tissus. L’augmentation de
glucose dans le sang est associée à une diminution de l’activité de
l’insuline ou une déficience de celle-ci.
Dans le sérum ou le plasma , nous retrouvons des valeurs élevées de
glucose principalement chez les patients atteints de diabète sucré, mais
aussi de pancréatite aigüe, du syndrome de cushing, d’acromégalie et
de gigantisme.

*Echantillon :
Sérum, plasma ou LCR: le glucose se conserve pendant 2 à 3 jours
maximum dans le sérum ou le plasma, à une température comprise
entre 2 et 8 C , le LCR doit être claire et sans débris. Dans ces
conditions le glucose est stable 48h à 2-8C

2.2.Bilan rénal :
2.1.1.Urée
C’est une molécule qui résulte d’un processus de dégradation des
protéines. C’est la forme principale d’élimination des déchets azotés.
Elle permet d’évaluer la fonction rénale particulièrement la présence
d’une insuffisance rénale.
Les valeurs usuelles de l'urée sanguine sont comprises entre 2,5 et 10
mmol/L (0,15 à 0,50 g/L).

*Principe :
L’hydrolyse de l’urée présente dans l’échantillon est catalysée par
l’uréase en produisant des ions ammonium et carbonate. En présence
de nitroprussiate, les ions ammonium formés réagissent avec le
salicylate et hypochlorite en milieu basique, ce qui donne lieu à un
dérivé indophénolique vert. L’intensité de la couleur est
proportionnelle à la concentration d’urée dans l’échantillon.

*Intérêt clinique
L’urée, le produit du métabolisme des protéines, est synthétisé dans le
foie et excrété dans les reins. Le niveau de l’urée sérique est utilisé en
conjonction avec la créatinine, pour l’évaluation de la fonction rénale.
Habituellement, des niveaux élevés d’urée dans le sang reflètent une
certaine altération de la fonction excrétrice du rein. Cette augmentation
peut aussi être due à la fonction hépatique ou au régime diététique lui-
même.
La déshydratation, les hémorragies ou l’insuffisance cardiaque peuvent
également élever le niveau d’urée sanguine en cas de réduction de la
quantité d’urine.

*Echantillon :
Sérum, plasma ou urine, l’urée est stable dans le sérum pendant 1 jour à
température ambiante, 5 jours entre 2 et 8 C et 6 mois congelée à 20 C,
dans l’urine , elle est stable 5 jours entre 2 et 8 C à condition qu’elle
soit maintenue à un PH inférieur à 4.0 pour effectuer l’essai avec un
échantillon d’urine, diluer préalablement au 1/100 avec de l’eau
déionisée et procéder comme pour le sérum. Multiplier le résultat par
100.
*Mode opératoire :
 2.1.2.Créatinine :
C’est un déchet de l’organisme qui provient donc de la dégradation de
la créatine, pour évaluer l’activité des reins on compare le niveau de
créatinine dans le sang à la quantité de créatinine évacuée par les
urines.
La concentration normale de créatinine dans le sang est comprise entre
7 et 14 mg/l pour l’homme et entre 6 et 11mg/l pour la femme.

*Principe :
En milieu alcalin, la créatinine forme avec l’acide picrique un composé
coloré, le picrate alcalin de créatinine, qui est déterminé
photométriquement. La couleur produite dans la réaction est
proportionnelle à la concentration de créatinine dans l’échantillon dans
des conditions d’essai optimales.
*Intérêt clinique :
La créatinine sérique augmente en cas d’insuffisance rénale aigue ou
chronique, d’hyperthyroidie, d’acromégalie ou de gigantismes actifs.
L’augmentation de l’urine se produit en cas de diabète sucré, et
d’infections. De plus, l’exercice favorise l’augmentation de l’excrétion
accrue dans l’urine.
Pendant la grossesse ou en cas de diminution de la masse musculaire, la
concentration de la créatinine sérique est réduite, tandis que la
créatinine urinaire est réduite en cas d’insuffisance rénale, de
myopathies, d’anémies ou d’hypothyroïdie.

*Echantillon :
Sérum ou plasma hépariné ou urine.
La créatinine est stable dans le sérum pendant 24h à une température
comprise entre 2 et 8 C.
Pour déterminer la créatinine urinaire, diluer l’échantillon au 1/20 avec
de l’eau déionisée. Multiplier le résultat final par 20.
*Interférences
Aucun interférence de la BRB jusqu’à 5mg/dl, de l’hémoglobine
jusqu’à 1000mg/dl et de la lipémie jusqu’à 1250mg/dl. Autre drogues
et substances peuvent interférer dans le test.

2.3.Bilan hépatique :
2.3.1.Bilirubine
La bilirubine est un pigment jaune, produit de dégradation de
l'hémoglobine mais aussi d'autres hémoprotéines. Son catabolisme est
assuré par le foie. Son accumulation anormale dans le sang et les tissus
détermine un ictère
Taux normal de bilirubine total est : <160mg/l chez un nouveau-né, et
entre 3 et 12mg/l chez l’adulte
Taux normal de bilirubine direct est : <2mg/l et bilirubine indirect entre
2 et 7mg/l.

*Principe

Réaction entre la bilirubine et l’acide sulfanilique diazoté qui conduit à

un composé, l’azobilirubine, coloré en milieu très acide ou basique.
Principe de Malloy-Evelyn modifié par Walters et al : en solution
aqueuse, seule la BD réagit. Pour doser la BT il est nécessaire de
rompre la liaison entre la bilirubine indirecte et l’albumine. Cette étape
est réalisée par l’addition de diméthyl sulfoxide (DMSO).
L’absorbance de l’azobilirubine ainsi produite est proportionnelle à la
concentration en bilirubine et est mesurée à 550 nm (530-580).
*Echantillon
Sérum ou plasma recueilli sur EDTA héparine, citrate ou florure et
conservé à l’abri de la lumière. Hémolyse gênante pour la Bilirubine.
*Mode opératoire
2.3.2.TGO et TGP :

Glutamate-oxaloacetate-transaminase (TGO) ou Aspartate amino

transférase (ASAT) et Glutamate-pyruvate-transaminase (TGP) ou
Alanine aminotransférase (ALAT), ce sont des transaminases c’est à
dire des enzymes présents à l’intérieur des cellules. Ce sont des bons
marqueurs des maladies du cœur et du foie.
Les valeurs normales de TGO sont <37UI/l chez l’homme et <31UI/l
chez la femme.
Les valeurs normales de TGP sont <40UI/l chez l’homme et <31UI/l
chez la femme.
L’ensemble des échantillons de ces analyses est pris dans un tube
héparine après une centrifugation de 5 minutes. Tous ces analyses sont
étudiées sur un automate.
TGO
*Principe
L’enzyme transaminase glutamique-oxaloacétique catalyse la réaction
entre l’acide L-aspartique et l’acide a-cétoglutarique. L’acide
oxaloacétique formé est réduit par le cofacteur NADH à l’acide d’une
enzyme MDH auxiliaire , produisant un changement de l’Abs du
milieu.la formule contient également de la LDH pour supprimer le
pyruvate endogène pour éviter les interférences.
*Intérêt clinique
Des augmentations de l’activité TGO ont été observées dans le sérum
dans les cas de lésions hépatique: hépatite de divers type, nécrose ou
lésions des hépatocytes et ictère choléstatique. Des niveaux élevés sont
également observés dans les maladies affectant le muscle cardiaque. En
cas d’hépatite alcoolique et d’infarctus aigu du myocarde,
l’augmentation de l’activité TGO est supérieure à celle de l’activité
TG.
*Echantillon :
Sérum ou plasma hépariné ou sur EDTA comme anticoagulant. Utiliser
des échantillons exempts d’hémolyse. Les sérums conservés au
réfrigérateur entre 2 et 8C perdant environ 10% d’activité au bout de 3
jours.
TGP
*Principe :
L’enzyme glutamique-pyruvate transaminase catalyse la réaction entre
L-alanine et l’acide a-cétoglutarique. L’acide pyruvique formé est
réduit par le cofacteur NADH à l’acide d’une enzyme LDH auxiliaire,
produisant un changement de l’Abs du milieu.
*Intérêt clinique :
Des valeurs élevées sont retrouvées en cas de nécrose des hépatocytes,
de cirrhose ou d’ictère obstructif, l’augmentation de l’activité
enzymatique TGP étant plus spécifique aux dommages du foie que du
rapport TGO/TGP. En cas d’hépatite virale, l’augmentation de TGP est
toujours supérieure à celle du TGO. En outre, on retrouve des valeurs
plus élevées en cas de myocardite, d’infarctus aigu du myocarde ou de
maladies hémolytique.
*Echantillon :
Sérum ou plasma hépariné ou sur EDTA comme anticoagulant. Utiliser
des échantillons exempts d’hémolyse. Les sérums conservés au
réfrigérateur entre 2 et 8C perdant environ 10% d’activité au bout de 3
jours.

2.4.Bilan lipidique :
2.4.1.Cholestérol total
Correspond à l'ensemble des formes de cholestérol contenues dans
notre sang. Taux normal <2 g/l.

*Principe :
Méthode enzymatique décrite par Allain et al, selon le schéma
réactionnel suivant :
Cholestérol estérifié --CE------- cholestérol+AG libres
Cholestérol+O2-------CO---- cholestérol 4 one 3 +H2O2
2H2O2+phenol+pap--POD--------- quinonéimine(rose)+4H2O
*Intérêt clinique :
Le dosage du cholestérol total, aux autres dosages de lipides sérique est
utile dans le diagnostic de l’hyperlipoprotéinémie. Il peut aussi
permettre le diagnostic de maladies hépatiques et thyroïdiennes.
Conjointement avec le dosage des triglycérides, cholestérol-HDL et
cholestérol-LDL, il permet d’évaluer le risque cardio-vasculaire.

*Mode opératoire :

Analyseur Procédure
automatique manuelle
Réactif 0.3ml 1ml
Etalon 0.003ml 0.01ml
Mélanger. Laisser reposer 5 minutes à 37°C ou 10 minutes à
température ambiante. Lire les absorbances à 500 nm (480-520) contre
le blanc réactif. La coloration est stable une heure.
2.4.2.Triglycérides :
Les triglycérides sont des lipides indispensables à l'organisme. Ils sont
synthétisés par le foie à partir des sucres et de l’alcool et sont stockés
dans la graisse corporelle. En quantité normale, les triglycérides
constituent l’une des principales sources d’énergie pour le corps.
Taux normal de triglycérides chez l’homme : 0.35 – 1.35g/l, et chez la
femme : 0.4 – 1.6g/l.

*Principe :
Les TG sont hydrolysés par la lipoprotéine lipase pour produire du
glycérol et des AG libres. Le glycérol participe à une série de réactions
enzymatiques couplées, dons lesquelles la glycérol kinase/glycérol
phosphateoxydase sont impliquées et du H2O2 est généré. Le H2O2
réagit avec le p-chlorophénol et la 4-aminoantipyrine en présence de
peroxydase pour former un colorant quinonéimine.

*Echantillon :
Les échantillons ne doivent pas être prélevés pour la détermination des
TG à moins que le patient ne soit à jeun depuis 10 à 14h.
Le sérum ou le plasma EDTA peuvent être utilisés pour déterminer les
RG, lorsque le plasma EDTA est utilisé, la valeur plasmatique est
convertie en valeur sérique équivalente en multipliant la valeur par
1.03
Conserver les échantillons à 4°C avant l’analyse. Les échantillons
peuvent être conservés à 4°C pendant 3 jours, congelés à -20°C
pendant deux semaines ou congelés à -70°C pendant des périodes plus
longues. Les échantillons lipémiques peuvent nécessiter un
réchauffement à 37°C et un mélange vigoureux avant l’analyse, surtout
s’ils ont été congelés.

*Mode opératoire :

Tube Tube Tube

Blanc Etalon Echantillo
n
R1 1ml 1ml 1ml
Eau 0.01m 0 0
déminéralis l
é
Etalon 0 0.01m 0
l
Echantillon 0 0 0.01ml

- Mélanger et incuber à 37C 5 minutes. Puis lire résultats

- Un temps d’incubation plus long donne des résultats
élevés
- Temps de réaction: 6 secondes
- La couleur est stable 1h
 Fig 4 : Cuve pour automate de biochimie
2.5.Autres paramètres :
2.5.1.Acide urique :
Substance chimique présente dans le sang, produit par la dégradation
des acides nucléiques et qui s'élimine par les urines
Les taux normaux de concentration en acide urique sont de : 36 à 77
mg/L pour l’homme, 25 à 68 mg/L pour la femme, et 25 à 40 mg/L
pour l’enfant. Les taux élevés d'acide urique peuvent provoquer la
maladie de goutte (l'inflammation d'articulations).

*Principe :
L’acide urique de l’échantillon se dégrade sous l’action de l’uricase
d’allantoïne avec une libération d’eau oxygénée. La quantification de
l’eau oxygénée libérée est réalisée par le biais de la réaction de trinder.
Au cours de laquelle un composé quinonique coloré est formé par
réaction avec la 4-amino-antioyrine et le chromogène 3.5-dichlore-2-
hydroxysulfonate en présence de peroxydase.
La couleur produite au cours de la réaction est proportionnelles à la
concentration d’acide urique de l’échantillon dans des conditions de
dosage optimales.
*Intérêt clinique :
Des valeurs élevées d’acide urique sont retrouvées dans les maladies
rénales, la goutte, l’hyperthyroïdie, les tumeurs malignes et les
maladies myéloprolifératives.
Des valeurs inférieures aux valeurs habituelles sont retrouvées dans les
troubles congénitaux du métabolisme comme la xanthinurie et en cas
d’apports pauvres en purine.
 *Echantillon :
Sérum, plasma ou urine. Il peut être conservé au réfrigérateur entre 2 et
8 C pendant moins de 4 jours. Pour effectuer l’essai avec un
échantillon d’urine, celui-ci doit dilué au 1/10 avec de l’eau dé-ionisée.
Multiplier par 10 le résultat obtenu.
*Mode opératoire :

B ETALO ESSA
L N I
Etalon (ml) / 0.01 /
Echantillon(ml / / 0.01
)
Réactif(ml) 1 1 1
Mélanger, lire les absorbances après une incubation de 5 minutes à
37°C ou de 10 minutes à 20 - 25°C. La coloration est stable 30
minutes.

2.5.2.Calcémie :
Correspond au taux de calcium dans le sang. Le taux normal chez un
adulte est compris entre 85 et 105mg/l de plasma et chez un nouveau-
né entre 80 et 130mg/l.
2.5.3.Electrolytes :
Aussi appelé un ionogramme sanguin ; c’est un test extrêmement
commun et l’un des plus demandés ; il correspond au dosage des
principaux constituants ioniques du sang (Na sodium, Ca calcium, K
potassium, Cl le chlore, Mg le magnésium et CO3 les bicarbonates).
2.5.4.Sérologie :
CRP (protéine C réactive) et ASLO
Le CRP est un marqueur de l’inflammation. C'est une protéine qui
apparaît dans le sang lors de la présence d’une inflammation aiguë dans
l'organisme.
Le biologiste prend des volumes égaux du réactif et le sérum (50
microlitres) et il fait l’homogénéisation sur une plaque et il remarque la
démarcation de l’agglutination. Le même principe ainsi que le mm
mode opératoire fait pour réaliser un test ASLO.
Remarque : le prélèvement pour ces deux tests se fait dans un tube sec.
 IV. Appareillage

1- Automate d’hématologie  :

Cet automate permet la numération des éléments figurés du sang

(globules rouges ou érythrocytes, globules blancs ou leucocytes,
plaquettes ou thrombocytes), le calcul de l’hématocrite, le dosage de
l’hémoglobine et éventuellement l’établissement de la formule
leucocytaire. Son intérêt est d’entrainer un gain en temps, justesse et
reproductibilité par rapport aux techniques manuelles

*Intérêt :
Cet automate permet de détecter les anomalies de la lignée
érythrocytaire (anémie ou polyglobulie, maladie de Vaquez), de la
lignée leucocytaire (diminution notamment après chimio ou
radiothérapie, augmentation suite à une infection bactérienne, ou avec
présence d’éléments anormaux dans le cas des leucoses), de la lignée
thrombocytaire (diminution primitive, ou après chimio ou
radiothérapie, augmentation dans la maladie de Vaquez et les
syndromes myeloprolifératifs).

Fig 5 : Automate d’hématologie

2- Automate de biochimie  :
Cet appareil contient deux espaces : Le premier c’est un espace
réactionnel sous forme circulaire avec des vides en deux niveau le
premier niveau porte les godets ou le biologiste remplis le réactif, le
deuxième porte les tubes héparines des échantillons.
L’aiguille aspire une petite quantité du réactif et le met dans la cuve
ensuite il aspire une autre quantité du plasma et fait le mélange dans la
même cuve à l’aide d’un mélangeur.

Fig 6 : Automate de biochimie Mindray BS-200

3-Spectrophotomètre  :
Bilirubine et calcémie sont mesurées par le spectrophotomètre

Fig 7 : Spectrophotomètre de biochimie

4-Centrifugeuse  :
Joue un rôle dans la séparation du plasma ou du sérum sur lesquels
seront pratiqués différents dosages.

Fig 8 : Centrifugeuse
4-Bain Marie  :
 Fig 9 : Bain de marie pour l’hémostase

5- Automate de l’ionogramme sanguin  :

Fig 10 : Automate de l’ionogramme sanguin

I. V. Conclusion :
Travailler au sein de ce laboratoire de biologie durant 15 jours m’a
permis d’acquérir de nouvelles connaissances techniques, j’ai eu
l’occasion de réaliser plusieurs tâches et mettre en pratique mes
connaissances théoriques, je garde du stage un excellent souvenir, il
constitue désormais une expérience valorisante et encourageante pour
mon avenir, et m'a permis de développer des compétences qui me
seront précieuses dans le monde professionnel. Et pour cela, j'en
remercie énormément l’équipe du laboratoire qui n'a pas hésité à
consacrer de son temps afin de garantir la qualité de ma formation.