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Les diffrents employs s'organisent de faon ce qu'il y ait toujours 3 personnes au laboratoire de
7h00 19h30.
Il faut toujours, selon la lgislation, un biologiste dans le laboratoire, donc et se relaient sur la plage
horaire de 7h00 19h30(parfois plus tard si il reste des analyses faire)
1-4 Organisation du laboratoire
2-2 Hmatologie
Hmogramme (NFS), numration de formule sanguine (globules rouges, globules blancs et
plaquettes)
Principe:
La numration consiste compter les cellules du sang grce un automate. Cet automate est
constitu de 2 lectrodes de platine entre lesquelles on fait passer un courant lectrique:
c'est la mthode Coulter
A chaque passage de cellule, une diffrence de potentiel se cre.
Chaque variation est compte et le nombre de variations correspond au nombre de cellules. De plus,
lintensit de la variation est proportionnelle la taille de la cellule, cest--dire plus la variation est
importante plus la cellule est grosse.
La formule est tablie grce a une diffrentiation chimique qui entre autre sparera les constituants
basophile et acidophile.
De plus la machine tablie le dosage de l'hmoglobine et dtermine Concentration Corpusculaire
FORMULE LEUCOCYTAIRE
Intrt :
La numration permet de connatre avec une certaine prcision le nombre de cellule dans le sang
dun patient.
Les rsultats du patient sont apprcies en comparaison des valeurs de rfrences appeles :
normales .
Cette comparaison permet de mettre en vidence parfois des anomalies , exemple :
- manque dhmoglobine => anmie
-excs de leucocyte => probabilit dinfection, dinflammation ou de leucmie
Comptage des cellules sur cellule de Malassez
Principe :
La cellule de Malassez est une lame pour observation microscopique.
Elle est caractrise par le quadrillage calibr grav sa surface.
Dans le cas o lautomate charg du comptage des cellules ne parviendrait pas donner un rsultat
fiable, il faut quun biologiste observe au microscope un chantillon de sang.
Grce au quadrillage le biologiste va pouvoir compter les diffrentes cellules et comparer avec
lappareil les rsultats obtenus, exemple :
-thrombopnie ( Nombre de plaquettes infrieur a 150 000.)
On fait un contrle en cellule de Malassez aprs passage en unopette
Une unopette dtruit les globules rouges et conserve les plaquette, et les globules blancs.
Intrt :
Ce contrle permet de compter le nombre de plaquettes et de vrifier la prsence ou
dagrgat plaquettaire.
l absence
Principe :
Cette coloration repose sur laffinit acide-base des colorants et des lments cellulaires. Il y a 2
colorants:
-le May Grnwald =>contenant un colorant acide : losine et un colorant basique : le bleu de
mthylne
-le Giemsa => contenant de losine galement, et un colorant basique : lazure de mthyle
Les lments cellulaires acides, seront colors slectivement par les colorants basiques. Ces
lments sont qualifis de basophiles (ADN, cytoplasme des lymphocytes)
Les lments cellulaires basiques, seront colors slectivement par les colorants acides. Ces
lments sont qualifis d'acidophiles ou d'osinophiles (cytoplasme des hmaties)
Les lments neutrophiles sont colors la fois par les colorants acides et basiques.
But :
Dans un premier temps ce test permet dtablir manuellement la formule sanguine si lautomate
met des alarmes.
Dans un deuxime temps ce test permet de vrifier la cytologie (coloration MGG et lecture au
microscope)
-des Globules rouges :
-taille (macrocyte , microcyte )
-forme ( schizocyte , ellytocyte )
-le remplissage en hmoglobine ( exemple : hypochromie => globule rouge en forme de
cible )
-des Globules Blancs :
-quantit ou phase de maturation anormale => leucmies
-plaquettes ( macrothrombocytose => volume plaquettaire moyen elev ou agrgat
plaquettaire.)
photo Hmatie et Lymphocyte vue a lobjectif *100 grce a la coloration de May Grnwald et
Gimsa (on peut voir galement 2 plaquettes a droite en violet)
photo : Hmatie et polynuclaire neutrophile vue a lobjectif *100 grce a la coloration MGG
(reconnaissable la coloration bleu-violet du noyau polylob)
Coloration des rticulocytes
Un rticulocyte est un jeune globule rouge.
Lors de la gense des hmaties (lrythropose) une cellule souche totipotente (qui possde la
facult de se dissocier en leucocyte, en hmatie ou en plaquette) va se dissocier pour arriver
maturit sous la forme dune hmatie.
Lors dune anmie (diminution de lhmoglobine) on va compter les rticulocytes pour savoir de
quelle sorte est lanmie :
-diminution de la production de globule rouge => les hmaties se dgradent normalement mais le
systme pour les remplacer est dfectueux => anmie non rgnrative, le nombre de rticulocytes
baisse.
-acclration de la fabrication => la production des hmaties est stimule, le nombre de
rticulocyte augmente => anmie rgnrative.
La coloration est faite grce au bleu de crsyl brillant qui est un colorant acidophile, donc il va
colorer lappareil nuclaire du rticulocyte qui est acide.
On va donc observer des petits amas bleus qui correspondent a lappareil nuclaire non ject du
rticulocyte.
photo :Rticulocyte par la coloration au bleu de crsyl brillant (caractris par les petits amas
bleus=> matriel nuclaire)
Vitesse de sdimentation :
Principe :
La mesure de la vitesse de sdimentation (appel aussi VS) est un test non spcifique utilis pour
dpister une inflammation.
Pour cela on utilise une loi qui lie la vitesse de chute dune sphre dans un liquide par laction de la
gravit, cest la loi de Stokes.
On a comme formule :
Avec:
v => vitesse limite de chute (en m / s)
r=> rayon de la sphre (en m)
g=> acclration (m / s2)
D(r)=> diffrence de la masse volumique entre la particule et le fluide (en kg / m3)
m=> viscosit du fluide (en Pa.s)
On mesure la vitesse a laquelle tombe les globules rouges en mm/h.
Exemple :
-gpathie monoclonale : les globules rouges se collent , les hmaties forment des rouleaux et
donc en suivant la loi de stock ils tombent plus vite.
-Quand il y a un processus inflammatoire, les protines inflammatoires vont modifier la viscosit
du plasma, se qui vas entrainer laugmentation de la VS.
Lecture et normes :
Le test de base est effectuer sur 2h , les nouveaux procds permettent une mesure en 1h voir mme
30min.
Pour la 1re heure :
glose BromoCrsol Pourpre (BCP) (annexe 1)
-cytologie positive (plus de 20 000 leucocytes et/ou prsence de germes a ltat frais) => glose
chromogne URI 4 (annexe 2 )
Pour les femmes enceintes, on rajoutera une glose au sang + ANC (annexe 3) pour la recherche de
Streptococcus agalacticae ( groupe B) responsable dinfection no-natale.
2-4-2 Coprologie :
La coproculture permet la recherche de bactries pathognes dans les selles.
Ces bactries sont responsables de diarrhe.
Dans une selle il y a 2 types de flore :
-la flore commensale=> Entrobactries, Lactobacillus, Streptococcus.
-la flore pathogne => Salmonella, Shigella, Yersinia et Staphylocoque dor
(enterotoxique)
Mise en uvre :
Examen microscopique
Vrifie si la flore commensale aro anarobie est prsente, absente, ou avec un dsquilibre.
Ensemencement :
-une glose BCP => va mettre en vidence la flore saprophyte (E. coli, entrocoque) et la flore
lactose ngatif ( aromonas pleusiomonas )
-une glose Chapman (annexe 8) slectif des staphylocoques va permettre la recherche de
Staphylococcus aureus enterotoxique dont la toxine est responsable de diarrhe.
-une glose Hekton (annexe 4 ) slectif des gram ngatif utilis pour la recherche des bactries
pathognes de types Salmonella et Shigella.
-un milieu Yersin pour la recherche de Yersinia enterocolictica
-un milieu pour la recherche de campylobactre
-un bouillon slnite qui permet lenrichissement de Salmonella et qui sera repiqu sur glose
SMID (annexe 5 ), les salmonella seront colors en rose indien.
2-4-3 Prlvement Vaginal (PV) :
Au mme titre que la selle il y a dans le vagin une flore commensale appele la flore de Doderlein,
et une flore pathogne. On recherchera des germes pathognes qui sont responsables de maladies
gnitales.
On va ensemencer pour lidentification plusieurs gloses :
-Glose BCP : elle va permettre une vue densemble de la flore non exigeante.
-Glose chocolat (annexe 7) : elle va permettre la pousse dun grand nombre de germes exigeant
ou non.
-Petite colonie brillante => Neisseria (pathogne sexuellement transmissible.) trs exigeant
pousse exclusivement sur glose chocolat.
-Colonie plate et verte => Lactobacillus (commensal )
-Petite colonie blanche => Corynbacterium (commensal )
-Petite colonie blanche qui pousse en suivant les lignes densemencement=>
Gardnerella(pathogne ou grand opportuniste)
-Glose au sang + ANC : isole les GRAM +
-Colonie bta hmolytique => Streptocoques ou Staphylocoques que lont diffrenciera par la
catalase car staphylocoque = catalase + et streptocoque = catalase -. Le test se fait avec lcrasement
dune colonie sur de leau oxygn. Le rsultat est positif sil y dgagement de gaz sous forme
apparente de bulles.
Lidentification du groupe auquel appartient le streptocoque se fera par technique didentification au
latex.
-Glose Sabouraud (annexe 6 ) => slectif des levures par exemple Candida albicans (pathogne
opportuniste)
2-4-4 Identification et antibiogramme
Aprs observation des boites qui servent lisolement des colonies, on peut tre amener identifier
et/ou tablir lantibiogramme, a partir dune culture pure, et pour se faire utiliser des galerie
didentification.
Ces galeries sont constitus de puits dans lesquels sont dposs diffrents substrats quel les
bactries sont susceptible dutiliser. ( LDC , ODC , ADH )
Il faut vrifier labsence dhmolyse, le tube doit tre centrifug dans un dlai de 1h aprs le
prlvement et la mesure doit tre faite 4h maximum entre le prlvement et le rsultat.
T.P (taux de prothrombine)
Le taux de prothrombine est la transformation d'un temps de coagulation (temps de Quick) en
pourcentage.
Le temps de Quick est ralis en mettant en prsence un plasma citrat avec un ractif : la
thromboplastine calcique, qui joue le rle d'activateur tissulaire de la coagulation.
Le plasma coagule et le temps obtenu s'appelle le temps de Quick.
Le taux de prothrombine se calcul grce a une formule mathmatique en fonction du temps de
Quick.
Le TP est une mesure trs sensible aux conditions opratoires cest pour cela que la valeur du TP est
lisse grce a lINR (international normalized ratio), et le rsultats sont comparables dun
laboratoire a un autre.
Avec :
TQpatient : le temps de Quick mesur pour le plasma du patient tester ;
TQTemoin : le temps de Quick tmoins (TP = 100 %) ;
ISI : l'indice de sensibilit international spcifique du ractif thromboplastine utilis.
L'INR n'a pas d'unit. Il est, par dfinition, indpendant du ractif utilis, et plusieurs mesures
successives, faites dans des laboratoires diffrents, peuvent tre compares entre elles sans
problme.
T.C.A (Temps de cphaline active)
Cest un temps de coagulation qui explore la voie intrinsque.
Cette mesure se fait en rapportant le temps de coagulation du patient a celui dun tmoin.
Il sagit de mesurer le temps de coagulation dun plasma sanguin recalcifi en prsence de
cphaline et dun activateur particulier.
On exprime le ratio telle la formule :
2-6 Recherche dagglutination irrgulire (R.A.I)
Principe :
Ce test se fait sur plaque dans des puits ou il y a un gel filet au fond.
On met en prsence le srum du patient(Anticorps) avec des antignes spcifiques des agglutinines
irrgulires.
Si la raction antigne anticorps a lieu il y a une agglutination visible a lil nue
Cette raction a lieu pendant la priode dincubation de 15 min 37C.
Ensuite on centrifuge, ce qui va permettre aux Ag et aux Ac qui nont pas agglutins de traverser
compltement le gel et de tomber au fond du puits.
En revanche les complexe Ag/Ac qui sont gros, sont retenue dans les mailles du gel et visible car
diffues.
Si diffusion dagglutination dans le gel, le test est considr comme positif.
3-bilan
3-1 personnel et relationnel:
Dun point de vue personnel le stage ma intresser, jai pu dcouvrir le travail dun laboratoire
danalyses et les responsabilits qui incombent a un technicien.
Je suis aussi ravi que toute les personnes du laboratoire maient accord du temps pour mapprendre
et mexpliquer le fonctionnement des machines, jai pu aussi mpanouir dans une grande libert et
mme utiliser le matriel du laboratoire pour mexercer.
Je voudrais insister sur le relationnel entre les diffrentes personnes du laboratoire, en effet dans ce
travail le bon fonctionnement est de essentiellement la communication, on peut reprsenter la
communication comme cela:
Biologistes
technicien
secrtaire
Jai dcouvert un travail enrichissant bas sur lutilisation de machines, le travail de technicien est
de vrifier ltat de fonctionnement de ces machines mais aussi de faire un premier diagnostique
pour le biologiste.
Le travail de technicien rclame rigueur, prcision et une prise dinitiative constante.
Dans le cadre de mon stage jai pu mentretenir avec un technicien et jai pu avoir plus de
prcisions sur le mtier de technicien, malheureusement ce mtier est vou a disparatre , en effet
avec lautomatisation de tous les tests de laboratoire il ny aura besoin que dun technicien pour
vrifier le bon fonctionnement des machines et un biologiste pour valider les rsultats.
Le nouveau rle du technicien sera dassurer le prlvement sanguin, le pr et le post analytique.
Remerciements:
Je tiens tout dabord remercier de mavoir permis deffectuer mon stage au sein de leur laboratoire
et davoir mis ma disposition tout le matriel ncessaire pour me permettre dacqurir une
meilleure technique de travail
Je tiens aussi remercier toute lquipe du laboratoire pour mavoir soutenu dans mon travail et
pour mavoir appris comment travailler dans un laboratoire danalyses.
Je voudrais aussi remercier plus particulirement Monsieur pour avoir fait preuve dune grande
tnacit dans mon apprentissage et davoir souvent pris sur son temps libre pour maider dans le
travail dun technicien
ANNEXE 1
ANNEXE 3
ANNEXE 4
ANNEXE 8
couleur du bouchon
caractristiques/compositions
analyses ralises
Rouge
tube sec sans anticoagulant
ou tube sec + activateur de coagulation (silice ou thrombine)
analyses de chimie, d'immunologie et hormonologie(test de grossesse) + tube pour prlever le
srum.
Bleu
contient du citrate qui bloque de faon rversible le calcium qui est utilis toute tape de la
coagulation. Concentration = 9 units de sang pour 1 unit de citrate.
dosage des facteurs de coagulations (TCA, TP, fibrinogne)
Violet
contient de l'EDTA qui altre le moins la morphologie des cellules.
numration de formule sanguine (NFS) , groupe sanguin.
Gris
contient du fluore qui bloque les enzymes de la glycolyse (dgradation du glucose)
dosage de la glycmie par exemple
Vert
contient de l'hparine qui bloque la permabilit cellulaire l'ion potassium K
ionogramme et analyses de chimie.
Noir
idem que le tube bleu mais avec un volume de 1 unit d'anticoagulant pour 4 units de sang.
analyse de la vitesse de sdimentation.
1re semaine
8 jours 3 mois
3 mois 3 ans
3 6ans
6 15 ans
Adulte
Hmaties 10.6/L(Tera/L)
5,0 6,0
3,8 4,8
3,6 5,2
4,1 5,3
4,0 5,4
H : 4,5 5,8F : 3,8 5,4
Leucocytes 10/L (Giga/L)
10,0 30,0
6,0 18,0
6,0 15,0
5,0 13,0
5,0 11,0
4,0 10,0
Plaquettes 10/L (Giga/L)
150 400
150 400
150 400
150 400
150 400
150 400
Hmoglobine g/dL
14,5 22,5
10 16
10,5 13,5
10,5 13,5
11,5 14,5
H : 13,5 17,5F : 12,5 15,5
Hmatocrite %
44 58
38 44
36 44
36 44
37 45
H : 40 50F : 37 47
VGM fl
100 120
85 96
70 86
73 89
77 91
82 98
TCMH pg
34 38
24 34
23 31
24 30
24 30
> ou = 27
CCMH g/dL
32 36
32 36
32 36
32 36
32 36
32 36
en 10/L
1re semaine
8 jours 3 mois
3 mois 3 ans
3 6 ans
6 15 ans
Adulte
Polynuclaires neutrophiles
6,0 26,0
1,5 8,5
1,5 8,5
1,5 8,5
1,8 8,0
1,8 7,5
Polynuclaires osinophiles
0,2 0,85
0,2 1,2
0,05 0,7
0,02 0,65
0 0,6
0,1 0,4
Polynuclaires basophiles
0 0,64
0 0,2
0 0,2
0 0,2
0 0,2
0 0,2
Lymphocytes
2,0 11,0
2,0 11,0
4,0 10,5
2,0 8,0
1,5 6,5
1,0 4,5
Monocytes
0,4 3,1
0,05 1,1
0 0,8
0 0,8
0 0,8
0,2 1,0