BTS Analyses de biologie médicale SADKI AMEL

Lycée Paul Éluard - Session 2021/2022

Étude de la corrélation entre la méthode manuelle

d’identification des RAI et la méthode automatisée sur
l’automate VISION

Premier lieu de stage : Laboratoire du CHI Robert Ballanger

Maître de stage : M. David LE COSTOVEC
Tuteur de stage : M. Abdulla MOHARRAM

Second lieu de stage : Laboratoire de Virologie de l’hôpital Avicenne

Maître de stage : M. Franck DUPONT
Tutrice de stage : Mme Alexandra DUHANT
 Remerciements

Trouver une structure acceptant des étudiants en stage n’est pas toujours évident.
C’est pourquoi, je tenais à remercier l’équipe du centre hospitalier Robert Ballanger et de
l’hôpital Avicenne pour leur accueil chaleureux et bienveillant durant toute la période de
mon stage.

En premier lieu, je souhaite exprimer mes remerciements au cadre de santé du service de

Biologie Médicale, M. David Le Costovec et à mon tuteur de stage, M. Abdulla Mohar-
ram, technicien de laboratoire, pour m’avoir offert l’opportunité d’effectuer mon premier
stage au sein de leur service. Tous deux m’ont accompagnée et guidée tout au long de ma
période de stage. Ils se sont montrés disponibles et à l’écoute. Leurs recommandations et
appréciations m’ont été bénéfiques.
J’ai également travaillé en compagnie de l’équipe d’immuno-hématologie et de biochimie.
Tous, m’ont fourni de nombreux renseignements au sujet de leur profession et de leur
parcours. De plus, j’ai pu poser mes questions, partager mes inquiétudes et savoir ainsi
rebondir lorsqu’il le fallait.

En second lieu, je souhaite exprimer mes remerciements au cadre de santé du laboratoire

de Virologie de l’hôpital Avicenne, M. Franck Dupont et à ma tutrice de stage, Mme
Alexandra Duhant, technicienne de laboratoire, pour m’avoir offert l’opportunité d’effec-
tuer mon stage au sein du service et pour m’avoir accompagnée tout au long de ma pé-
riode.
Je tenais également à remercier tous les techniciens de l’équipe de virologie qui m’ont
chaleureusement accueillie. Le partage de leurs connaissances et leur expérience dans le
domaine a favorisé mon intégration ainsi qu’une bonne assimilation du métier de techni-
cien de laboratoire.

Tous ces professionnels ont contribué à la construction de ma personne en tant que future
professionnelle. En outre, la transmission de leurs savoirs m’a permis d’avoir une ap-
proche entière et différente du métier de technicien de laboratoire. À tous ces intervenants,
je présente mes remerciements, mon respect et ma gratitude.
Glossaire

Abréviations :

AVC : Avicenne
BM : Biologie moléculaire
BTS : Brevet de Technicien Supérieur
CCD : Charge-Coupled Device (dispositif à transfert de charges)
CH : Centre Hospitalier
CHIRB : Centre Hospitalier Intercommunal Robert Ballanger
CIQ : Contrôle interne de qualité
COFRAC : Comité français d’accréditation
CQ : Contrôle qualité
DAOM : Déchets assimilés aux ordures ménagères
DASRI : Déchets d’activités de soins à risques infectieux
EDTA : Acide éthylène diamine trétra-acétique
EEQ : Évaluation externe de qualité
EFS : Établissement français du sang
EPI : Équipement de protection individuelle
HAS : Haute autorité de santé
HUPSSD : Hôpitaux Universitaires Paris Seine-Saint-Denis
IgG : Immunoglobulines G
IgM : Immunoglobulines M
IH : Immuno-hématologie
LBM : Laboratoire de biologie médicale
MW : Middleware
NC : Non-conformité
OEEQ : Organismes d’évaluation externe de qualité
RAI : Recherche d’agglutinines irrégulières
RB : Robert Ballanger
SH GTA : Guide technique d’accréditation
SIL : Système informatique du laboratoire
TCD : Test de Coombs direct
TIA : Test indirect à l’antiglobuline
VHB : Virus de l’Hépatite B
VHC : Virus de l’Hépatite C
VHD : Virus de l’Hépatite Delta
VIH : Virus de l’Immunodéficience Humaine
Lexique :

Antigène : molécule ou particule capable d’induire une réaction immunitaire spécifique

lorsqu’il est introduit dans l’organisme. Il est capable d’interagir spécifiquement avec les
produits de la réaction immunitaire (anticorps solubles ou cellules effectrices).

Anticorps : molécule de nature protéique produite lors de la réponse immunitaire spéci-

fique, capable de reconnaître un antigène donné. On parle également d’immunoglobuline.
Sommaire

Introduction...................................................................................................................... 1
1. Présentation des laboratoires...................................................................................... 2
1.1 Présentation du CHIRB et du laboratoire de Biologie Médicale ...................................2
1.1.1 Implantation géographique du CHIRB........................................................................................ 2
1.1.2 Historique de l’hôpital ................................................................................................................. 2
1.1.3 Effectifs ....................................................................................................................................... 2
1.1.4 Activités....................................................................................................................................... 3
1.2 Présentation de l’hôpital AVC et du laboratoire de Virologie .......................................4
1.2.1 L’hôpital Avicenne ...................................................................................................................... 4
1.2.2 Laboratoire de Virologie ............................................................................................................. 5
1.2.3 Le personnel ................................................................................................................................ 5
1.2.4 Les activités ................................................................................................................................. 6
1.3 Comparaison de mes missions au sein des deux laboratoires .........................................6
1.4 Hygiène, sécurité et gestion des déchets ............................................................................7
1.4.1 Hygiène et sécurité ...................................................................................................................... 7
1.4.2 Gestion des déchets ..................................................................................................................... 8
1.5 Système informatique du laboratoire (SIL) .....................................................................9
1.6 Les différents processus analytiques ...............................................................................10
1.6.1 La phase pré-analytique............................................................................................................. 11
1.6.2 La phase analytique ................................................................................................................... 12
1.6.3 La phase post-analytique ........................................................................................................... 12
1.7 L’accréditation et la démarche qualité ...........................................................................13
1.7.1 La démarche qualité .................................................................................................................. 13
1.7.2 La certification .......................................................................................................................... 13
1.7.3 L’accréditation........................................................................................................................... 14
1.7.4 Les audits................................................................................................................................... 14
1.7.5 Les contrôles qualités et autres indicateurs ............................................................................... 14
2. Comparaison de méthodes ........................................................................................ 17
2.1 Recherche d’agglutinines irrégulières ............................................................................17
2.1.1 Présentation RAI ....................................................................................................................... 17
2.1.2 Principe de la méthode .............................................................................................................. 17
2.2 Vérification d’une méthode qualitative (portée A) ........................................................19
2.3 Présentation automate VISION.......................................................................................20
2.4 Comparaison des résultats patients sur les deux méthodes ..........................................21
2.4.1 Procédure technique sur automate ............................................................................................. 21
2.4.2 Exploitation des résultats........................................................................................................... 21
2.5 Cas clinique patiente.........................................................................................................24
2.5.1 Anti-D passif ............................................................................................................................. 24
2.5.2 Panels de RAI ............................................................................................................................ 26
Conclusion ...................................................................................................................... 30
Bibliographie et sitographie .......................................................................................... 32
Annexes ........................................................................................................................... 33
Introduction

Au cours de la formation en BTS Analyses de biologie médicale, il est demandé à

chaque étudiant d’effectuer un stage d’une durée de douze semaines. Ce stage se compose
de deux périodes, une première d’une durée de sept semaines ayant lieu en première année
et une seconde d’une durée de cinq semaines lors de la seconde année.

J’ai eu l’occasion d’effectuer mon stage de première année au sein du laboratoire de Bio-
logie Médicale de l’hôpital Robert Ballanger et mon stage de deuxième année au sein du
laboratoire de Virologie à l’Hôpital Avicenne.

L’objectif des stages demandés lors de cette formation est de mettre en application les
connaissances théoriques acquises au cours de ces deux années et d’améliorer nos perfor-
mances techniques et pratiques en milieu professionnel. Les stages permettent de perce-
voir la formation sous un angle davantage professionnel avec l’accréditation, les contrôles
qualités, les automates, etc.

Durant mes stages, j’ai pu découvrir le fonctionnement d’un laboratoire d’hôpital et tra-
vailler sur diverses automates.

J’ai ainsi eu l’opportunité de réaliser une comparaison de méthodes sur les panels de RAI
avec le Docteur Angélique Chauvineau Grenier sur l’automate VISION. Cette expérience
m’a tout particulièrement intriguée et intéressée, par conséquent, j’ai choisi de porter mon
attention sur ce sujet.

Ainsi, ma problématique est la suivante : La méthode d’identification des RAI sur auto-
mate est-elle comparable à la méthode manuelle ? Pour y répondre, en premier lieu, je
présenterai mes lieux de stage, suivi de la démarche qualité. Dans un second temps, nous
nous intéresserons au déroulement de la comparaison de méthodes effectuée sur l’auto-
mate VISION dont le plan sera détaillé en deuxième partie.

1
1. Présentation des laboratoires
1.1 Présentation du CHIRB et du laboratoire de Biologie Médicale

1.1.1 Implantation géographique du CHIRB

Source : photo personnelle

Le centre hospitalier intercommunal Robert Ballanger est situé en Seine-Saint-De-

nis sur les communes d’Aulnay-sous-Bois, Sevran et Villepinte. Il couvre un bassin de
population de 450 000 habitants. Par son attractivité, l’hôpital s’étend jusqu’en Seine-et-
Marne.

1.1.2 Historique de l’hôpital

Le 14 mars 1930, le principe d’un syndicat intercommunal dédié à la création et la

gestion d’un hôpital intercommunal est décidé par les communes d’Aulnay-sous-Bois, Le
Blanc-Mesnil, Sevran, Tremblay en France et Villepinte. La construction de l’hôpital est
ensuite autorisée par décret le 19 février 1932. Le premier bâtiment en briques rouges à
l’entrée de l’établissement est construit en 1936. Bien que construits avant la seconde
guerre mondiale, les premiers locaux de l’établissement n’ont ouvert leurs portes qu’en
1956 après que les dégâts provoqués par les occupations successives des armées alle-
mandes et américaines ont été réparés.

1.1.3 Effectifs

Le CHIRB compte en 2017, un total de 2338 personnels. Le personnel Médico-Technique

représente 4% de l’effectif total de l’hôpital.

2
 Source : Intranet du CHI

Le service de biologie médicale comporte à ce jour :

- 1 Cheffe de service
- 5 Praticiens hospitaliers
- 2 Praticiens attachés
- 1 Assistant spécialiste
- 1 Cadre de santé
- 1 Responsable Assurance Qualité
- 39 Techniciens
- 4 Agents de service
- 2 Secrétaires médicales
- 5 Agents administratifs

(cf. annexe I)

1.1.4 Activités

Le CHIRB est constitué de 8 pôles d’activités, qui sont les suivants :

• Pôle Management
• Pôle Anesthésie – Bloc – Chirurgie
• Pôle Femme – Enfant
• Pôle Médecine – Urgences – Réanimation
• Pôle Pédopsychiatrie
• Pôle Psychiatrie Adulte
• Pôle Filière comprenant la cardiologie, la neurologie et la gériatrie
• Pôle Médico-Technique

3
Le service de biologie médicale fait partie du pôle Médico-Technique, il est situé au rez-
de chaussée du plateau technique sur deux sites :
- La partie située dans le bâtiment 3 comporte les secteurs suivants : l’accueil, c’est le lieu
dans lequel on réceptionne tous les échantillons nécessaires aux analyses en biologie mé-
dicale. De plus, on retrouve les secteurs d’analyses tels que : la biochimie, la sérologie, la
bactériologie, l’hémostase, l’hématologie, l’immuno-hématologie. Enfin, une salle de ré-
serve et de détente reste à disposition.
- La partie située dans le bâtiment 1 regroupe les bureaux du chef de service, des biolo-
gistes, le secrétariat médical, la salle de réunion, de détente ainsi que le bureau de la réfé-
rente qualité. On retrouve également le secteur de virologie/parasitologie/mycologie, la
biologie moléculaire ainsi que la salle d’archive.

1.2 Présentation de l’hôpital AVC et du laboratoire de Virologie

1.2.1 L’hôpital Avicenne

Source : Google images

Inauguré en 1935, l’hôpital AVC, alors appelé hôpital Franco-Musulman, est des-
tiné à accueillir les malades maghrébins de Paris et de la région parisienne. L’hôpital pren-
dra ensuite le nom d’Avicenne en 1978. Situé à Bobigny en Seine-Saint-Denis, l’hôpital
AVC exerce une triple mission de soins, d’enseignement et de recherche.

L’hôpital Avicenne de Bobigny, Jean-Verdier de Bondy et René-Muret de Sevran

constituent les Hôpitaux Universitaires Paris Seine-Saint-Denis avec une place reconnue
grâce à la dimension universitaire du groupe hospitalier. Ils organisent des parcours pa-
tients sur un territoire d’1,5 millions d’habitants, où l’accès aux soins est un enjeu majeur.

4
1.2.2 Laboratoire de Virologie

Le service de virologie se situe au troisième étage du bâtiment Lavoisier, construit

en 1987. Le laboratoire est représenté par le Docteur Emmanuel Gordien et a pour objectif
l’identification de virus pathogènes, la participation à l’hémovigilance ainsi que la pré-
vention de l’infection VIH dans le département.

Le laboratoire de Virologie est également le Centre National de Référence associé

pour l’hépatite Delta. Ses missions sont d’assurer le typage prospectif de toutes les nou-
velles souches au niveau national, d’évaluer et de développer les tests diagnostiques né-
cessaires ainsi que d’organiser un contrôle de qualité national annuel pour le diagnostic
de l’infection par le VHD, par des tests sérologiques et de biologie moléculaire.

1.2.3 Le personnel

L’équipe du laboratoire de virologie comprend :

- 1 Chef de service

- 2 Adjoints au chef de service

- 4 Biologistes

- 1 Technicienne d’études biologiques (ANRS)

- 1 Cadre de santé

- 1 Secrétaire médicale

- 8 Techniciens laboratoires

- 4 Agents hospitaliers

- 1 Infirmière

- 2 Ingénieurs en biologie

(cf. annexe II)

5
1.2.4 Les activités

L’unité de virologie est organisée en différents secteurs :

- Le secteur de sérologie où sont réalisées les sérologies virales pour diverses infections
par des tests immunologiques.

- Le secteur de biologie moléculaire automatisé qui permet la réalisation de charges vi-

rales des virus. Ce secteur permet aussi le diagnostic des infections dues aux virus respi-
ratoires et des arbovirus.

- Le secteur génotypage qui permet le typage des souches virales VHC, VHB, VIH, ainsi,
que la recherche de mutants de résistance aux antirétroviraux pour le VIH.

1.3 Comparaison de mes missions au sein des deux laboratoires

Au cours de mes deux stages, j’ai pu réaliser diverses missions. Voici un tableau récapi-
tulant les différentes missions que j’ai pu effectuer au sein de ces deux laboratoires :

Tableau des missions réalisées au sein des deux laboratoires

Laboratoire du CHIRB Laboratoire de Virologie

d’AVC

Réception des prélèvements et Réception des prélèvements et tri

tri manuel à savoir : déballage, manuel à savoir : centrifugation,
étiquetage, centrifugation des aliquotage des échantillons pri-
échantillons, transfert vers les maires en sérologie et BM, trans-
postes de travail. fert vers les postes de travail.

Missions réa- Vérification de la conformité des Vérification de la conformité des

lisées prélèvements à leur arrivée et si- prélèvements à leur arrivée et si-
gnalement en cas de NC. gnalement en cas de NC.

Analyses en paillasse de routine Analyses en paillasse de sérologie

en hémostase sur l’automate sur l’automate Architect et Liai-
ACL TOP. son XL.

Réalisation de la reproductibilité Réalisation de Western Blot sur

et de la comparaison de mé- l’automate Autoblot 3000.
thodes sur l’automate VISION
en IH.

6
1.4 Hygiène, sécurité et gestion des déchets

1.4.1 Hygiène et sécurité

Lors de la manipulation des échantillons, les techniciens s’exposent à différents risques et

contraintes qui peuvent être de nature :

- Biologique : contact avec un échantillon biologique pouvant être infectieux.

- Chimique : contact entre la peau, les yeux ou encore l’inhalation d’un produit ou réactif
potentiellement toxique.

- Mais aussi mécanique : lorsque le technicien se pique, se coupe…

C’est pourquoi, une procédure d’hygiène et de sécurité est mise en place. Il est impératif
que tout le personnel du laboratoire prenne connaissance de la procédure (nettoyage des
paillasses, manipulation à haut risque infectieux...)

Pour limiter les risques au maximum, le laboratoire met à disposition de ses agents des
EPI (équipement de protection individuelle) qui se composent de :

- Gants à usage unique : pour éviter le contact entre la peau et des éléments infectieux :
sang, germes...

- Lunettes : pour éviter les projections.

- Blouse en coton fermée : le port de la blouse est obligatoire pour toute personne entrant
dans le laboratoire.

Cependant, comme relevé précédemment, les EPI ne sont pas les seuls éléments néces-
saires afin de limiter les risques, c’est pourquoi, il faut suivre certaines règles d’hygiène
qui s’appliquent à l’ensemble du personnel. On retrouve parmi ces règles le fait de ne pas
manger ou boire dans le laboratoire, de s’attacher les cheveux...

7
1.4.2 Gestion des déchets

Au sein des LBM, chaque type de déchet doit être trié et jeté selon les lois et normes mises
en vigueur. Il existe au total quatre types de déchets :

Schéma représentant les différents types de déchets retrouvés au sein du laboratoire

Source : réalisation personnelle

Lors de la fermeture des poubelles DASRI, il faut bien veiller à ce que les poubelles
soient fermées hermétiquement. Une fois les poubelles fermées, elles sont rangées dans
des locaux à cet effet et sont récupérées par une société spécialisée dans ce domaine
pour être incinérées.

8
1.5 Système informatique du laboratoire (SIL)

Représentation du système informatique du laboratoire du CHIRB

Source : réalisation personnelle

Représentation du système informatique du laboratoire de Virologie d’AVC

Source : réalisation personnelle

9
 Le système informatique est un élément essentiel au bon fonctionnement du labo-
ratoire puisqu’il veille à assurer la gestion des dossiers des patients, des analyses, des
validations mais aussi de la qualité, de la traçabilité, etc...

Le premier logiciel intervenant au sein du SIL du laboratoire du CHIRB est IN-

LOG. C’est le logiciel réseau du laboratoire utilisé par tout le personnel. Il permet par
exemple d’enregistrer l’identité du patient et du prescripteur, les renseignements cliniques,
la saisie des résultats ou encore les validations techniques et biologiques. Par ailleurs, ce
logiciel permet également l’envoi des demandes aux automates et aux middlewares afin
de pouvoir effectuer les analyses.
Par conséquent, le second logiciel intervenant au sein du laboratoire est le MW
MPL. Il permet de faire la liaison entre les automates et INLOG. Le technicien peut en-
suite effectuer la validation technique des résultats et ajouter tout commentaire qu’il jugera
utile à leur interprétation.
En outre, MEDINFO est une autre plateforme d’IH qui intervient au sein du réseau
informatique du laboratoire. C’est un logiciel relié au serveur du CH de Montreuil, Mont-
fermeil et Saint Denis. Le technicien est ainsi chargé de vérifier l’identité de l’échantillon
de chaque patient. Une fois la vérification faite, la demande bascule sur MPL et les résul-
tats seront finalement validés sur MEDINFO.

En ce qui concerne le laboratoire de Virologie d’AVC, GLIMS est le logiciel ré-

seau du laboratoire. C’est un logiciel commun aux HUPSSD et nous y retrouvons les pres-
criptions des patients, le traitement, la validation et l’enregistrement des résultats.
Ensuite, il y a KALILAB qui est un logiciel permettant la gestion de la qualité, du
personnel ainsi que la gestion des stocks et des commandes. Nous pouvons également y
retrouver les modes opératoires, les documents de travail et les non-conformités.

1.6 Les différents processus analytiques

Chaque laboratoire d’analyses de biologie médicale au sein du territoire français

dispose de différents processus, qu’on appelle aussi « phases analytiques ». Ces phases
permettent le bon fonctionnement du laboratoire, un bon suivi et également une bonne
traçabilité des prélèvements qui sont transmis aux laboratoires. On dénombre alors trois
phases analytiques au sein des LBM (pré-analytique, analytique, post-analytique).

10
1.6.1 La phase pré-analytique

Cette première phase comprend l’acheminement d’un échantillon depuis l’accueil du pa-
tient ou la réception du prélèvement jusqu’à son analyse.

Acheminement des prélèvements

Pour ce qui concerne les laboratoires d’hôpitaux, la grande majorité des prélève-
ments sont effectués dans les locaux de l’hôpital au sein des différents services. Au labo-
ratoire du CHIRB, les prélèvements sont alors expédiés jusqu’au laboratoire par un sys-
tème de transport par tube pneumatique ou peuvent également être remis en main propre
par le personnel de l’hôpital. Au laboratoire de Virologie d’AVC, les prélèvements sont
acheminés jusqu’à la réception du laboratoire par des agents du centre de tri à des heures
fixées : 8h30, 9h45, 11h30, 13h30, 14h30 et 15h30.
Toutefois, certains échantillons peuvent provenir d’établissements extérieurs, l’achemi-
nement se fera alors jusqu’à l’hôpital par des coursiers externes. Les échantillons sont
remis en main propre à l’agent de réception, l’agent chargé du transport devra inscrire le
dépôt qui a été effectué sur le classeur de traçabilité prévu à cet effet.

Déballage et étiquetage des échantillons

Ainsi, après avoir procédé à une première vérification des prélèvements, les agents
de réception peuvent entamer le déballage. Pour cela, il y a d’abord une vérification du
contenu des feuilles de demandes associées aux prélèvements. Il faut alors vérifier si les
informations suivantes sont exactes et renseignées : les données relatives au patient (date
de naissance, nom de famille, prénom...), l’heure du prélèvement, la date, le prescripteur,
le préleveur, et voir si les analyses correspondent bien aux prélèvements reçus. Sans ces
informations, il peut y avoir des problèmes au niveau de la création du dossier du patient,
c’est pourquoi la phase pré-analytique et notamment le déballage est une étape cruciale.
Une fois toutes les informations vérifiées, les agents procèdent à l’enregistrement des de-
mandes. Pour cela, il y a deux façons différentes de procéder :
- soit les échantillons sont transmis avec un bon de demande (cf. annexe III) avec une
étiquette comprenant un code barre permettant d’identifier la personne concernée. Les

11
cases concernant les analyses à réaliser sont alors cochées, le bon est scanné et certaines
informations sont à rajouter telles que l’heure du prélèvement, le nom du préleveur, etc.
- soit les échantillons sont transmis avec une ordonnance qui indique toutes les analyses
à effectuer. L’enregistrement doit donc se faire manuellement sur le logiciel réseau du
laboratoire.
Ensuite, les étiquettes correspondantes aux prélèvements se génèrent et les agents peuvent
démarrer l’étiquetage. Lors de cet étiquetage, il faut bien veiller à ce que le nom inscrit
initialement sur l’échantillon ne soit pas caché par l’étiquette du laboratoire puisque c’est
le seul moyen permettant d’identifier l’échantillon (c’est une méthode d’identitovigilance
adoptée par les deux laboratoires).
De plus, après que l’enregistrement des demandes et l’étiquetage aient été effectués, les
techniciens en charge du déballage peuvent procéder à la centrifugation des tubes si né-
cessaire. Puis, les échantillons n’étant pas destinés à la même fonction, vont être séparés
selon la nature des analyses et les secteurs appropriés.

1.6.2 La phase analytique

Cette phase comprend toutes les étapes de la réalisation des analyses. Les labora-
toires étant quasiment automatisés au niveau de toutes les paillasses, la plupart des ana-
lyses sont effectuées par des automates. Les techniciens déposent uniquement les échan-
tillons sur les portoirs des automates ou autre support puisque les consignes sont déjà
envoyées par le logiciel réseau. Ainsi, à la lecture du code-barres de l’échantillon, l’auto-
mate saura quelles analyses doivent être effectuées. Cette phase comprend également la
validation technique qui s’effectue grâce au passage des CIQ dans chaque série d’analyse.
La validation permettra ainsi de valider la technique et les résultats obtenus afin que les
biologistes puissent les valider définitivement.

1.6.3 La phase post-analytique

Après le processus analytique, il faut ensuite valider les résultats pour pouvoir les
rendre accessibles aux différents services de l’hôpital. Ce sont donc les biologistes qui
vont se charger de cette étape en validant les différents résultats sur INLOG au laboratoire
du CHIRB ou sur GLIMS au laboratoire de Virologie d’AVC.
Le processus post-analytique comprend également la conservation du matériel d’analyse
et son stockage. Certains échantillons sont réfrigérés ou conservés à température ambiante

12
pendant un certain temps pour ensuite être éliminés dans des poubelles DASRI destinées
à cet effet. Tandis que d’autres prélèvements sont congelés et rangés dans la plasmathèque
ou dans la sérothèque (à -80°C ou -20°C) pendant au minimum 1 an.

Source : photo personnelle

1.7 L’accréditation et la démarche qualité

1.7.1 La démarche qualité

Au sein de chaque laboratoire d’analyses de biologie médicale existe ce qu’on ap-

pelle « la démarche qualité ». Cette dernière est définie selon l’arrêté du 26 novembre
1999 relatif à la bonne exécution des analyses de biologie médicale comme : « L’aptitude
d’un produit, d’un procédé ou d’un service rendu à satisfaire les besoins exprimés et im-
plicites de l’utilisateur. Dans le domaine de la biologie médicale, c’est l’adéquation entre
les moyens mis en œuvre et les informations attendues par le médecin prescripteur, ainsi
que la réponse aux attentes du patient ». Ces moyens mis en œuvre (traçabilité, archivage,
gestion documentaire, justesse et fiabilité des résultats...) doivent être en adéquation avec
la norme NF EN ISO 15 189 qui spécifie les exigences de qualité et de compétences dans
les LBM.

1.7.2 La certification

L’ordonnance du 24 avril 1996 introduit la certification au sein du système de santé

français. La certification est une procédure obligatoire d’évaluation externe. Le CHIRB a
été certifié sans réserve en 2010 par la Haute Autorité de Santé. Il a ensuite préparé la
certification par la méthode du « patient traceur » pour la visite des experts de l’HAS en
juin 2015. À la suite de cette visite, la HAS a décidé en novembre 2018 de certifier le
CHIRB avec trois recommandations. Suite à la visite de la HAS en mars 2017, l’hôpital

13
AVC a été certifié avec recommandation le 6 octobre, avec une seule recommandation
concernant les blocs opératoires.

1.7.3 L’accréditation

L’accréditation est une attestation délivrée par un organisme extérieur, le CO-

FRAC, qui va évaluer et reconnaître l’activité des LBM à réaliser des activités spécifiques.
Ainsi, chaque technique ou analyse dans un LBM doit faire l’objet d’un dossier. Ce dossier
va ensuite être étudié par le COFRAC. Si accepté, il fera l’objet d’un premier audit et sera
réévalué à des temps différents. Le service de Biologie Médicale du CHIRB est un labo-
ratoire accrédité par le COFRAC pour ses activités de Biochimie, Hématologie, Immuno-
hématologie, Hémostase et Sérologie, selon la norme 15 189, depuis le 1er octobre 2013.
Le laboratoire de l’hôpital AVC est lui, accrédité depuis l’année 2014. Ils répondent ainsi
aux exigences réglementaires opposables à tous les laboratoires de biologie publics et pri-
vés. Le COFRAC accrédite, et tout comme il accrédite, il possède le pouvoir de suspendre
ou retirer l’accréditation de manière partielle ou totale suite à des audits de surveillance.

1.7.4 Les audits

Un audit est défini comme étant un processus méthodique, un examen ou contrôle

de la gestion et des conditions de fonctionnement d’un LBM ou d’un de ses services.
L’objectif des audits est de repérer la présence d’écarts pour pouvoir les corriger en met-
tant en place des actions correctives. Il existe deux types d’écarts : les écarts non critiques
et les écarts critiques. Les écarts non critiques sont dû à des erreurs n’impactant pas les
résultats des patients tandis que les écarts critiques eux, peuvent impacter les résultats des
patients. Dans le but d’éviter ces écarts, des contrôles qualité sont mis en place dans tous
les LBM.

1.7.5 Les contrôles qualités et autres indicateurs

Afin d’assurer la qualité des résultats au sein des LBM, des contrôles de qualité
internes et externes sont réalisés. Il arrive aussi de faire face à des non-conformités, qu’il
faudra gérer avec la mise en place de plans d’action.

14
Les contrôles internes de qualité (ou CIQ)

Les contrôles internes de qualité représentent les contrôles les plus souvent effectués au
sein d’un LBM. Ils permettent d’indiquer le bon fonctionnement de l’analyse et garantis-
sent la fiabilité des résultats des patients. Ce sont des échantillons dont la concentration
est connue et en cas de résultat jugé « non conforme », il est possible de corriger immédia-
tement les erreurs impactant les échantillons en mettant en place des actions correctives
immédiates. Au laboratoire, les CIQ encadrent chaque série d’analyse. Pour interpréter les
différents résultats des contrôles, les résultats sont placés sur une carte de contrôle (Levey-
Jennings) où l’on applique par la suite les règles de Westgard. Chaque laboratoire définit
ses propres règles de Westgard en fonction de ses techniques. Les valeurs doivent cepen-
dant se situer autour de la moyenne obtenue à savoir entre -2 et +2 écarts-types, représen-
tant les seuils d’avertissement.
Trois règles adoptées par le laboratoire du CHIRB constituent un critère de rejet : la règle
de 1-3S, la règle de 2-2S et la règle de R-4S. Nous pouvons ainsi observer l’exemple d’une
carte de contrôle (cf. annexe IV) représentant les CIQ passés en hémostase pour le contrôle
anormal bas du TP. Le point du 9 juin se trouvait supérieur à 3 écarts-types, la règle de 1-
3S qui représente un seuil d’alarme a donc été violée.

Les contrôles internes de qualité externalisés (ou CIQ externalisés)

Les CIQ externalisés consistent à regrouper les données des CIQ de chaque laboratoire
effectués sur un même lot d’échantillons et qui sont mis en comparaison entre elles par un
organisme indépendant. Cet outil permet d’évaluer la justesse de mesure du laboratoire et
sa fidélité. Le CIQ externalisé est donc complémentaire aux EEQ.
Au laboratoire de Virologie d’AVC, on utilise des CIQ externalisés appelés « Accuruns »,
fournis par la société Ingen. Ces contrôles sont passés quotidiennement en fin de journée
sur l’automate Architect et Liaison XL en fonction des marqueurs analysés sur l’automate.
Les résultats des CIQ Accuruns sont ensuite saisis sur le logiciel InterQC. Les résultats
obtenus par le laboratoire seront ensuite comparés à ceux obtenus par les groupes de pairs.

15
 Les évaluations externes de qualité (ou EEQ)

Lors des évaluations externes de qualité, les échantillons passés sont fournis par des
OEEQ, leur concentration est alors inconnue. L’EEQ est un contrôle d’exactitude, obliga-
toire pour les laboratoires selon la norme EN NF ISO 15 189. Si le laboratoire ne parvient
pas à obtenir des résultats proches de la valeur réelle ; alors les résultats rendus aux pa-
tients ne sont pas considérés comme étant fiables. Pour cela, des actions correctives de-
vront être mises en place.

La non-conformité

La non-conformité est définie comme le non-respect d’une exigence au sein d’un LBM.
Elle peut être de deux types, à savoir :
- Interne au laboratoire : erreur d’étiquetage, erreur technique...
- Externe au laboratoire : mauvais tube, délai et conditions de transports non respectées...
Au sein des LBM, les non-conformités sont sujettes à des fiches de non-conformité. Cette
fiche est remplie par le technicien qui a rencontré la non-conformité et il devra ensuite
contacter l’établissement de santé concerné afin d’organiser un nouveau prélèvement
d’échantillon.
J’ai été confronté à certaines non-conformités lors de mon stage en paillasse d’hémostase
car certaines règles devaient être respectées afin de pouvoir faire les analyses. Les princi-
pales non-conformités observées concernaient principalement une réception de sang coa-
gulé ainsi qu’un volume de remplissage non conforme, en dessous du trait limite.

Limite de
remplissage
du tube

Ce tube était insuffisamment rempli et a donc fait l’objet d’une fiche de

non-conformité pré analytiques. (cf. annexe V)

Source : photo personnelle

16
2. Comparaison de méthodes
Lors de mon stage, j’ai réalisé une comparaison de méthodes sur les panels de RAI.
J’ai donc eu à disposition un certain nombre d’échantillons de patients afin de tester cette
nouvelle méthode sur l’automate VISION. J’ai donc décidé de traiter de la démarche qui
a été effectuée pour réaliser cette comparaison.

2.1 Recherche d’agglutinines irrégulières

2.1.1 Présentation RAI

Les agglutinines irrégulières sont des anticorps dirigés contre les structures érythrocytaires
autre que le système ABO.
Il existe deux origines possibles à la présence de ces anticorps :
- À la suite d’une allo-immunisation.

- À la suite d’une réaction croisée avec des antigènes de l’environnement.

Ces anticorps peuvent ainsi s’attaquer aux antigènes érythrocytaires présents à la surface
des hématies et provoquer un accident hémolytique grave. Le dépistage et l’identification
sont ainsi réalisés avant une transfusion sanguine afin d’éviter tout accident transfusionnel
et pendant la grossesse pour prévenir d’un risque d’accident fœto-maternel.

2.1.2 Principe de la méthode

La technique utilisée au laboratoire pour effectuer les panels d’identification de

RAI est la technique de gel-filtration qui repose sur la propriété d’agglutination des anti-
corps. Des cassettes sont utilisées pour effectuer la technique manuelle et la technique sur
automate qui est en cours de validation. Chaque cassette se compose de six micro-co-
lonnes contenant des réactifs ou diluants, déjà pré-distribués.

Source : GED, classeur VISION, Principe de la méthode

17
Pour le dépistage, une des méthodes préconisées est le test indirect à l’antiglobuline en
technique de filtration.
Pour l’identification, deux méthodes au moins peuvent être utilisées :
- Une technique obligatoire utilisant le test indirect à l’antiglobuline (TIA).

- Une technique complémentaire utilisant des enzymes protéolytiques.

Les hématies à tester et le plasma du patient sont distribués dans la chambre de

réaction, au-dessus de la colonne. Les cassettes sont ensuite incubées à l’étuve à 37°C,
une réaction va alors se faire entre antigène et anticorps si ce sont des agglutinines
chaudes. S’il y a la présence d’agglutinines froides, les cassettes seront placées en second
lieu dans une enceinte réfrigérante à 4°C. Ainsi, si le plasma du patient contient des anti-
corps dirigés contre les antigènes présents à la surface des hématies-tests, un complexe
immun va alors se former entre l’anticorps et l’antigène. Sous l’effet de la centrifugation,
les hématies sont propulsées vers la couche de bille. Les billes de verres agissent comme
un filtre, piégeant vers le haut les hématies agglutinées et permettant aux hématies non
agglutinées de traverser la couche de billes.

Source : GED, classeur VISION, Principe de la méthode

Il existe donc deux cas de figure pour rendre les résultats correspondants à ce type
d’analyse par technique de gel-filtration :
Positif : hématies agglutinées à la surface ou dispersées dans la colonne de filtration.
Négatif : hématies en culot compact au fond de la colonne de filtration.

Source : GED, classeur VISION, Principe de la méthode

18
2.2 Vérification d’une méthode qualitative (portée A)

Le laboratoire est accrédité selon la norme NF EN ISO 15 189 et exige ainsi de

vérifier les performances des automates et la conformité des résultats à chaque change-
ment d’automate. Il existe donc deux méthodes possibles :

- La méthode de portée A (ou vérification de méthode) où la procédure définie par le

fournisseur est suivie. Le laboratoire effectuant la procédure réalise uniquement une véri-
fication de méthode.

- La méthode de portée B (ou validation de méthode) où cette fois-ci, la procédure du

fournisseur n’est pas respectée. Elle est modifiée, c’est pourquoi le laboratoire se doit de
réaliser à la fois une validation de méthode et à la fois une vérification de méthode.

Lors d’une validation ou vérification de méthode, différents critères doivent être exploités.
Ces critères sont référenciés dans un document du COFRAC : le SH GTA 04. Pour la
vérification d’une méthode qualitative, les points suivants sont testés :

Reproductibilité (fidélité) : consiste à analyser des CIQ dans des conditions différentes en
faisant varier au moins un des facteurs : l’opérateur, le temps, le lot de réactifs, l’heure de
passage, etc.

Exactitude : correspond à la comparaison du résultat d’un échantillon inconnu. Les labo-

ratoires évaluent l’exactitude à partir des résultats des EEQ qui leurs sont fournis.

Limite de détection : correspond à la plus petite valeur de mesurande dont une procédure
analytique peut indiquer la présence avec un niveau de confiance spécifié. Elle est égale-
ment appelée « concentration détectable minimale ».

Contamination inter-échantillons : correspond à l’observation d’une contamination entre

les échantillons.

Comparaison de méthodes : consiste à effectuer une comparaison entre les résultats de

deux techniques ou analyseurs différents. Elle doit être assurée dans le cadre d’appareils
en miroir ou lors de changement d’automate.

19
2.3 Présentation automate VISION

Le laboratoire disposait jusqu’ici de la méthode ma-

nuelle pour réaliser des panels de RAI. Cependant, pour des
questions de sécurité et de pratiques, la biologiste respon-
sable du secteur a décidé de faire installer cette technique sur
l’automate VISION. L’automate VISION (Ortho Clinical
Diagnostics®) permet de réaliser les analyses de routine en
immuno-hématologie. Il réalise le groupage ABO (épreuve globulaire et sérique), le phé-
notype Rh/Kell, le dépistage de la RAI et le TCD. C’est un automate relié à un écran qui
permet de le contrôler et de gérer les analyses qui sont réalisées.

Source : photos personnelles

L’automate se compose de :

- six emplacements pour y introduire des portoirs contenant les échantillons (un rack peut
contenir sept tubes, soit une capacité de 42 tubes)

- trois emplacements pour y introduire les portoirs de réactifs

- six portoirs de dilution pour diluer le sang si nécessaire

- un bidon de récupération des déchets liquides et une poubelle de cassettes usagées

- un bidon contenant les liquides (eau saline et eau déionisée)

- sept portoirs de cassettes

- une aiguille pour réaliser les prélèvements

- un lecteur de codes-barres

- perceurs pour percer l’opercule des cassettes

- d’un incubateur à une température de 37°C

20
- deux centrifugeuses

- un lecteur caméra CCD pour assurer la lecture de la réaction

2.4 Comparaison des résultats patients sur les deux méthodes

2.4.1 Procédure technique sur automate

Tout d’abord, afin de tester les patients, la grande majorité des tubes ont été dé-
cantés et mis au congélateur à -20°C. Ensuite, le lancement des panels de RAI ne nécessite
pas beaucoup de temps. Il suffit seulement de charger l’automate des réactifs en prenant
soin de bien les homogénéiser avant et d’insérer les tubes des patients. Ensuite, il faut
programmer la technique qui sera réalisée sur ces tubes en sélectionnant le numéro des
tubes correspondant et en choisissant un des trois programmes disponibles pour cette tech-
nique :

- « IDENT_C+TA » : qui correspond aux panels de RAI en technique de Coombs avec la

réalisation d’un témoin auto.

- « IDENT_C » : qui correspond aux panels de RAI en technique de Coombs sans témoin
auto.

- « IDENT_E » : qui correspond aux panels de RAI en technique enzymatique.

Cependant, le temps d’exécution des panels sur automate est assez long et peut être con-
traignant en cas d’une identification urgente pour une transfusion en urgence vitale par
exemple. En effet, il est impossible d’introduire les réactifs pour la méthode TIA et enzy-
matique en même temps car les deux méthodes contiennent 11 réactifs chacun et il n’y a
de la place pour seulement 18 réactifs.

2.4.2 Exploitation des résultats

La comparaison de méthodes (aussi appelée corrélation) consiste à faire passer un

même échantillon sur deux techniques ayant une méthode identique ou différente. Au la-
boratoire du CHIRB, la comparaison de méthodes a été réalisée entre la technique ma-
nuelle qui a été accréditée et la technique automatisée, via l’automate VISION. Cette com-
paraison a pour objectif d’examiner la similarité des résultats suite à l’utilisation des deux
techniques. Les résultats ont été reportés dans un tableau Excel. (cf. annexe VI)

21
 La comparaison de méthodes a été réalisée en faisant usage de 45 échantillons de
patients différents. Ce lot d’échantillons a déjà été analysé par le biais de la technique
manuelle possédée par le laboratoire. Le laboratoire disposait de deux automates VISION
et a décidé de tester cette méthode sur les deux appareils. Ainsi, 19 échantillons ont été
passés sur le VISION 1, 36 sur le VISION 2, 12 sur le VISION 1 et 2 et 3 échantillons en
technique manuelle avec les réactifs de l’EFS.
Afin de comparer au mieux cette méthode, nous avons essayé de sélectionner des échan-
tillons différents en variant le type d’anticorps présent lorsque cela était possible. Nous
avons finalement testé ces panels d’identification avec les anticorps : anti-D, anti-D passif,
anti-Leb, anti-M, anti-K, anti-Lea, anti-K, anti-C, anti-Kpa, anti-Cw, anti-Lua, anti-E et
anti-U. Nous avons ensuite étudié chaque résultat au cas par cas afin de valider les résul-
tats.

L’anticorps principalement recherché était l’anti-D ou l’anti-D passif. Les résultats

pour ces panels se sont montrés très concluants. En effet, la majorité des échantillons n’ont
pas été testés avec la technique enzymatique car il y avait une bonne réactivité en TIA.
Cependant, certains échantillons présentaient une très faible réactivité en TIA et apparais-
saient mieux en enzyme. Cela peut être dû à la diminution progressive du taux d’anti-D
passif dans le plasma de la femme ayant reçu l’injection.
Par ailleurs, pour le 40ème patient, le résultat du panel était négatif. Avec la technique
manuelle, il y avait uniquement une faible réactivité en enzyme, alors, nous avons testé
cet échantillon sur l’automate mais il n’y a eu aucune présence d’agglutination. Nous
avons donc conclu avec la biologiste que cet anticorps était probablement un anti-D passif
très faible avec un taux minime invisible sur la méthode automatisée.

Pour l’anticorps anti-M, l’ensemble des résultats étaient quasiment semblables.

Sur la méthode automatisé, l’anti-M agglutine davantage avec les hématies homozygotes
n° 2, 4, 5, 6, 8, 10, qu’avec les hématies hétérozygotes n° 1, 3, 7, 9, 11. Nous avons tout
de même pu conclure de la présence d’anti-M. De plus, en technique enzymatique l’anti-
corps sort négatif, ce qui est normal car l’antigène M se retrouve détruit par les enzymes.

L’anticorps anti-Lua n’accroche que sur une hématie Lua en TIA. De plus, l’échan-
tillon n’était pas suffisamment rempli, cela n’a pas permis de poursuivre l’identification
en technique enzymatique. Il y a donc possiblement la présence de l’anticorps anti-Lua,
néanmoins, il est nécessaire d’obtenir une réactivité visible sur au moins trois hématies

22
afin de conclure de la présence d’un anticorps. Cependant, ce panel ne contient que deux
lots d’hématies contenant l’antigène Lua. Cet échantillon serait donc à envoyer à l’EFS.

L’anticorps anti-Lea a une réaction plus forte en enzyme qu’en TIA pour le 44ème
patient. Cependant, pour le 10ème patient, l’anticorps accroche seulement sur une hématie
en enzyme.

Pour l’anti-public (anti-U), il y a une réaction sur toutes les hématies du panel
comme trouvé en technique manuelle, avec une réactivité plus forte en enzyme. Il est donc
nécessaire d’envoyer cet échantillon à l’EFS afin de réaliser cette identification sur un
panel d’hématies plus large.

Pour l’anti-Cw, le résultat du panel est négatif pour la technique TIA et enzyma-
tique. Cet anticorps n’a possiblement pas été détecté dû à la décongélation du tube qui a
pu altérer l’action agglutinante des anticorps.

En outre, certains résultats obtenus n’ont pas été significatifs car nous disposions
de petits tubes de sang qui étaient d’abord utilisés en technique manuelle. Ainsi, quelques
échantillons n’étaient pas suffisamment remplis pour pouvoir réaliser la méthode avec la
technique TIA et enzymatique. C’était notamment le cas pour le 24ème et 27ème patients.
Ces deux échantillons ont pu être testés en technique TIA. Cependant, le résultat du panel
était négatif pour l’anti-E concernant le 24ème patient, et pour le 27ème patient, on a pu
seulement identifier la présence d’anti-Kpa et non pas de l’anti-C. L’identification n’a pas
été possible en raison du manque de plasma qui aurait permis de détecter ces anticorps qui
sont habituellement plus réactifs en enzyme (papaïne).

Enfin, trois échantillons ont été testés manuellement avec les réactifs de l’EFS afin
de s’assurer qu’en situation d’urgence ou de panne d’automate, la manipulation pourrait
tout de même être réalisée. Les résultats sont tels qu’attendus pour l’anti-D passif et l’anti-
K. Le panel du 30ème patient, a lui été réalisé à froid, car sur l’automate, l’anti-M sortait
négatif sur les hématies homozygotes. Ce panel a donc été réalisé car les anticorps anti-M
sortent généralement mieux à froid, et c’est ici le cas pour cet échantillon qui a une forte
réactivité au niveau de toutes les hématies contenant l’antigène M.

23
2.5 Cas clinique patiente

Lors de la comparaison de méthodes, j’ai constaté un cas récurrent : l’anti-D passif.

J’ai donc décidé de porter mon attention sur le cas clinique d’une patiente puisqu’elle
possédait une antériorité de RAI positive avec la présence d’anticorps anti-D passif. En
effet, ce cas m’étant à l’origine inconnu, je souhaitais porter mon intérêt sur cette particu-
larité afin d’illustrer la réalisation de la comparaison de méthodes menée au laboratoire.

2.5.1 Anti-D passif

La patiente est de rhésus négatif, c’est-à-dire qu’elle ne possède pas l’antigène D

à la surface de ses hématies. Ainsi, si son enfant porte l’antigène D il sera de rhésus positif.
Il y a donc ici un risque d’allo-immunisation pour la mère (en cas d’interruption de gros-
sesse, d’une fausse couche, à l’accouchement) car les hématies du fœtus passent dans la
circulation sanguine maternelle. Ainsi, si l’enfant est de rhésus positif, lorsque ses glo-
bules rouges entreront en contact avec les cellules immunitaires de la mère ils seront alors
reconnus comme étranger par l’organisme car l’antigène D n’est habituellement pas pré-
sent sur les hématies de la mère. Une réponse immunitaire va ainsi se mettre en place en
produisant chez la femme des agglutinines irrégulières anti-D, c’est-à-dire dirigés contre
les hématies porteuses de l’antigène D. Le risque peut alors être conséquent en cas de
grossesse ultérieure car si la femme tombe enceinte à nouveau d’un enfant de rhésus po-
sitif, les anticorps présents dans son plasma vont traverser le placenta et rejoindre la cir-
culation sanguine du fœtus pour détruire ses hématies porteuses de l’antigène D. Ce phé-
nomène peut provoquer de graves complications tels qu’une anémie hémolytique du nou-
veau-né, un ictère néonatal ou encore dans les cas les plus graves une mort in-utéro en-
traînant une fausse couche.

24
Représentation d’une allo-immunisation à la suite d’une incompatibilité fœto-maternelle

Source : réalisation personnelle

Ainsi, afin de prévenir des risques d’une incompatibilité fœto-maternelle, les femmes de
rhésus négatif peuvent recevoir une injection de Rhophylac ciblée lorsqu’elles présentent
un risque de passage des hématies fœtales à travers leur circulation sanguine. Elles sont
notamment concernées par une prophylaxie systématique à un certain stade de leur gros-
sesse soit à la 28ème semaine aménorrhée ainsi que dans les 72 heures suivant l’accouche-
ment.

Le Rhophylac est une solution médicamenteuse injectable qui contient des anticorps anti-
D extraits du plasma de donneurs. Ainsi, l’administration d’anticorps anti-D aux femmes
enceintes permet de détruire immédiatement les globules rouges de rhésus positif du fœtus
afin que les cellules immunitaires de la mère ne trouvent pas le temps de produire des
anticorps. Par conséquent, lorsqu’une femme reçoit une dose de Rhophylac il est néces-
saire de vérifier la présence de ces anticorps dans son plasma. La date d’injection du Rho-
phylac et la date de la dernière RAI négative sont indispensables pour l’interprétation du
résultat. Si cette information est donnée et que le résultat de la RAI est positif pour l’anti-
corps anti-D, on dira alors que la patiente possède des anticorps anti-D de type passif.
C’est ici le cas de la patiente qui a reçu une dose de Rhophylac.

25
2.5.2 Panels de RAI

Technique manuelle

Afin de rechercher la présence d’agglutinines irrégulières, le laboratoire effectue tout

d’abord un dépistage sur l’automate VISION. Le dépistage de la patiente s’avérait être
positif c’est-à-dire qu’il y a la présence d’agglutinines irrégulières, normalement absentes,
dans son plasma. Nous avons donc à la suite de cet examen procédé à une identification à
l’aide de panels afin de détecter quels anticorps sont présents chez la patiente. Pour effec-
tuer l’identification, le laboratoire utilisait jusqu’ici une méthode manuelle. Pour cela, il
est nécessaire de disposer de :
- quatre cassettes par patient (deux cassettes Liss/Coombs et deux cassettes enzyme) ;
- deux boites de réactifs BIO-RAD (onze flacons d’hématies-tests par boite, conservé au
froid)
- micropipettes avec plusieurs cônes à changer à chaque pipetage ;
- d’un tube de sang EDTA du patient, préalablement centrifugé à une vitesse de 2200rpm,
soit 922g, pendant 5 minutes à une température de 15°C ;
- d’eau physiologique pour effectuer la dilution du témoin ;
- d’une étuve à 37°C et/ou d’une enceinte réfrigérée ;
- d’une centrifugeuse pour cassettes.

Réactifs pour cassettes Liss/Coombs Réactifs pour cassettes l’enzyme

Source : Google images

26
La technique d’identification a été réalisée avec le plasma de la patiente. Après centrifu-
gation, nous avons pu observer les résultats suivants :

Résultats panels d’identification de RAI sur cassettes Liss/Coombs

Source : photos personnelles

Résultats panels d’identification de RAI sur cassettes enzyme

Source : photos personnelles

Afin d’interpréter les résultats obtenus, nous avons utilisé le tableau d’identification BIO-
RAD (cf. annexe VII). Nous pouvons ainsi observer au niveau des cassettes Liss/Coombs
une agglutination au niveau des puits 1, 2, 3 et 8 ce qui correspondrait selon le tableau
d’identification à la présence d’un anticorps anti-D. Il y a également, une agglutination
plus intense au niveau des mêmes puits sur les cassettes traitées à la papaïne. Ainsi, les
résultats sont concordants entre eux et le résultat du dépistage effectué précédemment sur
cette patiente nous permet de conclure l’identification de la RAI. En outre, la patiente
étant connue des services de l’hôpital nous avons pu voir un antécédent d’injection de
Rhophylac précédé d’une RAI négative, nous pouvons ainsi conclure de la présence d’an-
ticorps anti-D passif dans son plasma.

27
Technique sur automate

La technique d’identification sur automate repose sur le même principe que la technique
manuelle. Cependant, les réactifs sont différents, ils proviennent de l’EFS et l’interpréta-
tion des résultats va alors reposer sur un autre tableau que celui de BIO-RAD, fourni avec
les réactifs (cf. annexe VIII). Pour faire la dilution du témoin auto, un diluant fourni par
la société Ortho sera utilisé. De plus, sur l’automate, la centrifugation se fera en deux
temps avec une première centrifugation pendant 2 minutes et 30 secondes à 800g afin de
favoriser l’agglutination du complexe anticorps-antigène. Puis, une deuxième centrifuga-
tion plus rapide pendant 2 minutes et 30 secondes à 1500g afin que les hématies puissent
retomber et traverser la couche de billes.

Réactifs technique TIA Réactifs technique enzymatique

Source : photos personnelles

Diluant cellulaire

La patiente a également été testée sur l’automate VISION 1 sur technique TIA et sur le
VISION 2, sur technique TIA et enzymatique. L’objectif était de vérifier la concordance
des résultats pour un anti-D passif entre la technique manuelle et automatisée ainsi
qu’entre les deux automates. Les résultats obtenus sont les suivants :

28
 Panels de RAI (TIA) sur VISION 2

Panels de RAI (TIA) sur VISION 1

Panels de RAI (enzyme) sur VISION 1

Source : résultats de l’automate

Nous pouvons donc observer pour ces trois passages une agglutination au niveau des
mêmes puits, soit les puits 1, 2, 3, 4 et 5. Le tableau de l’EFS nous indique qu’une agglu-
tination au niveau des cinq premiers puits traduit la présence d’un anticorps anti-D. Ainsi,
avec les antécédents de la patiente nous pouvons conclure, tout comme trouver en tech-
nique manuelle, de la présence d’anticorps anti-D de type passif. Les deux méthodes sont
donc concordantes et comparables pour le cas de cette patiente.

29
Conclusion
La problématique de départ était la suivante : « La méthode d’identification des RAI
sur automate est-elle comparable à la méthode manuelle ? ». Pour y répondre, nous
avons opposé les résultats des panels de RAI effectués manuellement aux résultats obtenus
avec les automates VISION 1 et VISION 2.

En testant un lot de 45 échantillons, nous avons pu établir certaines conclusions sur cette
nouvelle méthode. Tout d’abord, nous pouvons observer une différence conforme entre
les panels effectués en technique TIA et enzymatique. En effet, la réactivité est plus forte
en enzyme pour les anticorps du système Rhésus et Lewis. Concernant les anticorps anti-
M et anti-Fya, les panels en technique enzymatique sortent négatifs en raison de l’action
des enzymes sur ces antigènes. De plus, pour plusieurs échantillons, la technique enzyma-
tique n’a pas été utilisée en raison d’une bonne réactivité des anticorps en TIA. C’est un
point positif qui pourrait permettre d’économiser du temps et du réactif.
Ensuite, quelques anticorps n’ont pas été détectés possiblement dû à un taux d’anticorps
très faible et à la décongélation de certains tubes. En outre, l’insuffisance de plasma dans
quelques tubes a malheureusement posé problème car certains échantillons n’ont pas pu
être testés et d’autres uniquement sur une seule technique, parfois non suffisante pour en
tirer une conclusion. Ainsi, à l’avenir, dans le cas où cette méthode serait mise en place,
il faudra alors prévoir de prélever des tubes de sang EDTA de plus grande taille.
La méthode sur automate nous a notamment permis d’observer pour quatre patients une
réactivité supplémentaire en enzyme non détectée en méthode manuelle qui serait ainsi à
exploiter. En outre, la technique manuelle fonctionne également très bien avec les réactifs
utilisés pour la méthode automatisée.
Pour conclure, il y a une bonne corrélation (80%) entre la méthode testée sur les
deux automates VISION et la méthode manuelle actuellement utilisée au laboratoire. Nous
avons également une excellente corrélation (100%) entre les deux automates VISION.
Cette méthode automatisée est donc comparable à la méthode manuelle. Cette nouvelle
méthode présente certains avantages et inconvénients mais le choix de la mise en place de
celle-ci sera décidé à la suite de la finalisation du dossier de vérification de méthode.

30
Conclusion personnelle

Ces stages ont été une première expérience au sein d’une structure hospitalière.
J’avais donc pour souhait de pouvoir observer l’organisation et le fonctionnement d’un
laboratoire. En outre, j’ai pris conscience de ce que représentait le travail en milieu hos-
pitalier et j’ai pu me familiariser avec les différents automates des laboratoires.
Par ailleurs, mes observations m’ont permis d’effectuer une comparaison de méthodes.
Ainsi, je suis très reconnaissante de la confiance que le personnel du laboratoire m’a ac-
cordée pour cette mission qui m’a fait évoluer d’un point de vue personnel et profession-
nel. Lors de cette période de stage, j’ai alors pu mettre en pratique divers enseignements
acquis au cours de mon parcours scolaire.
De plus, j’ai eu l’opportunité de rencontrer un grand nombre de professionnels et j’ai éga-
lement découvert certaines des difficultés auxquelles ils pouvaient faire face. Le partage
de leurs expériences et de leurs recommandations m’a été bénéfique. Par conséquent, dans
le cadre d’une possible future présence dans un laboratoire, je serai en mesure de faire
preuve davantage d’assurance.
Ces stages m’ont permis d’avoir une vision globale du métier de technicien de laboratoire.
J’ai grandement apprécié cette expérience qui s’est révélée être ma première approche
dans le monde du travail. Ainsi, mon choix de devenir technicienne de laboratoire s’est
définitivement confirmé.

31
Bibliographie et sitographie

Bibliographie :

CHIRB : Classeur VISION, Principe de la méthode

Sitographie :

http://www.ch-aulnay.fr/fr/Accueil-3.html

https://tools.cofrac.fr/documentation/SH-GTA-04

https://tools.cofrac.fr/documentation/SH-GTA-06

https://www.toutsurlatransfusion.com/immuno-hematologie/analyses-complemen-
taires/ih-grossesse.php

http://www.cnrhp.fr/docs/soireegenotypage/2-Soireegenotypage.pdf

32
Annexes
Annexe I : Organigramme fonctionnel du laboratoire de l’hôpital Robert Ballanger (do-
cument interne du laboratoire)

Annexe II : Organigramme représentant le personnel du laboratoire de Virologie d’AVC

(document interne du laboratoire)

Annexe III : Bon de demande (laboratoire du CHIRB)

Annexe IV : Carte de Levey-Jennings pour le CQ anormal bas du TP en hémostase

Annexe V : Fiche de non-conformité

Annexes VI : Tableau des résultats des patients

Annexe VII : Tableaux de dépistage et d’identification des agglutinines irrégulières (ré-

actifs BIO-RAD)

Annexe VIII : Tableau d’identification des agglutinines irrégulières (réactifs EFS)

Annexe IX : Engagement de non-plagiat

33
 Management
Organigramme fonctionnel nominatif du Service de biologie médicale
ORG
Biologie Médicale

Diffusion : GED, RQ, Classeur « Personnel Médical », Classeur « Ressources Humaines Dépôt de Sang »
Annexe I : Organigramme fonctionnel du laboratoire de l’hôpital Robert Ballanger

Da e d a lica i n Référence Version (Révision) Confidentialité N°page

34
16/03/2020 LABO-ORGA-0006-023 23 Public 1/1
Annexe II : Organigramme représentant le personnel du laboratoire de Virologie d’AVC

35
Annexe III : Bon de demande (laboratoire du CHIRB)

36
Annexe IV : Carte de Levey-Jennings pour le CQ anormal bas du TP en hémostase

Annexe V : Fiche de non-conformité

37
Annexe VI : Tableau des résultats des patients

38
39
40
Annexe VII : Tableaux de dépistage et d’identification des agglutinines irrégulières (ré-
actifs BIO-RAD)

41
Annexe VIII : Tableau d’identification des agglutinines irrégulières (réactifs EFS)

42
Annexe IX : Engagement de non-plagiat

43