Microbiologie alimentaire I

TD 3:
Mesure de la croissance
bactérienne

Dr: BENTOURA A

Année universitaire: 2021/2022

 La croissance
La croissance cellulaire ou bactérienne est l'augmentation du nombre des
cellules individuelles, où une cellule (la cellule mère) se développe et à un
moment donné se divise en deux cellules filles.
 Mesure de la croissance

1- Mesure du nombre 2- Mesure de la masse

(trouble, poids sec)
 1- Mesure du nombre

Méthodes directes: Méthodes indirectes

Estimation de la charge microbienne

Comptage sous microscope après culture grâce à des formules
mathématiques
Cytométrie de flux
En milieu Solide
(UFC = unité formant colonie)

En milieu liquide
(NPP= Nombre le plus probable)
 MESURE DU NOMBRE

1- Méthodes directes

1- COMPTAGE (LECTURE) AU MICROSCOPE

Utilisation de cellule de Malassez

ou hématimètre de Malassez ou
cellule Thoma.

Une cellule de Malassez est une

lame spéciale en verre, quadrillée
qui permet le comptage de
différents types de cellules sous
Microscope.
 100 rectangles

Un rectangle : 0.2 mm x 0.25

mm

Superficie d’un rectangle =

0.05 mm2

Profondeur = 0.2 mm

Volume d’un rectangle = 0.01

mm3

Le volume du quadrillage =
0.01 x 100

1 mm3
Remplissage de l’hématimètre
 Le comptage des cellules

Important

Lorsque la suspension cellulaire est

trop concentrée, il est nécessaire
de réaliser des dilutions préalables
de façon à permettre le comptage
des cellules au microscope.
 Comment calculer n??

On calcule le nombre moyen de

cellules par rectangle (total des
cellules observées dans 10 rectangles
divisé par le nombre de rectangles
comptés) On multiplie le nombre
obtenu par 100 pour connaître le
nombre d'entités cellulaires par mm3
 Avantages / inconvénients
Méthode rapide
Ne permet pas de distinguer entre les cellules mortes et vivantes.

Rq: Il existes des techniques de coloration permettant de distinguer entre les

cellules mortes et vivantes.

Techniques de coloration
1- Colorants vitaux:

(ne tuent pas la cellule) colorants qui mettent en évidence un organite cellulaire
vivant du fait qu’il est capable d’ accumuler ou d’absorber le colorant.

Exemple: rouge neutre

Vivantes : rouge

Mortes : incolores
2- Les colorants supravitaux ou d’exclusion:

(colorent les cellules mortes).

Exp: bleu trypan, bleu de funk

Les cellules vivantes rejettent le colorant (Cellules incolores)

Les cellules mortes conservent le colorant.(Cellules bleues).
 2-Cytométrie de flux:

Un rayon laser permet

d’activer la
fluorescence des
bactéries vivantes. Un
système optique
permet de détecter et
de mesurer les
faisceaux fluorescents
Émis par chaque
cellule (bactérie).
Et enfin, il y’a un
système informatique
qui va quantifier ou
compter le nombre de
cellules.
1- Méthodes indirectes
1- En milieu Solide (UFC = unité formant colonie)
 N = n× 1/d × 1/ v
N : représente la concentration microbienne dans la suspension mère.
d= dilution 1/d : facteur de dilution
V : volume ensemencé à la surface de la gélose (0.1 mL généralement)
 2- En milieu liquide (NPP= Nombre le plus probable)

- Des dilutions.
-milieu de culture
-milieu de croissance sans indicateur, la présence de micro-organismes se
traduit par l’apparition d’un trouble,

milieu distinctif avec indicateur coloré: : la présence du micro-organisme à

quantifier se manifeste par un trouble + le virage de l’indicateur coloré du pH

- volume de l’inoculum à ensemencer : le plus souvent = 1 mL

-choix du nombre d’essais pour chaque dilution (dépend de la précision souhaitée

pour les résultats. On peut faire un seul tube pour chaque dilution(peu
précis) ,mais en général trois tubes sont ensemencés par dilution.
 ou
3
 Dénombrement à un seul essai
(peu précise)
On ensemence 1 tube par dilution avec 1 mL d’inoculum. :

1 mL 1 mL 1 mL

Exemple de résultats
-il y a au moins un micro-organisme dans dilution (10-2) présentant encore un
trouble : la concentration est donc d’au moins 10 puissance 2 micro-
organismes par mL de produit ou de « suspension mère ».

-il y a moins de un micro-organisme dans la dilution (10-3) qui ne présentait pas

de trouble : la concentration est donc strictement inférieure à 10 puissance 3
micro-organismes par mL dans le produit ou la « suspension mère »
Dénombrement à essais multiples
(plus précise)
Ce dénombrement s’effectue en utilisant les tables de Mac Grady
Parmi les différentes combinaisons, on choisit celle correspondant au nombre le
plus grand.

332 correspond au NPP de 110.

Expression des résultats
Le dénombrement après culture
permet de dénombrer que les
cellules viables

Technique pas rapide

 MESURE DE LA MASSE
1. Mesure du poids sec
Les microorganismes sont récoltés par centrifugation ou par filtration sur
membrane ,ensuite lavés avec l’eau distillée. Le culot ou le filtrat est
ensuite desséché à 100-110°C. Puis pesé à chaque fois jusqu’au poids
constant.les résultats sont généralement exprimés en gramme de matière
sèche /Litre ou kilogramme de produit analysé.

Inconvénient: la mesure du poids totalise toute la masse cellulaire vivante et

morte.
2 . Mesure du trouble

Spectrophotomètre
Lorsqu’une lumière d’intensité I0 passe à travers une suspension bacterienne,
une partie de celle-ci est absorbée par les cellules bactériennes « I ». L’intensité
I de la lumière absorbée est donc inférieure à I0 . On définit l’absorbance de la
solution comme :

I0 c’est l’intensité de la lumière incidente qui traverse la suspension

bactérienne.
I c’est l’intensité de la lumière transmise.