ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S

INTRODUCTION

L’hémoglobine (Hb) est un hétéro-tétramère constitué de deux types de sous-

unités protéiques de structure voisine.
Chaque sous-unité est liée à une molécule d’hème constituée par une
protoporphyrine ayant en son centre un atome de fer capable de fixer une
molécule d’oxygène.
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S

Introduction
Les anomalies de l’hémoglobine sont des pathologies génétiquement
déterminées qui constituent, pour un certain nombre d’entre elles, un
problème de santé publique dans de vastes parties du monde.

Ces anomalies se répartissent en deux grands groupes :

- les anomalies de structure des chaînes protéiques de globine, comme les

hémoglobines S, C et E, parmi les plus fréquentes ;
- les anomalies de synthèse des chaînes de globine, responsables des
thalassémies et des persistances héréditaires de l’hémoglobine fœtale
(PHHF).
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
ELECTROPHORÈSE DE L'HÉMOGLOBINE ET DRÉPANOCYTOSE

La drépanocytose est une maladie génétique de l'hémoglobine.

Cette pathologie se traduit par :
 une mauvaise circulation sanguine ;
 une anémie ;
 des crises douloureuses ;
 une moindre résistance aux infections.

Sur l'électrophorèse, on voit la migration des différentes variantes de

l'hémoglobine. En cas de drépanocytose, on observe une migration anormale
appelée hémoglobine S (Hb S).
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S

ELECTROPHORÈSE DE L'HÉMOGLOBINE ET DRÉPANOCYTOSE

En fonction de l'analyse du tracé électrophorétique, on peut savoir si la

personne est drépanocytaire (SS), hétérozygote (AS) ou saine (AA).
Si elle est hétérozygote, cela signifie qu'elle a 50% de version saine et 50% de
version non saine.
Si elle est homozygote, l'atteinte peut être plus grave.
S'il y a une drépanocytose (consultation prénatale), on fait un prélèvement sur
le père de l'enfant et on évalue à ce moment-là le risque parce que si le père a
aussi une drépanocytose, cela augmente le risque de fausse couche ou
d'accouchement prématuré".
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S

INTRODUCTION
Les thalassémies résultent d’un déficit partiel ou total de synthèse d'une ou de
plusieurs chaînes de globine : ce sont les alpha- et les bêta-thalassémies, mais
aussi les delta-, gamma-, delta-bêta-thalassémies.
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
INDICATIONS

L'électrophorèse de l'hémoglobine est indiquée dans les cas suivants :

• Toute grossesse chez une femme non caucasienne.
• Conjoint d'une femme non caucasienne.
• Antécédent familial d'une hémoglobinopathie, quelle qu'elle soit
(thalassémie ou drépanocytose).
• Nouveau-né d'origine non caucasienne.
• Dans certains cas d'anémie, pas forcément expliquées par une carence en
fer ou en vitamines.
• Dans le suivi pré et post transfusion des patients porteurs d'une
hémoglobinopathie telle qu'une drépanocytose.
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
PROTOCOLE

L'électrophorèse de l'hémoglobine est une technique utilisée en biologie

pour détecter des malformations de l'hémoglobine

Elle se pratique à partir d'un échantillon sanguin et permettra de séparer les

différents types d'hémoglobine contenus dans le sang.
En effet, l'hémoglobine sanguine existe sous diverses variétés,
essentiellement l'A1 représentant habituellement 98% de l'hémoglobine
chez l'adulte, et l'A2.
Mais il reste généralement une quantité d'hémoglobine fœtale chez l'adulte,
et certains types d'hémoglobine sont en rapport avec des maladies du sang
appelées "hémoglobinoses", comme l'hémoglobine S notamment,
responsable de la drépanocytose modifiant la forme des globules rouges.
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
MATÉRIEL UTILISÉ
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
MATÉRIEL UTILISÉ
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S

SOLUTIONS UTILISÉES
•Tampon tris-véronal
Tris (hydroxyméthyl) aminométhane : 7,2 g
Acide diéthylbarbiturique : 1,82 g
Diéthylbarbiturate de sodium : 10,2 g
Eau distillée : 1 L
•Solution de coloration : rouge ponceau
Rouge ponceau : 2 g
Acide trichloracétique : 30 g
Eau distillée : 1 L
•Solution de décoloration du rouge ponceau
Acide acétique à 5 %
 ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
PROTOCOLE

1. Trempage des bandes d'acétate 2. Essorage des bandes entre deux

dans la solution tampon feuilles de papier absorbant
3. Placer la bande sur le portoir en veillant à disposer la face absorbante vers le haut.
La bande doit être tendue et ses extrémités doivent dépasser suffisamment pour
tremper dans le tampon une fois le support placé dans la cuve.
4. Remplir les deux compartiments de la cuve avec un même volume de tampon
d’électrophorèse.

5. Mettre en place le(s) support(s) dans la cuve.

6. On peut prélever et déposer les échantillons soit avec une micro-pipette,
soit avec un capillaire, soit avec un applicateur comme celui présenté ci-
dessous, réalisé avec un bouchon et deux trombones pour permettre un dépôt
linéaire.
6. Prélever et déposer l’échantillon sur la bande, déjà en place sur son
support, au tiers de l’extrémité, côté cathode (borne noire) en prenant garde
que la bande soit bien horizontale et que l’échantillon ne coule pas.
7. Fermer la cuve, mettre sous tension et faire migrer
environ 1 h sous 150 V.
ÉLECTROPHORÈSE DES HÉMOGLOBINES A ET S
8. Après migration, placer les bandes dans la solution de rouge
ponceau pendant 10 minutes.
9. Décolorer le fond rouge des bandes en les trempant dans des bains
successifs d’acide acétique à 5 %. Agiter le cas échéant pour accélérer
la décoloration.
RÉSULTATS
L’hémoglobine S, moins chargée électriquement que l’hémoglobine A
(en raison de la substitution d’un acide glutamique par une valine en
position 6 de la chaîne de la bêta-globine), migre moins loin que
l’hémoglobine A et peut ainsi être distinguée de celle-ci sur la bande
d’acétate de cellulose.
IDENTIFICATION DES PHENOTYPES/GENOTYPES

Les échantillons utilisés pour mener l’électrophorèse sont des solutions

réalisées artificiellement avec des hémoglobines A et S du commerce
dissoutes à raison de 2,5 mg/mL dans du tampon d’électrophorèse
préalablement oxygéné par une agitation vigoureuse.
IDENTIFICATION DES PHENOTYPES/GENOTYPES

Pour chaque génotype on place dans un tube Eppendorf étiqueté 100

µL de solution.

 Les échantillons correspondant aux individus homozygotes pour

HbA sont constitués de 100 µL de la solution d’hémoglobine A ;
 Les échantillons correspondant aux individus homozygotes pour
HbS sont constitués de 100 µL de la solution d’hémoglobine S ;
 Les échantillons correspondant aux individus hétérozygotes sont
constitués d’un mélange de 50 µL de la solution d’hémoglobine A
et de 50 µL de la solution d’hémoglobine S.
IDENTIFICATION DES PHENOTYPES/GENOTYPES

Les échantillons utilisés pour mener l’électrophorèse sont des solutions

réalisées artificiellement avec des hémoglobines A et S du commerce
dissoutes à raison de 2,5 mg/mL dans du tampon d’électrophorèse
préalablement oxygéné par une agitation vigoureuse.