Rapport de stage

En vue de satisfaire partiellement aux conditions requises pour l'obtention du

diplôme de

Licence en microbiologie

Soumis par

Muhammad Attique (n° d'enregistrement 15-F-AWKUM-GCM-BS-M BIO- 07)

Adnan Ali Shah (n° d'enregistrement 15-F-AWKUM-GCM-BS-M BIO- 30)

Département de microbiologie

Université Abdul Wali Khan de Mardan

Pakistan, 2019
 Date _____________

APPROBATION FINALE
Il est certifié que nous avons lu le rapport de stage de M. Muhammad Attique (Reg No 15-F-
AWKUM-GCM-BS-MBIO-07) et de M. Adnan Ali Shah (Reg No 15-F-AWKUM-GCM-BS-
MBIO-30) et que nous estimons que ce projet est d'un niveau suffisant pour justifier son
acceptation par l'Université Abdul Wali Khan de Mardan en vue de l'obtention du diplôme BS
(Hons) en microbiologie.

Comité d'approbation des thèses

Superviseur
M. Tahir Hussain
Maître de conférences
Département de microbiologie
Université Abdul Wali Khan Mardan ____________________

Examinateur externe
M. Fazal jalil
Maître de conférences
Département de biotechnologie
Université Abdul Wali Khan Mardan ____________________

Président Département de microbiologie

Dr. Hazir Rahman
Professeur associé
Université Abdul Wali Khan de Mardan
____________________
 Dédié
À notre
Des parents aimants :
L'âme de notre bonté
 TABLE DES MATIÈRES
Remerciements ..............................................................................................................................................
.....7
Introduction : .................................................................................................................................................
...........8
Histoire de la
MMC.....................................................................................................................................................9
Phlébotomie...................................................................................................................................................
....10
Microbiologie..................................................................................................................................................
...........16
Supports communs en usage
courant..............................................................................................................................17
Préparation et stérilisation des milieux de
culture...................................................................................................17
Coloration de
Gram...........................................................................................................................................................19
Coloration du
Zn.................................................................................................................................................................2
2
Hématologie...................................................................................................................................................
...........24
CBC .................................................................................................................................................................
.........25
ESR..................................................................................................................................................................
...........26
Test de
Sickling............................................................................................................................................................
...27
Sérologie.........................................................................................................................................................
...........29
Groupement
sanguin........................................................................................................................................................30
Correspondance
croisée.............................................................................................................................................................
.31
HBsAG.............................................................................................................................................................
........33
Dengue............................................................................................................................................................
..........34
HCV.................................................................................................................................................................
...........35
H
pylori...............................................................................................................................................................
.......36
Brucella...........................................................................................................................................................
..........37
Test de
grossesse.........................................................................................................................................................
38
Pathologie
chimique.................................................................................................................................................40
Analyse d'urine
complète.........................................................................................................................................41
Analyse de
glucose............................................................................................................................................................
..51
Acide
urique..............................................................................................................................................................
......52
ALT..................................................................................................................................................................
...........52
AST .................................................................................................................................................................
...........54
Pathologie
moléculaire..............................................................................................................................................55
Extraction d'ADN par la méthode
chelex...................................................................................................................56
PCR..................................................................................................................................................................
..........56
Electrophorèse sur gel
d'agarose..................................................................................................................................57
 LISTE DES CHIFFRES
Figure 1 : Phlébotomie............................................................................................................................13

Figure 2 Composants du sang..............................................................................................................13

Figure 3 Tubes de prélèvement

sanguin............................................................................................................16

Figure 4 Formule standard pour la culture............................................................................................19

Figure 5 Autoclavage............................................................................................................................20

Figure 6 autoclave avec réglage de la

température...................................................................................20

Figure 7 Préparation du
support .................................................................................................................21

Figure 8 stérilisation ......................................................................................................................21

Figure 10 stérilisation.....................................................................................................................22

Figure 11 Coloration de Gram ................................................................................................................24

Figure 12 Résultat de la coloration de

Gram.......................................................................................................24

Figure 13 Coloration au Zn .....................................................................................................................25

Figure 14 Kit de coloration Zn

T.B...............................................................................................................25

Figure 15 Diapositive de la coloration au

Zn .........................................................................................................26

Figure 16 analyseur d'hématologie ......................................................................................................28

Figure 17 ESR par la méthode Westergren ..........................................................................................31

Figure 18 procédure de correspondance

croisée .................................................................................................36

Figure 19 Kit de test HBsAG.................................................................................................................37

Figure 20 Prélèvement d'un échantillon d'urine pour des tests physiques et

autres........................................46

Figure 21 : Flacons de bandelettes urinaires avec tableaux

étiquetés .......................................................................47
Figure 22 : Bandelette urinaire avec résultats négatifs et
positifs..............................................................49

Figure 23 RBC dans l'urine sous l'objectif 40x ..............................................................................51

Figure 24 GB observés dans un échantillon d'urine sous des objectifs

40x.......................................................51

Figure 25 Électrophorèse sur gel.........................................................................................................59

 ABBREVATIONS
ZN Zeil Neilson

CBC Image sanguine complète

HB Hémoglobine

TLC Nombre total de leucocytes

TRBC Globules rouges totaux

PCV Volume de la cellule de conditionnement

HCT Hématocrite

MCH Hémoglobine corpusculaire moyenne

CCML Concentration corpusculaire moyenne

d'hémoglobine

ESR Vitesse de sédimentation des érythrocytes

HBSAG Antigène de surface de l'hépatite B

VHC le virus de l'hépatite C

H.PYLORI l'hélicobacter pylori

ALT Alanine amino transférase

AST Asparte amino transférases

PCR Réaction en chaîne par polymérase

HCG Gonadotrophine chorionique humaine

 REMERCIEMENTS
Toutes les gloires sont à ALLAH, le plus miséricordieux et le plus bienveillant, qui a créé
l'univers et tout ce qu'il contient et qui a donné à l'homme la capacité de penser et de chercher.
Qui a ordonné à l'homme de chercher et d'apprendre. Nos obligations les plus humbles et les plus
profondes sont dues, avec beaucoup d'honneur et d'estime, au Saint Prophète Hazrat Muhammad
(SAW), qui est un flambeau de guidance et de connaissance pour l'ensemble de l'humanité.
Que pouvons-nous faire pour exprimer nos remerciements et notre reconnaissance à notre
professeur et superviseur M. Tahir Hussain, maître de conférences au département de
microbiologie de l'université Abdul Wali Khan de Mardan, pour sa supervision, ses conseils et
son orientation dès les premières étapes de ce stage, ainsi que pour les expériences
extraordinaires qu'il nous a fait vivre tout au long de notre travail, mais surtout, et c'est le plus
important, pour ses encouragements et son soutien indéfectibles de diverses manières. Il est une
oasis constante d'idées et de passions dans le domaine de la science, qui nous inspire et nous
enrichit exceptionnellement dans notre croissance en tant qu'étudiant, chercheur et scientifique.
Nous lui sommes redevables plus qu'elle ne le pense.
Nous sommes reconnaissants à tous égards et espérons poursuivre notre collaboration à
l'avenir. Nous remercions vivement tous les membres du personnel du département de
microbiologie de l'université Abdul Wali Khan de Mardan, en particulier le Dr Muhsin Jamal,
le Dr Hazir Rahman, Mme Kanwal Mazhar, le Dr Ziaur Rahman, M. Sagheer Ahmad et
Mme Aliya Khalid pour leur gentillesse et leur soutien moral tout au long de notre étude.
Nous souhaitons exprimer notre gratitude à tous les membres du personnel de la MMC, pour la
facilitation de la recherche, l'expérience clinique et l'approche systématique.
Nous sommes très reconnaissants à Zakir Ullah, Mansoor Ahmad, Haseeb Khan, Basit Ali khan
et Muhammad Junaid, merci pour l'amitié et les souvenirs. Enfin, notre plus profonde gratitude
va à nos pères bien-aimés et surtout à nos mères, ainsi qu'à nos oncles et à nos sœurs pour leur
amour, leur soutien et leurs innombrables prières pour notre réussite tout au long de la vie. À
ceux qui ont contribué indirectement à cette recherche, votre gentillesse signifie beaucoup pour
nous. Je vous remercie de votre attention.

Muhammad Attique et Adnan Ali Shah

 INTRODUCTION
Le stage fait partie intégrante du programme de médecine de laboratoire et est conçu pour donner
aux étudiants l'occasion d'intégrer et d'appliquer les connaissances et les compétences techniques
acquises précédemment dans des environnements cliniques réels. Sous la direction de
professionnels de laboratoire médical expérimentés et d'autres personnels de laboratoire et
professionnels de la santé qualifiés, les étudiants en apprennent davantage sur les procédures de
test de diagnostic, les méthodes de contrôle de la qualité et l'instrumentation dans le laboratoire
clinique. Ils acquièrent également une compréhension des rôles et des fonctions des
professionnels des laboratoires médicaux.

Le stage fournit des expériences d'apprentissage appliqué au cours desquelles l'étudiant doit :

1. Acquérir et pratiquer des compétences de laboratoire clinique.

2. Mettre en pratique les compétences en matière de résolution de problèmes.

3. Effectuer des procédures de contrôle de la qualité.

4. S'adapter et apprendre de nouvelles procédures.

5. Utiliser divers instruments de laboratoire.

6. Comprendre les responsabilités et les fonctions des professionnels de laboratoire médical

7. Rapporter des résultats exacts et précis.

8. Apprendre à relier les résultats des tests au diagnostic clinique du patient.

Le programme de stage se déroule dans les laboratoires des hôpitaux affiliés au programme, où
les étudiants apprennent en participant à la charge de travail d'un
technologue/spécialiste/consultant superviseur.
HISTOIRE DU COMPLEXE MÉDICAL DE MARDAN
Le complexe médical de Mardan est un hôpital universitaire de soins tertiaires de 520 lits, qui est
le plus grand établissement de soins de santé du KPK. Il dispose de toutes les spécialités requises
et de services de diagnostic (scanner, IRM) et de soutien ultramodernes. Il a été créé en 1997 et
comptait à l'origine 420 lits. Plus tard, après la création du Bacha Khan Medical College
(BKMC), le complexe médical de Mardan a été déclaré hôpital universitaire et le nombre de lits
a été porté à 520. Le complexe médical de Mardan a été conçu et construit à l'aide des
technologies médicales les plus avancées. L 'infrastructure de l'hôpital et l'environnement calme
sont propices à un rétablissement plus rapide, à une meilleure santé et à un soulagement.

DÉPARTEMENTS DE LA MMC :
1. Pathologie chimique
2. Hématologie
3. Histopathologie
4. Immunologie
5. Microbiologie
6. Virologie
PHLEBOTOMY
1.PHLÉBOTOMIE
Le prélèvement d'un échantillon de sang est appelé phlébotomie et la personne qui prélève le
sang du patient par une technique est appelée phlébotomiste. Dans la MMC, le prélèvement de
l'échantillon s'est fait à la réception. Les phlébotomistes prélèvent les échantillons de sang des
patients. Les échantillons sont prélevés par le phlébotomiste dans la zone centrale d'adhésion où
ils sont traités, enregistrés dans l'ordinateur et dotés d'un numéro d'échantillon avant d'être
distribués aux services pour les tests.

Figure 1 : Phlébotomie

LES TYPES D'ÉCHANTILLONS

1. Fluide aseptique
2. Liquide amniotique
3. Sérum
4. Plasma
5. Urine
6. CSF
PROCÉDURE :

A : Avant le début de la phlébotomie en vue d'un prélèvement sanguin

1. Vérification de l'existence d'un formulaire de consentement approuvé, signé et daté,

d'ordonnances médicales signées et d'un formulaire de critères d'inclusion et d'exclusion
rempli.
2. Comme l'identité du patient, son nom, sa date de naissance.
3. Expliquer la procédure au patient.
4. Utilisation d'un désinfectant pour les mains afin d'éviter tout type de contamination.
 5. Préparation de l'équipement de la procédure d'étude.

B : Préparer le matériel de la procédure d'étude :

1. Contrôler l'intégrité des équipements.

2. Seringue.

3. Jeu de papillons, le plus grand diamètre convenant aux veines du patient

4. Porte-vacutainer
5. Tubes vacutainer étiquetés selon le protocole
6. Tampons d'alcool
7. Gants propres
8. Garrot

C. INITIATION À LA PHLÉBOTOMIE :
1. Évaluer l'état des veines du patient par palpation en se concentrant sur les veines
anticubitales.
a) Pose d'un garrot jusqu'à l'emplacement prévu pour l'intraveineuse.
b) Attacher le garrot de manière à pouvoir le relâcher d'une seule main.
2. Préparation du site d'insertion :

a) Nettoyage de la peau à l'aide d'un tampon d'alcool selon une technique

aseptique, en commençant par le centre du site proposé et en effectuant
un mouvement circulaire en s'éloignant du site pendant 30 secondes.
b) Ne pas toucher la zone préparée avec les doigts. Si une réévaluation
palpable de la veine doit être effectuée, préparer à nouveau la peau
avant la ponction veineuse.

3. Ancrez la veine en tenant le bras du patient et en plaçant un pouce sous le point de

ponction de la veine.

4. Demandez au patient de former un poing pour que les veines soient plus visibles.
5. Pénétrez rapidement dans la veine à un angle de 30 degrés ou moins, et
continuez à introduire l'aiguille le long de la veine à l'angle d'entrée le plus facile.
 6. Une fois qu'une quantité suffisante de sang a été prélevée, relâchez le garrot avant de
retirer l'aiguille.
7. Retirez doucement l'aiguille et exercez une légère pression sur le site à l'aide
d'une gaze propre ou d'un tampon d'ouate sec.

Figure 3 Tubes de prélèvement sanguin

1.1. Les échantillons suivants n'ont pas pu être testés :

 L'étiquette n'a pas été remplie (nom, âge, sexe, date, heure de la collecte).

 Échantillon de sang hémolysé.

 Le sang anticoagulé se coagule par manque de mélange après le prélèvement.

 Échantillon livré au laboratoire en dehors du délai spécifié après le prélèvement.

 L'échantillon n'a pas été conservé correctement jusqu'au moment du test.

 Les échantillons prélevés sous anticoagulant n'ont pas le bon rapport entre le sang et
l'anticoagulant.
MICROBIOLOGIE
2.1LES MÉDIAS COURANTS UTILISÉS DE MANIÈRE HABITUELLE
I. CLED Agar (Cysteine Lactose Electrolyte Deficient) : milieu d'ensemencement
différentiel non sélectif pour la croissance et le dénombrement des micro-organismes
des voies urinaires.
II. Préparation : 36,0 g de milieu sont mis en suspension dans un litre d'eau distillée,
chauffés lentement et fréquemment agités. Bouillies pendant une minute et
121OC
stérilisées à pendant 15 minutes, elles ont été versées dans des boîtes de Pétri.
Les plaques ont été inversées une fois solidifiées à des fins de stockage et pour éviter
l'humidité.

III. MacConkey Agar. Le plus souvent utilisé pour les entérobactéries. Il contient de
l'agar, de la peptone, du chlorure de sodium, du sel biliaire, du lactose et du rouge
neutre. Il s'agit d'un média sélectif :
IV. Sélectif : le sel biliaire n'inhibe pas la croissance des entérobactéries mais inhibe la
croissance de nombreuses autres bactéries.
V. Indicateur :Les bactériesqui fermentent le lactose prennent une couleur rose en
raison de la production d'acide. L'acide fait passer l'indicateur neutre du rouge au
rose. Ces bactéries sont appelées "fermenteurs de lactose", par exemple Escherichia
coll. Une colonie incolore indique que le lactose n'est pas fermenté, c'est-à-dire que
la bactérie n'est pas un fermenteur de lactose, par exemple Salmonella, Shigella.

a. Préparation: 50 g d'agar ont été mis en suspension et mesurés dans un litre

d'eau purifiée, mélangés soigneusement et chauffés avec une agitation
fréquente, puis bouillis pendant une minute pour dissoudre complètement la
poudre. La gélose a été stérilisée à 121OCpendant 15 minutes.

VI. Chocolate Agar :elle est préparée en chauffant de la gélose au sang. Il est utilisé
pour la culture des méningocoques, des pneumocoques, des gonocoques et des
haemophilus.

VII. Préparation : 2 litres d'eau distillée ont été ajoutés à 144 g de poudre d'agar.
121OC 45OC
L'autoclavage a été effectué à pendant 15 minutes et refroidi jusqu'à , puis 5
65OC
% de sang défribré ont été ajoutés. Chauffé lentement et régulièrement à ,
 refroidi jusqu'à 45OCet versé dans des assiettes.

VI. Gélose au sang : la plus couramment utilisée. Pour la préparation de la gélose au

sang, 5 à 10 % de sang de mouton défribré sont mélangés à de la gélose fondue à 45-
50°C. Le sang sert de matériau d'enrichissement et d'indicateur. Les bactéries cultivées
dans la gélose au sang produisent une hémolyse autour de leurs colonies en croissance.
Certaines bactéries ne produisent pas d'hémolyse. Types de changements :
a) Hémolyse bêta, il y a une zone claire autour de la colonie bactérienne d'hémolyse
complète, par exemple Streptococcus pyogenes est un streptocoque hémolytique
bêta.
b) Hémolyse alpha, lorsqu'il y a une décoloration verdâtre autour de la colonie
bactérienne due à la formation de biliverdine, par exemple les streptocoques
viridans.
c) Hémolyse gamma ou absence d'hémolyse. Il n'y a pas de changement dans le
milieu à proximité de la colonie bactérienne.
2.2 LA PRÉPARATION ET LA STÉRILISATION DES MILIEUX DE CULTURE :
Les milieux de culture sont disponibles dans le commerce sous forme de poudre ; il suffit d'y
ajouter de l'eau. Le milieu nutritif est une préparation d'usage général pour la culture de micro-
organismes qui ne sont pas exigeants sur le plan nutritionnel.

Figure 4 Formule standard pour la culture

L'agar préparé a la même composition. Le pH final des deux milieux est de 7,4.
AUTOCLAVING

Figure 5 Autoclavage

L'autoclavage est un processus qui utilise la chaleur humide et la pression pour que toutes les
parties du matériel à stériliser atteignent 121 degrés Celsius pendant 15 minutes. Un autoclave
est, par essence, une grande cocotte-minute ; une chambre qui peut être fermée à l'air ambiant.

Figure 6 autoclave avec réglage de la température

Objectif :
Préparer une gélose nutritive stérile pour la culture de micro-organismes.

MATÉRIEL ET RÉACTIFS :
Agar nutritif commercial, Balance, Eau distillée, Bouteilles Scott, Eprouvette de mesure, Bécher,
Pince, Bouteilles universelles

PROCEDURE
1. Une quantité appropriée de poudre de bouillon (avec agar) est pesée dans des
bouteilles Scott et dissoute avec de l'eau distillée. Ils sont bien mélangés.

Figure 7 Préparation des supports

2. Les bouteilles sont recapuchonnées sans serrer et mises de côté pour la stérilisation.

3. Figure 8 stérilisation
4. Tous les milieux sont stérilisés à 121 degrés Celsius pendant 15 minutes.

5. Après l'autoclavage, le milieu est retiré. La préparation du bouillon est laissée à

refroidir et le bouchon de chaque bouteille est serré.
2.3 COLORATION DU GRAMME :
Il s'agit de la technique de coloration différentielle microbiologique la plus importante et la plus
utilisée. Elle a été mise au point par le Dr Christian Gram en 1884 et permet de différencier les
bactéries en fonction de leur caractère Gram (Gram positif ou Gram négatif). En outre, cette
coloration permet également de déterminer la morphologie, la taille et la disposition des cellules.
Principe
Les bactéries sont colorées avec le colorant primaire Crystal Violet et fixées par le mordant,
certaines bactéries sont capables de retenir le crystal violet et d'autres sont lavées par l'alcool.La
paroi cellulaire des bactéries Gram positives a une couche épaisse de complexes protéine-sucre
connus sous le nom de peptidoglycane. L'action du décolorant entraîne la déshydratation de la
paroi cellulaire, ce qui provoque le rétrécissement des pores de la paroi cellulaire et empêche la
tache de sortir de la cellule. L'éthanol ne peut donc pas éliminer le complexe cristal-violet-iode
qui est lié à l'épaisse couche de peptidoglycane des bactéries gram positives et qui donne à la
cellule une apparence bleue ou violette.
Dans le cas des bactéries gram négatives, la paroi cellulaire absorbe également le complexe CV-
Iode, mais en raison de la fine couche de peptidoglycane et de l'épaisse couche externe formée de
lipides, le complexe CV-Iode est éliminé. Lorsqu'ils sont exposés à l'alcool, le décolorant dissout
les lipides des parois cellulaires, ce qui permet au complexe cristal-violet-iode de s'échapper des
cellules. Lorsqu'elles sont à nouveau colorées à la safranine, elles prennent la coloration et
apparaissent en rouge.
PRÉPARATION DU FROTTIS
1. Prenez une diapositive sèche.
2. Stériliser la boucle d'inoculation à la flamme du bec Bunsen.
3. Transférer la culture (ou l'échantillon) à l'aide d'une boucle stérile et faire un frottis au centre.
4. Sécher le frottis à l'air libre.
5. le frottis sec à travers la flamme de manière à ce que la face du frottis soit orientée vers le
haut.
PROCEDURE
1. Placer les lames au-dessus de la tige de coloration.
2. Couvrir le frottis avec le colorant C-V et laisser agir pendant 1 minute.
3. Lavez-le à l'eau du robinet.
4. Appliquer une solution d'iode de Gram sur la smera et laisser agir pendant une minute.
5. Laver à nouveau la lame au jet d'eau du robinet.
6. Inonder la lame avec l'agent décolorant et attendre 20 à 30 secondes. Cette opération peut
également être réalisée en ajoutant une goutte à goutte à la lame jusqu'à ce que l'agent décolorant
qui s'écoule des lames soit clair.
7. Laver la lame à l'eau courante et l'égoutter complètement.
8. Colorer avec de la safranine et attendre 30 secondes à 1 minute.
9. Laver la lame au jet indirect d'eau du robinet jusqu'à ce qu'aucune couleur n'apparaisse dans
l'effluent, puis sécher à l'aide d'un papier absorbant.
10. Observer la lame au microscope (immersion dans l'huile 100x) à l'aide d'un microscope à

champ clair.

Figure 10 Coloration de Gram

RÉSULTAT

Les résultats de la coloration de Gram sont les suivants :

• Gram positif : apparaît violet foncé

• Gram négatif : Apparaît pâle à rouge foncé

• Levures : Apparaît pourpre foncé

• Cellules épithéliales :Apparaît rouge pâle

 Figure 11 Résultat de la coloration de Gram

EXAMEN DES EXPECTORATIONS PAR COLORATION AU ZINC :

PRINCIPE
Cette procédure est utilisée pour colorer mycobacterium tuberculosis et mycobacterium leprae.
Ces bactéries sont également appelées bacilles acido-rapides. Ils sont colorés au carbol fuschin,
qui est un colorant rouge. Ils retiennent le colorant lorsqu'ils sont traités à l'acide, ce qui est dû à
la présence d'acide mycolique dans leur paroi cellulaire.

Figure 12 Coloration au Zn
REAGENTS :
• Carbol fuschin (colorant basique)

• Acide sulfurique à 20 % (décolorant)

• Bleu de méthylène (contre-coloration) ou vert de malachite

 Figure 13 Kit de coloration Zn T.B.

PROCEDURE
1. Répartir uniformément les expectorations sur la zone centrale de la lame en effectuant un
mouvement de rotation continu. La taille recommandée du frottis est d'environ 20 mm sur
10 mm.
2. Placer les lames sur le séchoir, la surface maculée vers le haut, et sécher à l'air pendant
environ 30 minutes Fig. Fixation du maculage par la chaleur (en haut : à l'aide d'un
radiateur électrique, en bas : à l'aide d'un brûleur)
3. Fixer à la chaleur le frottis séché.
4. Recouvrir le frottis d'une coloration à la fuchsine de carbol.
5. Chauffer le frottis jusqu'à ce que la vapeur commence à s'élever (c'est-à-dire environ 60
degrés Celsius). Ne pas surchauffer (faire bouillir ou sécher). Ajouter de la teinture si
nécessaire. Laisser le colorant chauffé sur la lame pendant 5 minutes.
6. Laver la tache à l'eau claire.
7. Couvrir le frottis avec de l'alcool acide à 3 % v/v pendant 2 à 5 minutes (ou de l'acide
sulfurique à 20 %) ou jusqu'à ce que le frottis soit suffisamment décoloré.
8. Laver à l'eau claire
9. Recouvrir la tache de vert malachite pendant 1 à 2 minutes.
10. Laver la tache à l'eau claire
11. Essuyer le dos de la lame et la placer dans un égouttoir pour que le frottis sèche à l'air
Examiner le frottis au microscope, en utilisant l'objectif à immersion d'huile 100x
(oculaire 10X pour un grossissement total de 1000X) et balayer le frottis
systématiquement.

RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION :
BACILLI ACIDES RAPIDES :Il s'agit de tiges rouges, droites ou incurvées, isolées
ou en petits groupes.
CELLULES: Apparaissent en vert (vert malachite) ou en bleu (bleu de méthylène)
CONTEXTE :Apparaît en vert (vert malachite) ou en bleu (bleu de méthylène).
Figure 14 Diapositive de la coloration au Zn
HÉMATOLOGIE
2.1 NUMÉRATION SANGUINE COMPLÈTE (CBC) :
Un analyseur d'hématologie a permis de déterminer les taux de TLC, de plaquettes, de réticules,
de DLC, de TRBC, de MCV, de MCH, de MPS et de MCHC. Ces tests sont appelés
collectivement "numération globulaire complète" ou "image complète". Ce test a été réalisé à
partir de sang total non coagulé. Le test de PC a été effectué par l'analyseur hématologique qui
prélève automatiquement le sang et affiche le résultat en une minute sur l'écran de l'ordinateur.

La numération sanguine complète est également appelée image complète. Dans le laboratoire du
MMC, le CP a été effectué sur l'analyseur d'hématologie. L'analyseur hématologique est un
instrument qui permet de compter toutes les cellules présentes dans le sang. On a également
compté la numération différentielle des leucocytes. Il compte toutes les cellules du sang en une
minute avec des intervalles de référence et les résultats sont affichés sur le système informatique.
 Figure 15 analyseur d'hématologie

Le rapport du CP a été informatisé. Au CP, les tests suivants ont été effectués
Tableau 1 Rapport du CBC
Test Gamme de référence

Hb Homme : 14 - 18 g/dl
Femme : 11 - 16 g/dl

RBC 4,0 - 6,0 mil/cmm

HCT Hommes : 42 - 50 %
Femmes : 37 - 57 %

MCV 76 - 96 Fl

MCH 27 - 32 pg

CCML 30 - 35 g/dl

WBC's 4000 - 11000 /cmm

Neutrophiles 40 - 75 %

Lymphocytes 20 - 45 %

Eosinophiles 1-4%

Monocytes 2-6%

Basophiles 0-1%

Plaquettes 150 000 - 400 000 /cmm

2.2 TESTS MANUELS DANS LE LABORATOIRE D'HÉMATOLOGIE. VITESSE DE
SÉDIMENTATION DES ÉRYTHROCYTES (ESR) :

La vitesse de sédimentation des érythrocytes (VS) est un test hématologique courant qui permet
de détecter une inflammation non spécifique causée par une infection, un cancer ou certaines
maladies auto-immunes.

Principe :

Le sang anticoagulé est laissé dans un tube de verre vertical, sans être dérangé pendant un certain
temps, les globules rouges se séparent du plasma. La vitesse de sédimentation est mesurée par le
nombre de millimètres de plasma clair présents en haut de la colonne après une heure (mm/hr).
Ce mécanisme comporte trois étapes :

I. Agrégation : Il s'agit de la première phase au cours de laquelle les globules rouges

s'accumulent. Ce phénomène est connu sous le nom de formation de Rouleaux. Cela
prend 10 à 15 minutes.
II. Sédimentation : Il s'agit de la deuxième phase au cours de laquelle la chute des GR se
produit à un rythme constant. Cela se produit en 30-40 minutes sur 1 heure.
III. Emballage : Il s'agit de la phase finale, également appelée phase stationnaire. Dans ce
cas, le taux de chute est plus lent et les globules rouges sédimentés se tassent dans la
colonne en raison de l'encombrement. Il se produit dans les 10 dernières minutes de 1
heure.
MÉTHODE WESTERGREN
Le tube de Westregren a deux extrémités ouvertes. Sa longueur est de 30 cm et son diamètre de 2,5 mm.
Il contient environ 2 ml de sang.

EXIGENCES
• Sang anticoagulé (0,4 ml de solution de citrate trisodique à 3,13 % + 1,6 ml de sang)

• Tube de Westergren

• Stand Westergren
• Poire en caoutchouc (ventouse)
PROCEDURE
1. Mélanger le sang anticoagulé.
2. Aspirer le sang dans le tube jusqu'au repère 0.
3. Essuyer le sang au fond du tube avec du coton.
4. Placer le tube à la verticale dans le support.
5. Laisser le tube en place pendant 1 heure.
6. Lire le résultat au bout d'une heure.
VALEUR NORMALE
• Pour les hommes : 0-10 mm/h
• Pour les femelles : 0-15 mm/h

Figure 16 ESR par la méthode Westergren

2.2 ESSAI D'ÉCAILLAGE :
Il s'agit d'un test sanguin utilisé pour déterminer si vous êtes atteint de drépanocytose ou de trait
drépanocytaire. La drépanocytose est un groupe de maladies héréditaires des globules rouges.
Les personnes atteintes de cette maladie ont des globules rouges de forme anormale. Au lieu de
ressembler à des beignets comme les globules rouges normaux, ils ont la forme d'un croissant de
lune.

PRINCIPE :
Le méta-bi-sulfate de sodium réduit la tension de l'oxygène, ce qui provoque la drépanocytose
typique.

CONDITIONS À REMPLIR :

• Couverture
• Cire
• Microscope
• Diapositives en verre
• Méta-bi-sulfate de sodium

• Eau distillée

Collecte et préparation des échantillons :

1. Des échantillons de sang frais peuvent être prélevés par ponction digitale.

2. Utiliser du sang total anticoagulé, des concentrés de cellules, des segments de

banque de sang contenant du sang total ou des concentrés de cellules avec des
solutions additives. Ne jamais utiliser de sang coagulé.
3. Les échantillons de sang conservés à une température comprise entre 1 et 10 °C pendant
45 jours au maximum peuvent être utilisés pour les tests.

Procédure :

1. 0,2 gramme de méta-bi-sulfate de sodium dissous dans 10 ml d'eau distale.

2. 5 gouttes de cette solution et 1 goutte de sang, puis mélangez bien.
3. Déposer une goutte de ce mélange sur une lame de verre, placer la lamelle couvre-objet
sur la goutte de manière à éviter la formation de bulles.
4. Couvrir le bord avec le mélange de cire et de vaseline. Laisser reposer à température
ambiante pendant 1 à 4 heures.
5. Examinez-le au microscope.
INTERPRÉTATION
1. Dans les échantillons positifs, les globules rouges typiques en forme de faucille
apparaissent (Fig. 2.4). Occasionnellement, la préparation peut devoir reposer jusqu'à
24oC
. Dans ce cas, placez les lames dans une boîte de Petri humide.
2. Des résultats faussement négatifs peuvent être obtenus si le méta-bi-sulfite s'est détérioré
 ou si la lamelle couvre-objet n'est pas correctement scellée.
3. Un test positif ne permet pas de distinguer le trait drépanocytaire de la drépanocytose. Il
est important d'examiner attentivement la préparation et en particulier le bord de la page
de garde.

SÉROLOGIE
3.1 GROUPE SANGUIN
Principe :
Il s'agit d'une réaction antigène-anticorps. Il existe principalement 3 types d'antisérums pour
ABO et 1 antisérum pour Rh D. Il s'agit d'anticorps spécifiques, de type IgM. Si un antisérum
d'un type donné est mélangé à des globules rouges, il y a agglutination, ce qui signifie que
l'antigène correspondant est présent à la surface des globules rouges. Si l'anti-A donne une
agglutination avec les globules rouges, le groupe est A. Si l'agglutination se produit avec le
mélange de globules rouges anti-B, le groupe est B. En l'absence de réaction sur A ou B, on parle
de O. Si la réaction est positive à la fois sur A et B, le groupe est AB. Normalement, le test en
tube est effectué dans les banques de sang. Un test inverse est également effectué pour confirmer
le groupe ABO.
Exigences :
• Antisera A
• Antisera B
• Antisera C
• Tubes à essai
• Diapositives
Groupement de transmission

• Méthode du tube
• Méthode des carreaux
• Méthode des diapositives

Procédure :

1. Déposer une goutte d'antisérum A, d'antisérum B et d'antisérum D sur trois lames

différentes.
2. Et 1 goutte de sang et mélanger avec un bâtonnet stérile.
3. Observer l'agglutination.
INTERPRÉTATION
ABO TYPING
Si vos cellules sanguines collent entre elles lorsqu'elles sont mélangées à d'autres :
• Sérum anti-A, vous avez du sang de type A
 • Sérum anti-B, vous avez du sang de type B
• Sérums anti-A et anti-B, vous êtes du groupe sanguin AB
• Si vos cellules sanguines ne s'agglutinent pas lorsqu'on y ajoute des anti-A et des anti-B,
vous êtes du groupe O.

Dactylographie RH :
• Si vos cellules sanguines s'agglutinent lorsqu'elles sont mélangées à du sérum anti-Rh,
vous êtes du groupe Rh positif.
• Si votre sang ne coagule pas lorsqu'il est mélangé à du sérum anti-Rh, vous êtes du
groupe Rh négatif.
• La compatibilité croisée est réalisée avant la transfusion sanguine afin de déterminer si le
sang du donneur est compatible (ou incompatible) avec le sang du receveur. La
compatibilité est déterminée par la concordance des différents systèmes de groupes
sanguins, dont les plus importants sont les systèmes ABO et Rh.
Procédure

1. Préparer les échantillons de sang du donneur et du receveur.

2. Pour la compatibilité croisée majeure, nous prenons les globules rouges du donneur et le
sérum ou le plasma du receveur.
3. Préparer des suspensions cellulaires de globules rouges à 3 - 5 % Étiquette d'un tube à
essai. Ajouter 2 gouttes de sérum du patient et 1 goutte de la suspension de cellules du
donneur.
4. Mélanger les deux tubes et incuber à 37°C pendant 45 minutes.
5. Ajouter 2 gouttes de AHG (globuline antihumaine) et mélanger.
6. Centrifuger le tube pendant 1 minute à 1500 rpm
7. Lisez-le au microscope et à l'œil nu et notez les résultats.

L'INTERPRÉTATION :
• Agglutination = non compatible
• Pas d'agglutination = compatible
 Figure 17 Procédure de correspondance croisée

3.3 HBsAG :
PRINCIPE :
Il s'agit d'un immunodosage qualitatif à flux latéral pour la détection de l'HBsAG dans le sérum
ou le plasma. La membrane est pré-enduite avec des anticorps anti-HBsAG dans la région de la
ligne de test. Pendant le test, l'échantillon de sérum ou de plasma réagit avec la particule
recouverte d'anticorps anti-HBsAG. Le mélange migre vers le haut de la membrane par
capillarité pour réagir avec les anticorps anti-HBsAG sur la membrane et générer une ligne
colorée. La présence de cette ligne colorée dans la zone de test indique un résultat positif, tandis
que son absence indique un résultat négatif. Pour servir de contrôle de procédure, une ligne
colorée apparaîtra toujours dans la région de la ligne de contrôle, indiquant qu'un volume
approprié d'échantillon a été ajouté et que la membrane a été mouchée.

Figure 18 Kit de test HBsAG

L'INTERPRÉTATION DU TEST :
• La bande de couleur apparaît dans la partie gauche de la fenêtre de résultats pour indiquer
que le test a fonctionné correctement. Ce groupe était un groupe de contrôle.
• La section droite des résultats indique les résultats des tests. Lorsqu'une autre bande de
couleur apparaît dans la partie droite de la fenêtre de résultats, il s'agit de la bande de test.
• Résultat négatif : Présence d'une seule bande violette.
• Résultat positif : Présence de deux bandes.
• Résultat non valide : Après avoir effectué le test, aucune bande de couleur violette
n'était visible dans la fenêtre de résultats ; le résultat a été considéré comme non valide.
 Résultats (comme indiqué dans la figure)

Figure 24 : Résultats du HBsAG

3.4 Dengue
Principe :
Le test rapide est un immunodosage chromatographique à flux latéral. Le test peut être utilisé
avec du sérum et fait appel à une protéine de liaison d'anticorps conjuguée à une particule d'or
colloïdal et à une combinaison unique d'antigènes de la dengue immobilisés sur la membrane.
Une fois l'échantillon ajouté à la cassette de test, le mélange passe à travers le complexe
anticorps/or, qui fixe alors les immunoglobulines de l'échantillon. Lorsque ce complexe passe sur
les antigènes immobilisés sur la membrane, si des anticorps de la dengue (IgG ou IgM) sont
présents, les antigènes les capturent à leur tour. Une bande rose/violette apparaît alors dans la
zone T (Test) de la bandelette. Le complexe restant continue à migrer vers une zone de contrôle
de la bandelette et produit une bande rose/violette dans la zone C. Cette bande de contrôle
indique que le test a été effectué correctement.

Procédure :

1. Amener le sachet scellé à température ambiante, ouvrir le sachet. Une fois ouvert, le
dispositif doit être utilisé immédiatement.
2. Distribuer deux gouttes (50 µl) d'échantillon de sérum dans le puits d'échantillon 'S'.
3. Au bout de quinze minutes, lisez les résultats.

Interprétation :
 1. Si seule la bande C est présente et que les bandes G et M sont absentes, le résultat est
considéré comme négatif.
2. Si la bande M est présente, cela signifie que les IgM de la paradengue sont présentes dans
l'échantillon et que le test IgM est positif.
3. Si la bande G est présente, cela signifie que les IgG de la paradengue sont présentes dans
l'échantillon et que le test IgG est positif.
4. Résultat non valide lorsque la bande C est absente et qu'aucune autre bande n'est
produite.

Figure 25 : Résultats du test de la dengue

3.5 VHC :
Principe :
Il s'agit d'un test qualitatif pour la détection du VHC dans le sérum. La membrane est
précouverte d'antigènes anti-VHC dans la région de la ligne de test. Pendant le test, le sérum
réagit avec des particules recouvertes d'antigènes anti-VHC. La présence d'une ligne colorée
dans la zone de test indique un résultat positif, tandis que son absence indique un résultat négatif.
• Diluant pour essai
• Dropper
• Chronomètre
• Sérum du patient
• Dispositif VHC
Procédure :

1. A l'aide du compte-gouttes en plastique pour l'échantillon, déposer 1 goutte (10µl) de

sérum ou de plasma dans le puits d'échantillonnage circulaire de la carte de test (marqué
"S"), comme indiqué sur la figure.
2. Ajouter 2 gouttes de diluant d'échantillon dans le puits de diluant (marqué "D"), après
l'ajout de l'échantillon, à partir du flacon de diluant à embout compte-gouttes.
 3. Noter les résultats du test après 15 minutes.

L'INTERPRÉTATION DES TESTS :

• La bande de couleur est apparue à gauche de la fenêtre de résultats pour indiquer que le
test a fonctionné correctement. Ce groupe était un groupe de contrôle.
• La section droite des résultats indique les résultats des tests. Lorsqu'une autre bande de
couleur apparaît dans la partie droite de la fenêtre de résultats, il s'agit d'une bande de
test.
• Résultat négatif: Présence d'une seule bande violette.
• Résultat positif: Présence de deux bandes.
• Résultat non valide : Après avoir effectué le test et si aucune bande de couleur violette
n'était visible dans la fenêtre de résultats, le résultat a été considéré comme non valide.

Figure 26 : Dispositif VHC

3.2 H.PYLORI
PRINCIPE :
Le test rapide H.pylori (sang total, sérum, plasma) détecte les anticorps spécifiques à
l'helicobacter pylori par l'interprétation visuelle du développement de la couleur sur la bande
interne. L'antigène H pylori est immobilisé sur la zone test de la membrane. Pendant le test,
l'échantillon réagit avec l'antigène h pylori conjugué à une particule colorée et pré-enrobée sur le
tampon d'échantillonnage du test. Le mélange migre ensuite à travers la membrane par action
capillaire et interagit avec les réactifs présents dans la membrane. Si l'échantillon contient
suffisamment d'anticorps contre l'helicobacter pylori, une ligne colorée se forme dans la zone de
test de la membrane. La présence de cette ligne colorée indique un résultat positif, tandis que son
absence indique un résultat négatif. L'apparition d'une ligne colorée sur la région de contrôle sert
de contrôle de procédure, indiquant que le volume approprié d'échantillon a été ajouté et que la
membrane a été mouchée.

EXIGENCES

• Diluant
• Pipette
• Sérum ou sang total du patient
• H.pyori Dispositif TIC

PROCEDURE

1. Retirer le dispositif d'essai de la feuille ; placer le dispositif sur une surface plane.
2. Transférer 10µl de (sérum ou plasma) 20µl de sang total dans le(s) puits d'échantillon de
l'appareil de test, puis ajouter 3 gouttes de diluants de dosage et démarrer le chronomètre.
3. Lorsque le test commence à fonctionner, une couleur violette se déplace sur la fenêtre de
test au centre de l'appareil.
4. Interpréter le résultat après 10 minutes, un résultat positif ne changera pas une fois qu'il a
été établi en 10 minutes, cependant, afin d'éviter des résultats incorrects, le résultat ne
sera pas lu après 10 minutes.

INTERPRÉTATION DU TEST

1. Résultat négatif : Présence d'une seule bande violette.

2. Résultat positif : Présence de deux bandes.
3. Résultat non valide : Après avoir effectué le test et si aucune bande de couleur violette
n'était visible dans la fenêtre de résultats, le résultat a été considéré comme non valide.
3.7 BRUCELLA : (TEST DE DÉPISTAGE SUR LAME POUR LES ANTICORPS ANTI-
BRUCELLA)
La brucellose a été diagnostiquée pour la première fois par un test sérologique réalisé par Wright
et Smith en 1897 à l'aide d'un simple test d'agglutination en tube.
PRINCIPE :
Une suspension d'antigène BRUCEL -RB lisse et tué est mélangée au sérum du patient.
Anticorps spécifiques contre les antigènes de Brucella s'ils sont présents en concentration
Anticorps spécifiques contre Brucella.
CONDITIONS À REMPLIR :
• Sang (sérum)
• Machine à centrifuger
• Pipette
• Brucella Abortus Regent
• Brucella Melitensis Regent
PROCÉDURE :
1. Prélever du sang et le centrifuger.
2. Prendre ensuite 10ul de sérum et ajouter une goutte de réactif Brucella Abortus et
Brucella Melitensis dans chaque 10ul de sérum et mélanger le tout pendant environ 3
minutes.
3. Examinez maintenant l'échantillon et observez l'agrégation des cellules, qui indique la
présence de Brucella.
TEST DE GROSSESSE
Le test de grossesse est un simple test d'urine qui confirme si une femme est enceinte. Dans ce
test, on recherche une hormone appelée gonadotrophine chorionique humaine (HCG). La HCG
est libérée lorsqu'un ovule fécondé se fixe à la paroi de l'utérus.
PRINCIPE :
Le test HCG suit le principe de l'immunochromatographie, un test immunologique unique à deux
sites sur une membrane. Lorsque l'échantillon traverse la membrane à l'intérieur du dispositif de
test, le conjugué coloré d'or colloïdal anti-HCG se lie à l'HCG dans l'échantillon. Ce complexe se
déplace sur la membrane jusqu'à la zone de test où il est immobilisé par l'anti-hCG enduit sur la
membrane, ce qui entraîne la formation d'une ligne de couleur rose qui confirme un résultat de
test positif. L'absence de cette ligne colorée dans la zone de test indique un résultat négatif. Le
conjugué qui n'a pas réagi et le complexe non lié forment une ligne rose.
ensuite immobilisés par les anticorps anti-souris enduits sur la membrane dans la région de
contrôle. Cette ligne de contrôle sert à valider les résultats des tests.

EXIGENCES EN MATIÈRE DE SPÉCIMENS :

VOLUME REQUIS :
Les échantillons prélevés tôt le matin sont les meilleurs car ils sont plus concentrés ; les urines
très diluées doivent être évitées.

STOCKAGE :

Les échantillons peuvent être conservés dans un récipient, sans additif, réfrigérés à 2-
8°C pendant 2 jours ou congelés plus longtemps. Les échantillons doivent être amenés à
température ambiante et mélangés avant d'être testés.

PROCÉDURE :

1. Vérifier que l'échantillon et le kit sont à température ambiante s'ils ont été réfrigérés
auparavant.
2. Vérifier que l'échantillon d'urine est entièrement étiqueté avec l'identification du patient.
3. Retirer le dispositif de la pochette scellée.
4. Étiqueter le dispositif avec les informations d'identification du patient.
5. Placez l'appareil sur une surface plane et propre.
6. A l'aide de la pipette de transfert fournie avec la pochette, transférer 3 gouttes complètes
d'urine (100ul) dans le puits d'échantillon (S).
7. Lire le résultat du test 3 minutes après l'application de l'échantillon d'urine, pas avant

L'INTERPRÉTATION :

• Positif Deux lignes colorées apparaissent, l'une dans la région de contrôle (C) et
l'autre dans la région de test (T). Veuillez noter que si la ligne de test (T) est
faible, il s'agit tout de même d'un résultat positif.
• Négatif Une ligne colorée apparaît dans la région de contrôle (C) et aucune ligne
n'apparaît dans la région de test (T).
• Invalide Aucune ligne n'apparaît dans la région de contrôle (C). Jeter la cassette
et refaire le test, qu'une ligne apparaisse ou non dans la zone de test.
PATHOLOGIE CHIMIQUE
4.1 ANALYSE D'URINE COMPLÈTE :
En règle générale, une analyse d'urine complète comprend un examen des caractéristiques
physiques de l'urine, une analyse chimique et un examen microscopique des sédiments urinaires.
L'urine doit être recueillie dans un récipient propre, conservée dans un endroit frais et analysée
dès que possible.
LES CARACTÉRISTIQUES PHYSIQUES DE L'URINE :
Les caractéristiques physiques de l'urine comprennent l'observation et la mesure de la couleur, de
la turbidité, de l'odeur, de la gravité spécifique, du pH et du volume. L'observation visuelle d'un
échantillon d'urine peut fournir des indices importants quant à la présence d'une pathologie.
COULEUR :
La couleur de l'urine normale est généralement jaune clair à ambre. En général, plus le volume
de soluté est important, plus la couleur est intense. La couleur jaune de l'urine est due à la
présence d'un pigment jaune, l'urochrome. Les écarts par rapport à la couleur normale peuvent
être causés par certains médicaments et par divers légumes tels que les carottes, les betteraves et
la rhubarbe.
VOLUME :
La quantité moyenne d'urine éliminée par un adulte en 24 heures est de 1200 à 1500 ml. Pendant
la nuit, la quantité d'urine n'a jamais été supérieure à 400 ml.
ODEUR :
L'odeur de l'urine était fruitée en présence de corps cétoniques.
En présence de certaines bactéries, l'urine a une odeur ammoniacale.
TURBIDITÉ:
L'urine normale est transparente ou claire ; elle devient trouble à l'arrêt. L'urine trouble peut être
le signe de la présence de phosphates, d'urates, de mucus, de bactéries, de cellules épithéliales ou
de leucocytes.
 Figure 19 Prélèvement d'un échantillon d'urine pour des tests physiques et autres.

L'EXAMEN CHIMIQUE :
Pour effectuer l'examen chimique, la plupart des laboratoires cliniques utilisent des bandelettes
de test préparées commercialement ( ) avec des tampons imprégnés de produits chimiques. Nous
trempons la bandelette dans l'urine, les réactions chimiques modifient les couleurs des tampons
en quelques secondes ou minutes, et nous déterminons le résultat de chaque test.
Le degré de changement de couleur sur un tampon d'essai peut donner une estimation de la
quantité de substance présente. Par exemple, un léger changement de couleur dans le tampon de
test pour les protéines peut indiquer la présence d'une petite quantité de protéines dans l'urine,
tandis qu'un changement de couleur profond peut indiquer une grande quantité.
Les tests chimiques les plus fréquemment effectués à l'aide de bandelettes réactives sont les
suivants :
• Gravité spécifique (SG)
• pH
• Protéines
• Glucose
• Cétones
• Sang (hémoglobine) et myoglobine
• Estérase leucocytaire
• Nitrite
• Bilirubine
• Urobilinogène
PH de l'urine :

• Elle était normalement acide (pH 6,0).

• Elle a été mesurée par la bande de papier à l'aide de pinces.
• pH normal de l'urine : pH = 5,0 à 7,0
• Un pH acide de 4,5 à 5,5 a été observé dans les cas de diabète sucré, de molécules
fatiguées, etc.
• Un pH alcalin de 7,8 à 8,0 a été observé dans les infections urinaires.

Figure 20 : Flacons de bandelettes urinaires avec fiches étiquetées

Glucose :
Le glucose n'est normalement pas présent dans l'urine. Lorsque le glucose est présent, on parle de
glucosurie.
• Le glucose a été détecté par la méthode de la bandelette.
• On a examiné le changement de couleur du mélange.

Tableau 2 interprétation du glucose

Couleur Résultat %
Bleu Négatif
Vert Une trace
Vert avec précipités jaunes + 0.5%
Jaune à vert foncé ++ 1%
Orange +++ 1.5%
Rouge brique ++++ 2%

Protéines :
Le tampon de test protéique fournit une estimation approximative de la quantité d'albumine dans
l'urine. L'albumine représente environ 60 % des protéines totales du sang. Normalement, il n'y a
pas de protéines ou une petite quantité de protéines dans l'urine. Lorsque le taux de protéines
urinaires est élevé, on parle de protéinurie.
• La protéine a été détectée par la bandelette.
 • Le changement de couleur de la bande indique que la protéine (albumine) est trouble.
Tableau 3 interprétation des protéines dans les urines
Nébulosité Résultat
Pas d'opacité Négatif

Légèrement nuageux +
Nuages modérés ++

Forte nébulosité +++ et plus exprimés en ++++

Pigments biliaires :

• Les pigments biliaires ont été détectés par la méthode de la bandelette.

• La production de couleur indique les pigments biliaires.

Tableau 4 interprétation du pigment biliaire dans l'urine

Test Couleur produite
Test négatif Couleur jaune pâle

Faiblement positif Couleur vert pâle +

Test positif Couleur vert foncé ++

Sels biliaires :

• La production de la couleur permet d'observer la présence de sels biliaires.

• La couleur a été modifiée par le mélange de nitroprussiate de sodium dans le tube d'urine.
• Après dissolution, on a constaté la présence de sels biliaires.

Figure 21 : Bandelette urinaire avec résultats négatifs et positifs

 Test négatif Pas de changement de couleur.

Anneau violet à la jonction de deux couches.

Test positif :

CORPS CÉTONIQUES :

Les cétones ne sont normalement pas présentes dans l'urine. Ce sont des produits intermédiaires
du métabolisme des graisses. Elles apparaissent lorsque les cellules de l'organisme ne disposent
pas de glucose comme source d'énergie. Ils peuvent se former lorsqu'une personne ne mange pas
assez de glucides (par exemple, en cas de jeûne, de famine ou de régime hyperprotéiné) ou
lorsque l'organisme ne peut pas utiliser correctement les glucides.

• Il a été détecté par la bande.

Couleur produite Résultat
Pas de couleur Négatif
Grâce +
Rose clair ++
Pourpre +++

Sang dans les urines:

Ce test est utilisé pour détecter la présence d'hémoglobine dans les urines (hémoglobinurie).
L'hémoglobine est une protéine impliquée dans le transfert de l'oxygène qui se trouve dans les
globules rouges (GR). Sa présence dans les urines indique la présence de sang dans les urines (
hématurie). Le sang dans l'urine a été détecté par changement de couleur de la bandelette.

Tableau 5 interprétation du sang dans les urines

couleur produite
Résultat
Jaune Négatif

Couleur jaune avec granules +

Vert ++
 Vert foncé +++

Examen microscopique
L'examen microscopique est effectué sur un sédiment urinaire - urine qui a été centrifugée pour
concentrer les substances qu'elle contient au fond d'un tube à environ 1500 tours par minute
pendant 5 minutes. Le liquide en haut du tube est jeté et les gouttes de liquide restantes sont
examinées au microscope. Les cellules, les cristaux et les autres substances sont comptés et
rapportés soit comme le nombre observé "par champ de faible puissance" (LPF), soit comme le
nombre observé "par champ de forte puissance" (HPF). En outre, certaines entités, si elles sont
présentes, sont estimées comme étant "peu nombreuses", "modérées" ou "nombreuses", telles
que les cellules épithéliales, les bactéries et les cristaux. Les cellules et autres substances qui
peuvent être observées sont les suivantes :
• Cellules épithéliales
• Bactéries, levures et parasites
• Globules rouges (GR)
• Globules blancs (WBCs)
• Trichomonas
• Distribution
• Cristaux
RBC :
Normalement, quelques GR sont présents dans les sédiments urinaires (0-5 GR par champ de
haute puissance, HPF). Une augmentation du nombre de globules rouges observés au microscope
indique qu'il y a du sang dans l'urine. qui a été vu comme
• Petit disque jaunâtre plus foncé sur le bord d'environ 8 µ de diamètre.
 Figure 22 RBC dans l'urine sous l'objectif 40x
WBC's:
Le nombre de GB dans le sédiment urinaire est normalement faible (0-5 GB par champ de haute
puissance, HPF). Les GB peuvent être un contaminant, comme ceux provenant des sécrétions
vaginales. Un nombre accru de globules blancs observés dans l'urine au microscope peut être le
signe d'une inflammation ou d'une infection quelque part dans les voies urinaires. Si elles sont
également accompagnées de bactéries (voir ci-dessous), elles indiquent une probable infection
des voies urinaires. qui a été vu comme :

• Un disque granuleux clair était présent dans les GB intacts.

• Les GB dégénérés sont moins granuleux, rétrécis et déformés.

• Des amas de nombreuses cellules dégénérées se trouvent dans le cas du pus.

• La présence de nombreux GB en amas signifie qu'il s'agit d'une infection urinaire.

Figure 23 GB observés dans un échantillon d'urine sous l'objectif 40x

Cellules épithéliales
Les cellules épithéliales sont généralement signalées comme étant "peu nombreuses",
"modérées" ou "nombreuses" par champ de faible puissance (LPF). Normalement, chez les
hommes et les femmes, quelques cellules épithéliales peuvent être trouvées dans le sédiment
urinaire. Dans les affections des voies urinaires telles que les infections, les inflammations et les
tumeurs malignes, un nombre accru de cellules épithéliales est présent.

Bactéries, levures et parasites

Chez les personnes en bonne santé, les voies urinaires sont stériles et, si l'échantillon d'urine est prélevé
comme un échantillon de "nettoyage", aucun microbe ne sera visible au microscope dans le sédiment
urinaire.

4.1 TEST DE GLYCÉMIE MÉTHODE GOD PAP

La détermination de la concentration de glucose est importante pour le diagnostic et le traitement
des troubles du métabolisme des glucides. Les valeurs supérieures ou inférieures à la référence
ont une signification diagnostique. Les niveaux sont augmentés en cas de diabète sucré,
d'hyperthyroïdie et d'hyperactivité de la glande pituitaire. Des taux réduits sont observés en cas
de surproduction d'insuline par le pancréas, de tumeurs du pancréas, ainsi qu'en cas
d'hypofonctionnement des organes impliqués dans la synthèse du glucose et le métabolisme des
hydrates de carbone.

PRINCIPE :
Déterminer le glucose après oxydation enzymatique par la glucose oxydase. L'indicateur
colorimétrique est la quinonémine, qui est générée à partir de 4-aminoantipyrine et de phénol par
le peroxyde d'hydrogène sous l'action catalytique du peroxyde.

Glucose + O2 GOD Acide gluconique + H2O2

2H2O2 + Aminoantipyrine + phénol POD Quinonéimine + 4H2

LE MATÉRIEL D'ÉCHANTILLONNAGE :

Sérum hépariné ou plasma EDTA.

PROCÉDURE :

• Prélever 100µl de réactif dans un tube de verre.

• Ajouter ensuite 10µl de sérum et incuber pendant 5 minutes à 37c.
• Le tube d'échantillon est ensuite chargé sur l'analyseur après avoir réglé le programme
requis pour le glucose. Les résultats sont affichés à l'écran.

ACIDE URIQUE(CRITÈRE D'ÉVALUATION) :

PRINCIPE :
L'acide urique est oxydé par l'uricase en allantoïne avec formation de peroxyde d'hydrogène. En
présence de peroxydase (POD), un mélange de sulfate de dichlorophénol (DCPS) et de
4aminoantipyrine 4-(AA) est oxydé par le peroxyde d'hydrogène pour former un colorant
quioneimine proportionnel à la concentration d'acide urique dans l'échantillon.

LE MATÉRIEL D'ÉCHANTILLONNAGE :
sérum exempt d'hémolyse, plasma EDTA ou hépariné et urine.
PROCÉDURE :
• 1000µl de monoréactif sont prélevés dans un tube à essai en verre et 10µl de sérum sont
ajoutés.
• Incuber pendant 5 minutes à 37°C.
• Le tube d'échantillon est ensuite chargé sur l'analyseur après avoir réglé le programme
requis pour l'acide urique.
• Les résultats sont affichés à l'écran.
4.4 TEST DE L'ALANINE AMINOTRANSFÉRASE :
L'ALT est une enzyme cytoplasmique. Elle est principalement localisée dans les hépatocytes. Il est libéré
dans le sang lors de l'endommagement des cellules. La détermination de l'activité ALT dans le sérum est
principalement utilisée pour évaluer les lésions hépatiques.

PRINCIPE
L-alanine + α-cétoglutarate L-glutamate + pyruvate (En présence d'ALT)

Pyruvate + NADH + H Lactate + NAD (en présence de LDH)

L'alanine aminotransférase (ALT) catalyse le transfert du groupe aminé de la L-alanine à l'α-
cétoglutarate, ce qui entraîne la formation de pyruvate et de L-glutamate. La lactose
déshydrogénase (LDH) catalyse la réduction du pyruvate et l'oxydation simultanée du NADH +
en NAD. Le taux de diminution de l'absorbance à 340 nm qui en résulte est directement
proportionnel à l'activité de l'ALT.

LE MATÉRIEL D'ÉCHANTILLONNAGE :
Sérum non hémolysé, plasma hépariné ou EDTA.
PROCÉDURE :
• Prélever 500ul de réactif dans le puits de réactif, placer le tube à essai pendant 2 min à
 37C.
• Ajouter 50ul de sérum prélevé lors de la centrifugation dans le tube de réactif, mélanger
et vider la machine en 3-4 secondes.
• Notez la lecture de la machine.
CONDITIONS À REMPLIR :
GAMME DE RÉFÉRENCE :
Adultes Femmes;31U/ML

Hommes adultes ; 41 U/L

4.1 TEST DE L'ASPARTATE AMINOTRANSFÉRASE

L'aspartate aminotransférase est une enzyme présente dans le foie, mais aussi dans les globules
rouges, les cellules cardiaques, le tissu musculaire et d'autres organes, les reins et le pancréas.
Lorsque le tissu corporel ou un organe tel que le foie ou le cœur est malade, des AST
supplémentaires sont libérées dans la circulation sanguine, ce qui entraîne une augmentation des
niveaux de l'enzyme. Par conséquent, la quantité d'AST et d'ALT dans le sang est directement
liée à l'étendue des lésions tissulaires. Après une atteinte sévère, les taux d'AST augmentent de
10 à 20 fois par rapport à la normale, tandis que les taux d'ALT peuvent atteindre des niveaux
plus élevés (jusqu'à 50 fois par rapport à la normale).

PRINCIPE :
L'aspartate aminotransférase peut être dosée par spectrophotométrie dans une réaction couplée
avec la malate déshydrogénase en présence de NADH. Une unité oxyde une micromole de
NADH par minute à 25°C et pH 7,4 dans les conditions spécifiées.

Procédure :
Régler le spectrophotomètre à 340 nm et à 25°C. Pipeter 2,9 ml du mélange de réactifs dans une
cuvette et placer dans le spectrophotomètre. Incuber pendant 3 à 4 minutes pour atteindre
l'équilibre de température et établir le taux de blanc, le cas échéant. Au temps zéro, ajouter 0,1
ml d'enzyme diluée de façon appropriée et enregistrer la diminution de A 340 pendant 4 à 5
minutes. Calculer ΔA 340 /minute à partir de la partie linéaire initiale de la courbe.

GAMME NORMALE :
Les concentrations normales dans le sang sont comprises entre 5 et 40 UI/L pour l'AST
BIOLOGIE
MOLÉCULAIRE
5.1 EXTRACTION DE L'ADN :

CONDITIONS À REMPLIR :
• Réactif Chelex
• Tubes Ependorf
• Centrifugeuse
• Vortex
• bloc chauffant
PROCEDURE
• Préparer une solution de chelex à 5-7%.
• Aliquoter 300uL de solution dans un tube Ependorf de 15ml.
• Prélever 300uL de sang et 3mL d'eau distillée ou de solution de lyses de GR.
• Centrifuger à 5000 rpm pendant 2 minutes.
• Répéter l'étape des lyses.
• Ajouter 300uL de solution de chelex à 5-7%.
• Mélanger au vortex pendant 15 à 20 secondes.
• Placer le tube dans un bloc chauffant à 95°C pendant 20 minutes.
• Mélanger au vortex pendant 15 à 20 secondes.
• Centrifuger à 10 000 tours/minute pendant 2 minutes.
• Transférer le surnageant dans un tube Ependorf et l'utiliser comme source d'ADN.
PRÉPARATION DU MÉLANGE MAÎTRE POUR LA PCR :
1. Assembler tous les composants de la réaction sur de la glace et préparer le mélange
maître selon le tableau suivant
2. Mélanger doucement la réaction. Recueillir tout le liquide au fond du tube par une
rotation rapide si nécessaire.
3. Boucher correctement les tubes PCR.
4. Transférer les tubes PCR de la glace à une machine PCR dont le bloc est préchauffé à
95°C et commencer le thermocycle.
5. Le produit PCR est obtenu après une réaction complète (environ 2 heures).
6. Le produit PCR est obtenu après une réaction complète (environ 2 heures).
7. Le produit PCR est prêt pour l'électrophorèse sur gel afin d'examiner les bandes d'ADN
amplifiées.
Tableau 6 Composants de la PCR
Composant 25 μl de réaction 50 μl de réaction
Tampon de réaction Taq standard 10X 2,5 μl 5 μl
10 mM dNTPs 0,5 µl 1 μl
10 µM Amorce avant 0,5 µl 1 μl
10 µM Amorce inverse 0,5 µl 1 μl
Modèle d'ADN Variable Variable
Taq ADN polymérase 0,125 µl 0,25 µl
Eau exempte de nucléase à 25 µl à 50 µl

Conditions de thermocycle :

Tableau 7 Conditionnement du thermocycleur

STEP TEMP TEMPS
Dénaturation initiale 95°C 30 secondes
30 cycles 95°C 15-30 secondes
65-68°C 1 minute/kb
Extension finale 65-68°C 5 minutes
Tenir 4-10°C

5.1 Électrophorèse sur gel d'agarose

1. Ajouter un colorant de charge aux échantillons d'ADN (produit PCR) à séparer.
2. Programmer l'alimentation électrique à la tension souhaitée (1-5 v/cm entre les
électrodes).
3. Ajouter suffisamment de tampon de fonctionnement pour couvrir la surface du gel. Il est
important d'utiliser le même tampon que celui utilisé pour préparer le gel.
4. Relier les fils de la boîte à gel à l'alimentation électrique. Mettez l'alimentation électrique
sous tension et vérifiez que le boîtier de gel et l'alimentation électrique fonctionnent.
5. Retirer le couvercle. Introduire lentement et soigneusement les échantillons d'ADN dans
le gel.
6. Un marqueur de taille d'ADN approprié doit toujours être chargé avec les échantillons
expérimentaux.
7. Remettre le couvercle sur la boîte de gel. La cathode (fils noirs) doit être plus proche des
puits que l'anode (fils rouges). Vérifiez que les électrodes sont branchées dans les bons
emplacements du bloc d'alimentation.
8. Mettez l'appareil sous tension. Faire fonctionner le gel jusqu'à ce que le colorant ait migré
 sur une distance appropriée.
9. Lorsque l'électrophorèse est terminée, éteindre l'alimentation électrique et retirer le
couvercle de la boîte à gel.
10. Retirer le gel de la boîte à gel, évacuer l'excès de tampon de la surface du gel. Placer le
plateau de gel sur du papier absorbant pour absorber l'excédent de tampon de
fonctionnement.
11. Exposer le gel à la lumière UV en utilisant un système de documentation du gel. Les
bandes d'ADN doivent apparaître sous forme de bandes fluorescentes. Prendre une photo
du gel.
12. Éliminer correctement le gel et le tampon de fonctionnement conformément à la
réglementation de l'établissement.

Figure 24 Électrophorèse sur gel