Module : Stage Biochimie _ S3

Site de stage : CHP Molay Rachid

Période de stage : du 02/04/2021 au 23/04/2021
Réalisé par : Hafsa Serhani

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 Table des matières :

Introduction ......................................................................................................... 1

Remerciement ...................................................................................................... 2

Présentation du site de stage ............................................................................... 3

1. Données générales sur site de stage ................................................................... 3

2. Organisation du laboratoire ................................................................................ 5
Phase pré-analytique............................................................................................ 7

1. Prescription médicale ....................................................................................... 7

2. Préparation du patient ..................................................................................... 8
3. Prélèvement .................................................................................................... 8
3.1 Modalités techniques de prélèvement ................................................ 8
3.2 Matériels ............................................................................................ 10
3.3 Mode opératoire ................................................................................ 10
4. Réception au niveau du laboratoire et Conformité des échantillons ............. 12
5. Triage des échantillons .................................................................................. 13
6. Traitement pré-analytique des échantillons ................................................. 13

Phase analytique ............................................................................................... 14

1. Analyseur de biochimie BA400 ....................................................................... 14
2. Chimie des urines – bandelettes réactifs........................................................ 19

Phase post-analytique ........................................................................................ 21

1. Validation des résultats ............................................................................................................... 21

2. Gestion des déchets ...................................................................................................................... 22

3. Entretien du laboratoire...............................................................................................................22

Conclusion .......................................................................................................... 23

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 I. Remerciement :

Je voudrais remercier toutes les personnes qui ont contribué

au bon déroulement de mon stage. Tout d’abord je tiens à
remercier tout le personnel de laboratoire d’analyses médicales
CHP Molay Rachid, plus particulièrement Mme AQZIZ Fouzia; la
majeure, de m’avoir accueilli durant cette période de stage au sein
de son laboratoire.

Je remercie également l’ensemble des techniciens de laboratoire

biomédical d’avoir répondu à toutes mes questions et qui m’ont
permis de s’exercer avec eux divers analyses réalisés.

Mes profonds remerciements s’adressent également à l’ensemble

du système pédagogique d’ISPITS Casablanca en particulier Mme
ETTAKI Imane ; professeur du Travaux pratiques de la Biochimie
Clinique et Mr ZEKRI Mustapha le coordinateur de la filière
Techniques de Santé et Professeur de la Biochimie Clinique.

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 I. Introduction :

Pour ce présent semestre, nous avons effectué le stage

concernant la discipline de l’hématologie. Moi et mon groupe, au
sein de CHP Molay Rachid, d’une durée de 22 jours.

Ce stage m’a présenté une expérience professionnelle très

enrichissante. Il m’a permet de mettre en application les
informations acquises durant nos études et de toucher de près
l’utilité des méthodes et outils appris dans les différents modules
enseignés et aussi de s’adapter avec le monde professionnel et
confronter des situations réelles.

Ce rapport est une présentation exhaustive de tous les aspects

techniques que j’ai pu apprendre ou approfondir durant le stage,
dont je vous expose en premier lieu une présentation du lieu de stage.
Ensuite je décris l’ensemble de taches effectuées. Et enfin je résume
par les acquis techniques et personnels.

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 III. Présentation du lieu de stage:
1. Données générales :

CHP MOLAY RACHID

Nom : Centre Hospitalier préfectoral Molay Rachid – Hôpital Sidi

Othmane
Adresse : Avenue Al Joulane - Sidi Othmane
Date de création : 1989
Mode de gestion : Service D’Etat Géré de Manière Autonome
(S.E.G.M.A)
Architecture pavillonnaire sur bâtiments administratifs superficie
: 18 000 m2
Capacité litière théorique : 240 lits
Nombre de disciplines : 20 disciplines
Effectif total du personnel de santé : 186
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Présentation des départements - services :

 Cinq départements :
o Département de médecine
o Département de chirurgie
o Département de Mère-enfant
o Département médico-technique
o Département ORL-OPH-stomatologie

 Trois services :

o Service des urgences

o Service de la pharmacie
o Service d'accueil et d'admission

 Dix-sept spécialités :

o Pédiatre
o Chirurgie infantile
o Anesthésie-réanimation
o Chirurgie générale
o Ophtalmologie
o ORL
o Cardiologie

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o Gastro-entérologie
 o Médecine interne
o Néphrologie et dialyse
o Pneumo-phtisiologie
o Dermatologie et vénéréologie
o Endocrinologie diabétologie diététique
o Rhumatologie
o Chirurgie dentaire
o Radiologie
o Analyses biomédicales

2. Organisation du laboratoire :

Horaire de travail :
Le laboratoire de Biologie Médicale du CHP Molay Rachid est un
laboratoire polyvalent fonctionnant 24 h/24 et 7 j/7.
Les horaires de la matinée sont de 8h à 14h, l’après midi est de
14h à 20h, et la garde est de 20h à 8h.

Les locaux :

o Salle d’hématologie
o Salle de bactériologie
o Salle de biochimie
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 o Bureau de la majeure
o Deux salles pour l’hygiène des mains
o Deux toilettes
o Salle de réserve
o Archive
o Laverai

Les personnels :

Le laboratoire est constitué de la majeure, 7 techniciens de

laboratoire et des stagiaires qui sont divisés en :
o 2 techniciennes de laboratoire et la majeure pour la
matinée
o 1 technicien de laboratoire pour l’après midi
o 1 technicienne de laboratoire pour la garde
o 1 docteur pour la biochimie
o 2 techniciennes pour l’hématologie

Les paillasses :

Le laboratoire regroupe 6 postes techniques appelés « paillasse » :

o Biochimie
o Hématologie
o Hémostase
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 o Sérologie
o Immuno-hématologie
o Bactériologie

IV. Phase pré-analytique :

Les conditions pré-analytiques constituent un volet majeur

d’assurance de la fiabilité et de la validité des résultats.

Elles présentent les sources les plus importantes des résultats

erronés ou non interprétables.

La maîtrise et les efforts de standardisation de ces conditions

pré-analytiques sont primordiaux pour assurer la qualité de
l’exploration en biologie médicale.

1. Prescription médicale :

L'analyse doit être prescrite explicitement sur l'ordonnance,

selon la nomenclature des actes de biologie médicale.

Le prescripteur, son nom, sa qualité doivent être clairement

identifiée. Il doit mentionner l'identité du malade (nom,
prénom, âge, numéro d’entré), le cachet et la signature du

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prescripteur, ainsi que tous les renseignements cliniques
utiles à l'analyse et à la validation des résultats.

L’ensemble des services du CHP Molay Rachid ayant un

formulaire de demande d’analyse dont le contenu est établi
par le laboratoire.

2. Préparation du patient :

Certaines données biologiques sont particulièrement sujettes

à des variations importantes au cours de la journée qui
dépendent en particulier de facteurs nutritionnels. Ainsi, 10 à
12 heures de jeûne et 24 heures d’abstinence alcoolique sont
recommandés avant tout prélèvement

Pour les prélèvements urgents pas de conditions particulières

Les prélèvements sanguins sont en général effectués entre

7 h 00 et 9 h 00 du matin (variation nycthémérale). Glycémie

post prandial généralement à 11h.
3. Le prélèvement :
3.1 Modalités techniques du prélèvement :

Le prélèvement doit être réalisé en règle générale avec du

matériel stérile à usage unique.
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Le récipient destiné à recevoir l'échantillon biologique doit être
adapté à la nature des analyses.

L'étiquetage des récipients contenant l'échantillon biologique doit

être fait au moment du prélèvement par la personne ayant réalisé
celui-ci. Il doit être conçu pour éviter toute erreur sur l'identité de
la personne.

Le préleveur respectera une chronologie dans le remplissage des

tubes et il veillera au respect du rapport sang/anticoagulant.

L’ordre de remplissage des tubes est primordial pour éviter les

contaminations et interférences :

o Tubes citratés (bouchons bleu ciel) : les paramètres

hématologiques
o Tubes sec (bouchon rouge) : les paramètres biochimiques
o Tubes EDTA (bouchon violet) : les paramètres d’hémostase

Homogénéisation du sang prélevé dans des tubes avec

anticoagulant par des mouvements de retournement doux pour
éviter l’apparition de caillot, une agitation forte provoque
l’hémolyse.

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Les prélèvements sont effectués à la salle de prélèvement, ou
proviennent aussi des autres services de l’hôpital ou bien des
patients externes.

1.2 Le matériel nécessaire :

o Système vacutainer
o Garrot
o Aiguilles stériles
o Coton
o Sparadrap
o Alcool
o Tubes sous-vide adéquats
o Portoir

1.3 Mode opératoire :

1. Installation de la personne
2. Vérification ultime : identité du patient
3. Mise en place du garrot
4. Vérification du pouls
5. Recherche de la veine
6. Antiseptique de la peau
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7. Piquer dans le sens du retour veineux dans l’axe de la veine
8. Biseau de l’aiguille vers le haut avec un angle de 30
9. Introduction des tubes selon l’ordre établi
10. Retirer le tube lorsque le sang s’arrête de couler
11. Homogénéiser le tube
12. Ouvrir le garrot
13. Retirer l’aiguille
14. Comprimer le site de ponction
15. Activer le système de protection de l’aiguille, éliminer le
système.

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 4. Réception au niveau du laboratoire et Conformité des
échantillons :
Après le prélèvement, les tubes seront acheminés au laboratoire
avec ses ordonnances médicales.
La réception d’un échantillon doit être consignée sur un registre,
avant de procéder à l’analyse.
L’enregistrement doit contenir tous les renseignements au sujet
de l’identité du patient et du prescripteur, des analyses prescrites,
de la date du prélèvement et le nom de la personne ayant reçu les
échantillons.
On vérifier la cohérence entre le nom indiqué sur le tube et celle
indiqué sur l’ordonnance correspondante.
Échantillons considérés comme non conforme :
o Échantillon non étiqueté
o Récipient/tube qui fuit ou qui est cassé (endommagés et non
étanches)
o Information insuffisante sur le patient
o L’étiquette de l’échantillon et le nom du patient sur la fiche
de demande d’analyse ne correspondent pas
o Échantillon hémolysé (selon l’analyse requise)
o Échantillon non recueilli à jeun pour des analyses l’exigeant

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 o Échantillon recueilli dans un récipient/tube non adapté
o Volume inadéquat par rapport à la quantité de conservateur
o Quantité insuffisante pour l’analyse requise
o Échantillons inappropriés aux analyses prescrites
5. Le triage :
Les patients externes apportent des échantillons directement dans
la zone de tri.
Les tubes de biochimie sont représentés par un numéro qui doit
être marqué sur le tube et la prescription médicale
correspondante.
Les tubes seront ressemblé dans des portoir.
6. Traitement pré-analytique des échantillons :
Après le triage, les tubes vont subir une centrifugation de
40000trs/min pendant 10 min.
Il faut impérativement équilibrer le rotor, c'est à dire répartir les
tubes de façon homogène de part et d'autre de l'axe central.

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 V. Phase analytique :

 Les analyses urgentes se traitent en priorité

 Le port de la blouse, les gants et le masque est obligatoire.

1. Analyseur de Biochimie BA400 :

 L’analyseur de biochimie multiparamétrique BA400 permet le

dosage des paramètres biochimiques dans un liquide biologique
(sang, urines, liquides d’épanchement ou LCR).

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 Il s’agit du dosage des :
o Composés simples comme le glucose, l’urée, la créatinine,
le cholestérol,…
o Ions comme le sodium, le potassium, le chlorure,…
o Enzymes comme les transaminases, les gamma GT, les
phosphatases,…
o Hormones comme les hormones thyroïdiennes (TSH, T4L),
o Protéines spécifiques (ferritine, CRP…),
o Médicaments (cardiotoniques, antibiotiques…).

 L’analyseur effectue dans l’ordre les différentes étapes du

dosage :
1. Le prélèvement du liquide biologique à analyser, à
partir du tube de prélèvement.
2. Sa dilution dans des proportions appropriées, le plus
souvent dans de l’eau distillée ou une solution tampon
spécifique.
3. Le mélange de cette dilution à un ou plusieurs réactifs,
en respectant les volumes et les temps de contact.
4. L’incubation du mélange, le plus souvent à 37°C,
pendant un temps déterminé afin que la réaction
biochimique ou enzymatique se développe.

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 5. La mesure du signal : densité optique à une longueur
d’onde déterminée pour les méthodes
Spectrophotométriques ou potentiel électrique pour
les méthodes électrochimiques.
6. La comparaison à une courbe d’étalonnage préétablie
qui convertira la densité optique ou le potentiel
électrique en concentration de l’élément à doser.

 Les techniques mises en œuvre dépendent du composé à

doser :
o Techniques enzymatiques (glucose, cholestérol,
enzymes…)
o Techniques chimiques (calcium, créatinine…)
o Techniques électrochimiques (sodium, potassium,
lithium…)
o Techniques immunologiques (protéines)
o Techniques immun-enzymatiques (hormones,

médicaments…)

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Spécifications techniques :
o Marque : Biosystems

o Type : BA 400

o Cadence : 400 tests/h (même pour bi-réactifs)

o Cadence module ISE (Ion Selective Electrode) : 320 tests/h
o Principes d’analyse : colorimétrie, turbidimétrie
o Piloté par ordinateur connectable : logiciel BA400
o Compartiment échantillons : 135 positions
o Compartiment Réactifs (thermostaté 5-8°C) : 88 positions

o Volume d'aspiration d’échantillons : 2 - 40 ul

o Volume d'aspiration des réactifs : R1 = 90 – 500 ul

R2 = 0 - 300 ul
o Système de Distribution : Aiguilles de prélèvement

o Carrousel de Réaction : 120 Cuvettes Lavable de 0,6 cm

o Système de lavage des cuvettes : 7 embouts (2 lavages, 3

rinçages, 2 séchages)
o Système de préchauffage : 30-37°/0,1°c

o Longueurs d’onde Range : 340 - 670 nm

o Mode de Fonctionnement : Routine, Urgence, Programme,
Aléatoire
o Mode des Analyses : Point final, 2 Point, et cinétique

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 o Dimensions (largeur, profondeur et hauteur) : 1200 mm x 720
mm x 1258 mm
o Poids : 210 Kg
o Caractéristiques électriques :
 Tension : 115 V à 230 V
 Fréquence : 50 Hz ou 60 Hz
 Puissance électrique : 500 VA

o Consommables :

 Réactifs pour la mise en œuvre des analyses

 Solutions d’étalonnage

 Sérums de contrôle (contrôle de qualité)

 Eau distillée pour dilution et rinçage

7. Contrôle de qualité :
Tout élément dosé doit être validé par un contrôle de qualité,
passé dans la série analytique.
Les zones thermostatées (stockage des réactifs, incubation des
sérums), les températures doivent être contrôlées.

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 2. Chimie des urines – Bandelettes réactives :

Le test de la bandelette doit être pratiqué sur des urines

fraîches, émises depuis moins d’une heure.
Les bandelettes doivent être conservées dans leur emballage
d’origine, fermé, au sec, au frais et à l’abri de la lumière.
Ces bandelettes sont à usage unique et ne nécessitent aucun
matériel de laboratoire particulier, elles permettent :
Une analyse simple, rapide et peu chère de différents
paramètres urinaires :
Ph : Les valeurs de pH mesurées vont de 5 à 9.
Leucocytes : le test met en évidence l’activité des estérases
granulocytaires. L’hydrolyse d’un ester indoxylique par ces
enzymes conduit à la formation d’indoxyle qui réagit avec un sel
de diazonium et donne une couleur violette.

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La couleur de la zone réactive peut être classée sans équivoque
après 60 secondes dans l’une des catégories : négatives, ou
environ 10 à 25 leucocytes/µl.
Nitrites : il met en évidence de germes nitrites positifs,
habituellement des entérobactéries présentes dans l’urine.
Une coloration rose à rouge de la zone réactive indique une
bactériurie significative avec une limite de détection de 0.5
mg/l, soit 11 µmol/l.
Protéines : le test est particulièrement sensible à l’albumine
avec une limite de détection de 60 mg/l mais il n’a qu’une faible
détection pour les autres fractions protéiques, notamment les
globulines et les chaines légères d’immunoglobuline.
Hématies : l’hémoglobine et la myoglobine catalysent
l’oxydation de l’indicateur par l’hydropéroxide organique
contenu dans la zone réactive.
Les bandelettes actuelles comportent 2 échelles colorimétriques
distinctes, l’une pour les érythrocytes, l’autre pour
l’hémoglobine.
Des points verts plus ou moins denses sur la zone réactive jaune
indiquent la présence d’érythrocytes intacts avec une limite de
détection pratique de 5 érythrocytes par µl.

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L’hémoglobine, les érythrocytes lysés et la myoglobine sont mis
en évidence par une coloration verte homogène de la zone
réactive avec une limite de détection de l’hémoglobine
correspondant à 10 érythrocytes / µl.
Des traces d’antiseptique (très oxydant) dans le récipient de
l’urine peuvent conduire à des résultats faussement positifs
pour les hématies.

VI. Phase post-analytique :

1. Validation des résultats :

La validation des résultats se déroule en deux phases : la
validation technique réalisée par les techniciens de laboratoire et
concerne les résultats analytiques seuls, puis, la validation
biologique par le médecin biologiste dans le but de la vérification
de la concordance de l’ensemble des résultats des examens
effectués pour un même patient avec les éléments cliniques
apportés par le clinicien.

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2. Gestions des déchets :
Les déchets sont produits dès la phase pré analytique,
essentiellement sont de type DASRI (déchets d’activité de soins à
risque infectieux).
Le CHP Molay Rachid possède une société de gestion de ces
déchets (traitement et élimination) à l’intérieur de l’hôpital ce
qu’il permet une meilleure traçabilité de leur élimination et par
conséquent une bonne protection de l’homme et
l’environnement contre les risques biologiques.

3. Entretien du laboratoire :
Effectuer chaque matin par une femme de ménage par des
produits de nettoyage principalement l’eau de javel.

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 VII. Conclusion :

Au terme de ce stage, je tiens à souligner la valeur des acquis

pratiques que j’ai pu tirer, dont :
Familiarisation avec l’organisation générale du laboratoire.

Procéder au circuit d’analyses biologiques (du prélèvement à la

validation).

Comprendre l’importance du rôle des techniciens de laboratoire

dans le système de santé.

Se sensibiliser par les responsabilités attribuées au technicien du

laboratoire.

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