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STAGE EFFECTUE AU LABORATOIRE DE BIOLOGIE CLINIQUE DE HGOPED DU 23-08-2021 AU 23-11-2021

Noms et Prénoms Fonction Signature


Responsable unité
Mme AFA’A Théramène de Banque de Sang

Mme NGO YIG Esther Responsable unité


d’Hématologie

REDIGE PAR : OUMAR ABAKAR SEIDOUNA 1


MASTER I BIOLOGIE CLINIQUE ‹‹ IMMUNOLGIE-HEMATOLOGIE ›› / FMSP-UDO
STAGE EFFECTUE AU LABORATOIRE DE BIOLOGIE CLINIQUE DE HGOPED DU 23-08-2021 AU 23-11-2021

SOMMAIRE

REMERCIEMENTS………………….………………………………………………………3
ABREVIATIONS……………….……………………………………………....……………..4
PROGRAMME DE PASSAGE SUR LES PAILLASSES………………………..……..…...5

INTRODUCTION………………..………………………………………...............................6
I. PRESENTATION DE L’HOPITAL GYNECO-OBSTETRIQUE ET PEDIATRIQUE
DE DOUALA (HGOPED)
1. Localisation………………………………………...….……………………………..7
2. Historique …………………………………………...……….………………...…….7

II. PRESENTATION DU LABORATOIRE DE BIOLOGIE CLINIQUE DE HGOPED


1. Organisation du laboratoire………………………………………..……………….8
2. Activités du laboratoire………………………..……………….……………………8

III. TACHES EFFECTUEES


1. Unité d’accueil ………………...………………….………………………………….9
2. Unité de prélèvement…………………….……………………..…………………..14
3. Unité d’hématologie…...………………………………..…….…………………….21
4. Banque de sang……………………………………………...………………………28

IV. CONTROL QUALITE


1. Control interne……………….……………………………………………………..29
2. Control externe………………………………………………………………….…..29

V. BILAN
1. Personnel et relationnel……………………………………………………………30
2. Découvertes du monde du travail…………………………………………………30
3. Les connaissances théoriques et pratiques……………………………………….30

CONCLUSION........................................................................................................................31
Reference

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REMERCIEMENTS
ALHAMDOULILLAH

Je souhaite exprimer ma reconnaissance et ma gratitude à ma famille.


Je tiens tout d’abord à remercier de m’avoir permis d’effectuer mon stage au sein
de leur laboratoire et d’avoir mis à ma disposition tout le matériel nécessaire
pour me permettre d’acquérir une meilleure technique de travail.
Je saisis l’occasion pour exprimer mes profonds remerciements aux responsables
et au personnel administratifs de FMSP et de HGOPED.
Je tiens aussi à remercier toute l’équipe du laboratoire pour m’avoir soutenu
dans mon travail et pour m’avoir appris comment travailler dans un laboratoire
d’analyses.
Je voudrais aussi exprimer ma reconnaissance envers les amis et collèges qui
m’ont apporté leur aide tout au long de mon stage.
Un grand merci à tous.

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ABREVIATIONS
AC : Anticorps
Ag : Antigène
Ag HBs : Antigène Hépatite B de Surface
Ac HCV : Anticorps anti-Virus Hépatite C
CGR : Concentré de Globules Rouges
CPS : Concentré de Plaquettes Standard
DASRI : Déchets d’Activité de Soins à Risque Infectieux
DDD : Date de Dernier Don
EDTA : Ethylène Diamine Tétra Acétate
ELISA : Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
FMSP : Faculté de Médecine et des Sciences Pharmaceutiques
GS-Rh: Groupe sanguin Rhésus
HIV : Human Immunodeficiency Virus
HGOPED : Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Douala
PCV : Prélèvement Cervico Vaginal
PFC : Plasma Frais Congelé
PSL : Produits Sanguins Labiles
RAI : Recherche d’Anticorps Irréguliers
ST : Sang total
TCA : Temps de Céphaline Activée,
TDR : Test de Diagnostic Rapide
TMS : Technicien Médico-Sanitaire
TP : Taux de Prothrombine
TQ : Temps de Quick
TPHA : Treponema Pallidum Haemagglutination Assay
VDRL : Venereal Disease Research Laboratory

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PROGRAMME DE PASSAGE SUR LES PAILLASSES

Mon stage pratique au sein de Laboratoire de Biologie Clinique de HGOPED s’est limité
aux unités d’accueil et prélèvement, d’Hématologie, et la banque de sang selon le
programme ci-après :

Période Unité/Salle
23/08/2021
au PRELEVEMENT BANQUE DE SANG
07/09/2021

08/09/2021
au ACCUEIL/SECRETARIAT
21/09/2021

22/09/2021
au PRELEVEMENT LABO
04/10/2021

05/10/2021
au HEMATOLOGIE
31/10/2021

01/11/2021
au BANQUE DE SANG
23/11/2021

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INTRODUCTION

Un laboratoire de biologie clinique (ou laboratoire de biologie médicale) est une


structure où des professionnels de la santé prélèvent et analysent différents fluides de
l’organisme, et en l'interprétation des résultats obtenus dans le but de caractériser
l'origine physiopathologique d'une maladie. Il peut s’agir de prélèvement de sang, de
peaux, d’urines, de selles ou de muqueuses.
Les analyses biologiques sont réalisées sur des échantillons prélevées sur les patients
dans des conditions strictes, en hématologie comme pour les autres spécialités de la
biologie, le(s) constituant(s) à doser ou à caractériser ne doi(vent) pas subir de
modification qualitative ni quantitative entre le recueil et l’analyse proprement dite.
Pour le compte de l’année académique 2020-2021, nous avons été recommandés par la
FMSP pour effectuer le stage au sein du laboratoire de biologie clinique de l’HGOPED
pour une période allant du 23 Août au 23 Novembre 2021. Pour mieux assurer les
attentes fixées par la FMSP afin de servir par excellence dans la chaine médicale, il nous
a été donné des objectifs suivants :
 Maitriser les étapes de prélèvement, de transport, traitement et conservation des
échantillons d’hématologie et d’immunohématologie.
 Maitriser les principes du contrôle interne de laboratoire.
 Maitriser les principes et méthodes utilisées en immunohématologie.
 Maitriser et appliquer les méthodes universelles de prévention des accidents de
laboratoire.
 Effectuer une validation technique des examens pratiqués.
 Maitriser les étapes pré-analytiques et post-analytiques d’un examen de
laboratoire.

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I. PRESENTATION DE L’HOPITAL GYNECO-OBSTETRIQUE ET


PEDIATRIQUE DE DOUALA (HGOPED)

1. Localisation

L’hôpital gynéco-obstétrique et pédiatrique de Douala est situé à Yassa dans


l’arrondissement de Douala 3eme, dans le Canton NGODI BAKOKO ; à 15 minutes du
centre administratif de Bonanjo sur la pénétrante Est Douala – Yaoundé ; entre les
stations TRADEX et BOCOM en allant vers Village. La surface totale du domaine est de
7,3 hectares ; avec 34470 m2 de surface occupée et 14082 m2 de surface bâtie ; l’espaces
verts est de 12930.90 m2 ; il compte onze bâtiments Capacité 300 lits ; Parkings : 60 places
; un incinérateur et une station d’épuration des eaux usées.

Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Douala (HGOPED)

2. Historique

Le projet de construction de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Douala en


abrégé HGOPED est le fruit de la coopération Sino-camerounaise. Crée en 2014 selon le
décret présidentiel, Décret n° 2014/023 du 23 janvier 2014 portant création,
organisation et fonctionnement de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique
de Douala. C’est un hôpital dédié à la mère et à l’enfant dont les missions sont :
 Dispenser des soins de qualité ;
 De contribuer à la formation professionnelle et au perfectionnement du
personnel ;
 Offrir un champ d’exploration à la recherche médicale dans les disciplines
gynécologiques ; obstétrique et pédiatriques.

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II. PRESENTATION DU LABORATOIRE DE BIOLOGIE


CLINIQUE DE HGOPED

1. Organisation du laboratoire

Placé sous l’autorité d’un Chef de Service Pr NGABA GUY PASCAL et de son adjoint Dr
WANG ABWA DANIEL assisté d’une Major Mme NTSOGO EBOGO Véronique et d’une
Major Adjointe Mme TCHAPTCHET NGONJI Armande, le Service de Laboratoire et de
Biologie Clinique est chargé de la préparation des réactifs ; du prélèvement des
échantillons ; du traitement, du conditionnement et de l’analyse des échantillons
biologiques ; du contrôle de la qualité des examens biologiques ; de la calibration des
appareils ; de l’interprétation, du respect et la validation des résultats ; de la collecte de
sang mobile ; de la sécurisation et de la validation biologiques des poches de sang. C’est
dans ce service que nous avons sur une durée de 3 mois mis en pratique nos compétences
théoriques et acquis de nouvelles connaissances concernant le secteur professionnel.

Situé au deuxième bâtiment aile droit venant des urgences, à la droite du service de
radiologie et est composé de sept unités dont une unité d’accueil et prélèvement ; une
Unité de Bactériologie ; une Unité de Biochimie ; une Unité d’Hématologie ; une Unité
de Parasitologie ; une unité de Sérologie et la Banque de Sang.

Le personnel travaille selon un programme préétabli qui est affiché au babillard du


laboratoire et est organisé en trois équipes réparties comme suit :
- Une équipe de matinée qui travaille de 07h30 à 15h30,
- Une équipe de garde qui travaille de 16h00 à 08h00
- Une équipe de permanence travaillant le week-end et les jours fériés.

2. Activités du laboratoire
Le laboratoire de biologie clinique de l’HGOPED est constitué de plusieurs unités, qui
s’occupent des analyses prescrites par un médecin interne ou externe aux patients.
Celles-ci sont sous la responsabilité d’un chef de service et sous la supervision d’un
major, chargé de veiller à l’application des différentes tâches à accomplir. La demande
est traitée selon une procédure dans le but que le patient et le médecin reçoivent les
résultats.

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III. TACHES EFFECTUEES


Pendant mon stage j’ai pu observer et m’exercer sur plusieurs paillasses du laboratoire.
J’ai aussi découvert une véritable équipe de travail et les responsabilités qui incombent
à chacun. Je vais présenter ci-dessous les différents domaines que j’ai explorés.

1. Unité d’Accueil/Secrétariat

Comme son nom l’indique cette unité d’accueil de laboratoire a pour but d’accueillir les
patients et rendre disponible les résultats de tous les patients internes ou externes du
laboratoire.
Pour assurer de façon efficace et diligente les différentes tâches assignées au secrétariat
du laboratoire sont :
 Accueil et orientation des patients
 Renseigner sur les prix des différents actes
 Préfacturation
 Collecte et Edition des résultats
 Classements et Rendu des résultats
La salle est équipée de trois ordinateurs desktops, une photocopieuse imprimante, et est
disposée comme suit :
 Deux box de pré-facturation et d’enregistrement des examens de biologie clinique
 Un box d’enregistrement et de pré-facturation des examens d’imagerie médicale

METHODE
- Dépôt des bulletins d’examens : à l’arrivé du patient, l’accueillir et prendre son
bulletin d’examens pour la pré-facturation et l’enregistrement des coordonnées
et analyses du patient dans le cahier des patients externes à savoir : noms et
prénoms, âge, sexe, nom du prescripteur, service, date de pré-facturation,
examens à faire ; puis lui remettre son bulletin et l’envoyer à la caisse pour la
facturation ; enregistrer ainsi les noms et prénoms du patient, ses examens à faire
et son service dans le cahier des dates de retraits ; faire de même pour les patients
internes.
- Retrait des résultats examens : à l’arrivé du patient pour le retrait de ses résultats,
prendre son reçu puis repérer son identité dans le cahier des patients externes,
marquer la date de son retrait, son contact et le faire signer, puis lui remettre son
résultat dans une chemise cartonnée et close.

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2. Unité de prélèvement

 Présentation de la salle de prélèvement

 Un box d’enregistrement, équipé d’un ordinateur desktop et d’un registre


permettant les enregistrements des différents malades qu’ils soient externes ou
internes. L’enregistrement dans le cahier se fait à partir du reçu de paiement du
malade et sont entrées les informations suivantes : heure d’enregistrement, code du
patient (à six chiffres correspondant respectivement au jour, mois, et numéro d’ordre
du patient), noms, âge, sexe, examens à réaliser, examens ne pouvant pas être
réaliser, nom du médecin prescripteur, le service du malade, nom du préleveur et la
date de retrait des examens. Apres l’enregistrement du malade, sa fiche est passée
pour son prélèvement.
 Un box de prélèvement génital (PCV, PU, Mycoplasme et Chlamydia direct), équipé
d’un lit de prélèvement, d’un lampadaire permettant d’éclairer les voies génitales et
d’une poubelle pour les déchets. Les prélèvements se font comme suit : étiquetage
des écouvillons (noms, sexe âge, code, endroit à prélever, nom du prescripteur,
examen) ; prélèvement proprement dit après respect des conditions, se débarrasser
des déchets dans la poubelle indiquée puis acheminer directement l’échantillon à
l’unité d’analyses bactériologiques et enregistrer tous ces coordonnées dans le cahier
correspondant
 Un box pour prélèvement anatomo-pathologique, équipé d’un lit de prélèvement,
d’un lampadaire permettant d’éclairer les voies génitales et d’une poubelle pour les
déchets. Il est réservé au personnel d’anatomopathologie

 Deux box pour prélèvement sanguin, équipés d’un chariot conservant le matériel de
prélèvement à savoir : tubes en polyester, seringues, épicrâniens, corps de pompes
ou adaptateur vacutaner, garrot, alcool, plateau et portoir, coton, pansements,
aiguilles, un lit pour l’installation du patient et une chaise pour le préleveur. Le
prélèvement se fait comme suit : étiquetage des différents tubes en fonction des
examens (noms, sexe âge, code, nom du prescripteur, examen) ; prélèvement
proprement dit après respect des conditions, se débarrasser des déchets dans les
poubelles indiquées puis acheminer directement les échantillons dans les unités
d’analyses et enregistrer tous ces coordonnées dans le cahier correspondant. Pour ce
qui est des analyses de CERBA, respecter les conditions de tubes et suivre la
procédure de prélèvement normal.

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 Matériels de prélèvements

Il y a 6 types de tubes possibles identifiables par la couleur de leurs bouchons. La couleur


de chaque tube est normalisée. A HGOPED la norme qui a été retenue est la norme
américaine. Pour chaque tube il y a des caractéristiques différentes :

Flacon d’hémoculture

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Bouchon Caractéristique

Tube sec sans gel séparateur : permet l’obtention du sérum après coagulation.
 Ce tube permet la réalisation des certaines analyses Biochimique
(CRP, Créât, Transa, Urée…), Sérologie, Test immunohématologie…
 Ce tube est interdit pour tout examen d’hémostase et la cytologie
Rouge hématologique (NFS)
Tube Citrate de Sodium 9NC : anticoagulant réversible (chélateur de Ca++), il
entraine une décalcification du plasma.
 Ce tube est le seul milieu utilisable pour les bilans d’hémostase
(coagulation).
 Ce tube est inadapté à la plupart des autres dosages.
Bleu
Tube Héparine de Lithium : anticoagulant anti-thrombine. Il empêche la
transformation du fibrinogène en fibrine.
 Ce tube est essentiel pour la l’ionogramme.
Vert  Ce tube est interdit pour la NFS, TP, TCA
Tube EDTA K2 : anticoagulant irréversible – K2 (chélateur du Ca++). Il permet
la meilleure conservation des éléments figurés du sang.
- Ce tube est utilisé pour GS-Rh, NFS, Coombs, RAI,
Violet Immunophénotypage, GE (hémoparasite).

Tube Fluorure de Sodium : contient du fluor qui bloque les enzymes de la


glycolyse (dégradation du glucose).
- Ce tube est utilisé pour le dosage de la glycémie
Gris
Tube Citrate de Sodium 4NC : anticoagulant réversible (chélateur de Ca++).
Il permet la réalisation de vitesse de sédimentation directement sur le tube
selon la méthode référence de Westergreen
Noir - Ce tube est utilisé UNIQUEMENT pour la VS

 Conditions de stockage et modalités d’approvisionnement

Tout le matériel de prélèvement est stocké à température ambiante, à l’abri de la chaleur,


et de la lumière directe.
Le responsable de la salle de prélèvement gère ce matériel et veille :
- Au maintien permanant d’un stock en adéquation avec l’activité
- A la conformité du matériel en terme de dates de péremption, d’alertes de
matériovigilance.

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 Les étapes du déroulement du prélèvement sanguin

 Préparation pour le prélèvement


Le préleveur doit s’assurer de la conformité ou de l’optimisation des conditions de
prélèvement, à savoir :
- le prélèvement nécessitant d’être à jeun
- les procédures particulières de prélèvement
- Etiquetage des tubes (noms et prénoms, âge, sexe, code patient, examens,
nom du prescripteur) selon les examens demandé
- Accueillir et installer confortablement le malade
- Vérifier son matériel de prélèvement
- Informer et rassurer le patient sur la nature du prélèvement à effectuer

 Déroulement du prélèvement
La discrétion et la confidentialité sont nécessaires.
- Port de gants et mise en place du garrot.
Demander au malade de présenter ses bras afin de faire le choix du site de
prélèvement.
Le garrot mis en place ne doit être ni trop lâche, ni trop serre : il doit être
situé à 10cm approximativement au-dessus du site de ponction, en veillant
à ne pas pincer la peau et en recommandant au patient de serrer le poing,
puis de rester parfaitement immobile. Il ne doit pas être mis trop
longtemps (< 1 minute).
- Choix du site et du matériel de la ponction
Le prélèvement d’un échantillon de sang peut s’effectuer à partir de toutes
les veines superficielles du pli du coude, de l’avant-bras et du dos de la
main.
La recherche d’une veine pour effectuer la ponction veineuse s’effectue de
la manière suivante : le patient serre son poignet et son bras, tendu, et
incliné vers le bas.
Une veine normale est une veine facilement palpable, compacte, souple et
élastique.
- Désinfection du site de ponction
Imbiber en quantité suffisante le tampon de compresse stérile ou de coton
hydrophile stérile avec de l’alcool à 70°
Appliquer l’antiseptique avec le tampon à partir du centre du site de
ponction avec un mouvement circulaire vers l’extérieur sur une surface de
2cm et laisser sécher 30 s.

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- Décapuchonner l’aiguille montée au corps de pompe et l’introduire dans la


veine d’un coup sec.
- Stabiliser le système (aiguille -corps de pompe) dans la veine au moyen d’un
doigt de la main opposée à celle qui tient le tube à remplir
- Adapter successivement chaque tube de prélèvement dans l’ordre qui suit :
Flacons d’hémocultures, Tube Sec, Tube Citrate bleu, Tube Héparine,
Tube EDTA, Tube Fluoré, Tube Citrate noir pour remplissage jusqu’au trait
de jauge.
- Ordre de remplissage des tubes lors du prélèvement permet de réduire les
interférences liées à la ponction veineuse elle-même et d’éviter une
contamination d’un tube à l’autre du fait des additifs.
- Retirer délicatement le tube et agiter légèrement s’il contient un
anticoagulant pour homogénéisation et déposer le sur le portoir de tubes
- Demander au malade de relâcher le poing et défaire le garrot
- Retirer délicatement l’aiguille de la veine et poser une compresse sèche au site
de ponction
- Eliminer immédiatement l’aiguille dans un container pour déchets piquants
et tranchant près du préleveur
- Demander au malade de maintenir le coton en exerçant une pression sur le
site de ponction pour stopper l’écoulement sanguin
- Faire un pansement au bras du malade
- Le coton est éliminé dans un container spécial DASRI
- Acheminer les tubes dans chaque unité d’analyse spécifique

 Prélèvement des selles, de l’urine et du sperme

- Recueillir un échantillon de selle du matin dans le pot stérile fourni par le


laboratoire étiqueté au préalable. Déposer l’échantillon à l’unité de
parasitologie (coprologie) ou de bactériologie coproculture) selon la
prescription du patient.
- Le prélèvement de l’urine se fait selon le type d’examen demandé : ECBU,
Chimie 12 paramètres, Protéines de 24 heures, albumine/sucre
- La méthode de collecte du sperme c’est fait par masturbation en vidant la
vessie avant le prélèvement, d’effectuer un lavage soigneux des mains au savon
liquide, se laver très soigneusement le gland avec de l’eau et le savon liquide
ou avec une lingette désinfectante remise par le laboratoire, recueillir la
totalité de l’éjaculat dans le flacon stérile mis à disposition par le laboratoire.

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3. Unité d’Hématologie

L’hématologie est la spécialité médicale s’intéressant aux éléments constituant le sang


(globules rouges, globules blancs, les plaquettes…), la lymphe et les organes les secrétant
(moelle osseuse, rate, amygdales) ainsi qu’aux maladies qui y sont liées. Au laboratoire
de biologie clinique de HGOPED cette unité est réservée aux différents examens
hématologique à savoir : l’Hémogramme (NFS), la vitesse de sédimentation (VS), bilans
d’hémostase (TP/TCA), Groupage sanguins (ABO/Rhésus), Recherche d’anticorps
Irréguliers (RAI), Hémoparasites, Tests de Coombs Direct(TCD) et Indirect(TCI), Taux
de réticulocytes, Frottis Sanguin.

 Circuit des échantillons


La paillasse d’hématologie est divisée en plusieurs postes de travail, les échantillons sont
enregistrés dans le registre d’entrée d’hématologie, sur la fiche de paillasse journalière
(heure d’entré, code patient, nom et prénoms, âge, sexe, examens demandé, nom du
prescripteur) et est classés selon les examens demandé dans chaque poste.

POSTE 1
Enregistrement et tri des échantillons

Tubes EDTA Tubes Sec Tubes Citrates

NFS GS-RH RAI VS TP/TCA

Agitateur Centrifugation Monteur Centrifugation


Analyse

Poste 2 Poste 4
AUTOMATE Poste 5 Automate
Mindray BC-1800 Analyse Start Max
Pentra XL 80

Poste 3
Confection et Portoir du jour
Coloration

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 Les procédures des examens

 Hémogramme ou Numération Formule Sanguine (NFS)


L’hémogramme est le premier examen biologique utilisé pour dépister, explorer et suivre
la plupart des hémopathies. C’est l’examen le plus prescrit à HGOPED.
Il est réalisé à partir d’un échantillon de sang prélevé par ponction veineuse et recueilli
dans un tube contenant un anticoagulant sec de type EDTA.
La NFS est un examen automatisé. Il a pour but d’apporter des informations
quantitatives sur les cellules sanguines mais également des informations qualitatives.
Un frottis sanguin de bonne qualité sera réalisé à partir du tube pour l’identification
précise des cellules et de leurs anomalies éventuelles.

Les valeurs normales de l’hémogramme adopté par le laboratoire de l’HGOPED :

H = homme
F = femme

PRINCIPE
La numération formule sanguine consiste à compter les cellules du sang grâce à un
automate. Cet automate fonction selon la méthode Coulter. A chaque passage de cellule,
une différence de potentiel se crée. Chaque variation est comptée et le nombre de
variations correspond au nombre de cellules. La formule est établie grâce a une
différenciation chimique qui entre autre séparera les constituants basophile et
acidophile. Dans cette unité de laboratoire on utilise deux qualités d’automate le Pentra
XL 80 et le Mindray BC-1800. De plus la machine établi le dosage de l’hémoglobine et
détermine VGM, CCMH, TCMH.

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 L’utilisation de la machine
La tâche principale du technicien est de confirmer la bonne utilisation de l’appareil, pour
cela il doit effectuer un contrôle quotidien, tous les matins un contrôle est effectué pour
pouvoir confirmer le bon fonctionnement de la machine. L’analyse consiste à interpréter
les résultats bruts et de déterminer si une formule manuelle doit être établie (formule
leucocytaire, plaquettaire et érythrocytaires.

 Mode opératoire Pentra XL 80


Avant d’allumer la machine s’assurer de niveau des réactifs :
ABX CLEANER, ABX EOSINOFIX, ABX LYSE, ABX BASOLYSE 2, ABX DILUENT

- Allumer la machine en appuyant le bouton on/off de la machine


- Lancer la mise en route, vérifier niveau des réactifs, si tout est OK
- Passer les control en scannant les tubes
- Enregistrer l’échantillon : code patient, noms et prénoms, âge, sexe
- Valider l’enregistrement
- Bien homogénéiser l’échantillon et l’introduire dans le barillet
- Attendre la fin du comptage
- Reporter les résultats sur la fiche de paillasse journalière

 Mode opératoire Mindray BC-1800


Avant d’allumer la machine s’assurer de la quantité du réactif ainsi que du niveau de
déchet dans la poubelle liquide.
Allumer l’appareil en appuyant sur le bouton on/off ; l’écran affiche : initialisation du
fichier normal… test du matériel normal… test de tubulure normal
Si tout est ok vous pouvez commencer l’analyse des échantillons
- Appuyer [ID] pour saisir l’identité du patient : code, noms et prénoms, âge, sexe
- Appuyer sur [ENTRER] pour passer l’échantillon préalablement mélangé en
mode ouvert en introduisant la sonde dans l’échantillon et en appuyant
simultanément sur le bouton d’aspiration,
- Attendre la fin du comptage, reporter les résultats sur la fiche de paillasse
journalière.

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STAGE EFFECTUE AU LABORATOIRE DE BIOLOGIE CLINIQUE DE HGOPED DU 23-08-2021 AU 23-11-2021

 Formule leucocytaire
La numération permet de connaitre avec une certaine précision le nombre de cellule
dans le sang d’un patient. Les résultats du patient sont appréciés en comparaison des
valeurs de références. Cette comparaison permet de mettre en évidence parfois des
anomalies, tel que l’anémie ; inflammation ; leucémie.

 Confection et coloration de frottis sanguin


La confection d’un frottis sanguin consiste à étaler une goutte de sang uniforme sur une
lame de verre, de manière à obtenir une seule couche de cellules, qui après coloration et
fixation, pourra permettre l’étude morphologique des éléments figurés du sang, et de
déterminer s’il y a des anomalies de présence, d’aspect ou de nombre de cellule. Au
laboratoire la coloration de May Grunwald et Giemsa est utilisée.

PRINCIPE
Cette coloration repose sur l’affinité acide-base des colorants et des éléments cellulaires.
Il y a 2 colorants :
- le May Grunwald contenant un colorant acide l’éosine et un colorant basique le
bleu de méthylène
- Le Giemsa contenant aussi de l’éosine et un autre colorant basique l’azure de
méthyle
Les éléments cellulaires acides, seront colorés sélectivement par les colorants basiques.
Ces éléments sont qualifiés de basophiles (ADN, cytoplasmes des lymphocytes)
Les éléments cellulaires basiques, seront colorés sélectivement par les colorants acides.
Ces éléments sont qualifiés d’acidophiles ou d’éosinophiles (cytoplasmes d’hématies)
Les neutrophiles sont colorés à la fois par les colorants acides et basiques.
Dans un premier temps ce test permet d’établir manuellement la formule sanguine si
l’automate met des alarmes. Dans un deuxième temps ce test permet de vérifier la
cytologie.

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 Formule plaquettaire

Cette formule permet le comptage des cellules sur cellule de Malassez, ce dernier est une
lame pour observation microscopique. Elle est caractérisée par le quadrillage calibré
gravé à sa surface. Dans le cas où l’automate chargé du comptage des cellules ne
parviendrait pas à donner un résultat fiable, il faut que le technicien observe au
microscope un échantillon de sang. Grace au quadrillage le technicien va pouvoir
compter les cellules et comparer avec les résultats obtenus par l’automate.

 Paramètre érythrocytaire

La détermination du taux des réticulocytes permet d’indiquer le type d’anémie :


régénérative ou arégénérative.
 Réalisation et comptage
On utilise le Bleu de crésyl brillant à 10% comme réactif
- Mélanger à volume égal, le sang et le bleu de crésyl brillant dans un tube
- Incuber 20 min à 37° C, après incubation bien, mélanger
- Tirer un ou plusieurs frottis de ce mélange
- Laisser sécher et déposer une goutte d’huile à immersion sur le frottis
- Lire sous microscope à l’objectif 100x
- Compter la zone dans laquelle les érythrocytes sont bien étalés et ne se
chevauchent pas, et où la densité d’érythrocyte est à peu près la même
- Compter le nombre de réticulocyte dans 15 champs = R
- Compter le nombre total des hématies dans les mêmes champs = H
- Calculer le pourcentage des réticulocytes : %Ret = R/H x 100

 Vitesse de sédimentation

La mesure de la VS est un test non spécifique utilisé pour dépister une inflammation.
On mesure la vitesse à laquelle tombe les globules rouges en mm/h.
Quand il y a un processus d’inflammation, les protéines inflammatoires vont modifier la
viscosité du plasma, ce qui va entrainer l’augmentation de la VS.
Cet examen est réalisé sur un échantillon de sang total recueillit dans un tube spécifique
Tube Citrate de Sodium 4NC, ce tube est fixé verticalement sur un support à base
horizontale.

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 Tests de Coombs

Les tests de Coombs ou tests à l’anti globuline humaine sont des tests biologiques qui
permettent de révéler la présence ou l’absence d’anticorps spécifiques (IG) ou de
complexes complément-anticorps spécifiques fixées sur les antigènes correspondant à la
surface des hématies.

 Test de Coombs direct

PRINCIE
Ce test consiste en la révélation éventuelle de ces complexes immuns, par application
directe de l’AGH sur les hématies lavées du patient déjà sensibilisées in vivo.

MATERIELS
Hématies lavées de groupe O positif, diluer à 5% d’eau physiologique
Hématies lavées de groupe O négatif, diluer à 5% d’eau physiologique
Hématies lavées du patient, dilué à 5% d’eau physiologique
Le kit réactif AGH et le réactif IgG (RH1) tous disponible au réfrigérateur
Tubes à hémolyse, Bain marie, Microscope optique, Centrifugeuse, lames et lamelles

METHODE
Prendre 3 tubes à hémolyse étiqueter : Tube 1, Tube 2, Tube 3
Tube 1 : 50 µl de la solution GRL O+, ajouter 100 µl de l’anti-IGG (RH1)
Tube 2 : 50 µl de la solution GRL O-, ajouter 100 µl de l’anti-IGG (RH1)
Incuber le tube 1 et 2 pendant 10 minutes au bain marie à 37° C
Centrifuger le tube 1 et 2 à 2500trs/min pendant 1 minute et rejeter le surnageant
Ajouter 100 µl d’AGH dans les tubes 1 et 2
Tube 3 : 50 µl de la solution GRL du patient, ajouter 100 µl d’AGH
Centrifuger les trois tubes 1, 2 et 3 à 1200trs/min pendant 2 minutes
Observer à l’œil nu, si nécessaire déposer une goutte de chaque tube entre lame et
lamelle et observer à l’objectif 40x
La présence d’agglutination dans le Tube 3 présume le test de Coombs direct est Positif
L’absence d’agglutination dans le Tube 3 présume le test de Coombs direct est Négatif
Seule la présence d’agglutination dans le Tube 1 couplée de l’absence d’agglutination
dans le Tube 2 valide la réaction.

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 Bilan d’hémostase

 Taux de prothrombine (TP)

PRINCIPE
Le temps de Quick explore la voie extrinsèque (exogène) de la coagulation : c’est le seul
test à explorer cette voie. Il est allongé en cas de déficit constitutionnel ou acquis en
facteurs II, V, VII, X et/ou en fibrinogène.

METHODE
Le temps de Quick est le temps de coagulation d’un plasma citraté, recalcifié en présence
d’un réactif, la thromboplastine, qui active le X et, jouant le rôle d’activateur tissulaire
de la coagulation. La mesure s’effectue à l’aide d’appareils automatiques.
Pour la surveillance d’un traitement anticoagulant par les antivitamines K les résultats
du TP sont exprimés en INR.
L’INR est un rapport entre deux temps de coagulation (celui du plasma à tester et celui
d’un plasma témoin) élevé à la puissance ISI (indice de sensibilité international,
spécifique de la thromboplastine utilisée).

INR = (Temps du malade / Temps du témoin) ISI

 Temps de céphaline avec activateur

PRINCIPE
Le temps de céphaline-kaolin explore les facteurs plasmatiques de la voie intrinsèque
(endogène) et commune de la coagulation.

METHODE
Le TCA est le temps de coagulation d’un plasma déplaquetté par centrifugation auquel
est ajouté de la céphaline (substitut de l’apport plaquettaire), et un activateur de la phase
contact de la coagulation. La mesure est effectuée par des appareils automatiques.

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4. Unité de Banque de sang

Cette unité de laboratoire est chargée de la collecte, la préparation, la qualification


biologique, la gestion et la distribution du sang et de ses dérivés. Constituée de deux
grandes salles, une salle de prélèvement pour l’accueil de donneur, entretien pré-dons,
pré-tests et prélèvement des donneurs, et une salle technique pour la préparation,
qualification biologique des poches de sang et distribution des produits sanguins labiles.

 Les activités quotidiennes


En début de journée
- Nettoyer et désinfecter la paillasse, les fauteuils selon la procédure
- Apprêter les consommables et vérifier s’ils seront suffisant pour la journée au cas
contraire solliciter un approvisionnement
- Tracer les registres
- Accueillir et enregistrer les donneurs selon l’ordre d’arriver
- Prise de paramètres
- Prélever les donneurs sélectionnés
- Surveiller le donneur pendant le prélèvement

Apres midi
- Faire les groupages sanguins rhésus des poches de sang prélevé
- Faire le phénotypage des poches
- Préparation des produits sanguins labiles
- Effectuer la qualification biologique des poches
- Faire état et ranger des poches qualifiées dans le réfrigérateur de poches qualifiées
- Enregistrer les informations des poches dans les registres
- Nettoyer la paillasse

 Les matériels
- Hémoglobinomètre
- Réfrigérateurs
- Scelleuse
- Poches de sang, tube sec, tube EDTA
- Kit de réactifs pour groupage sanguin rhésus / phénotype-kell
- Bandelettes TDR (HIV, HCV, AgHBs)
- Kit de réactifs (HCV, HIV, AgHBs, TPHA)
- Micropipettes, embouts, portoir,
- Aiguilles, garrots, gants,
- Les registres
- Agitateur poche de sang
- Alcool à 70°, Sparadrap
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 Fonctionnement
L’unité de banque de sang de laboratoire de HGOPED est divisée en deux salles : salle
de prélèvement et salle technique. Les salles sont divisées en plusieurs postes de travail
permettant son bon fonctionnement.

 POSTE I
Ce poste s’occupe de l’accueil de donneurs, d’enregistrement, pré-dons, tests-dons.
- Accueillir le donneur et savoir de sa présence à la banque de sang
- Demander au donneur sa carte d’identité nationale
- Si une femme demander date de la dernière règle
- Enregistrer le donneur dans le registre sélection de donneurs (heure, noms et
prénoms, sexe, heure du dernier repas, date du dernier don, taille)
- Lui donner une fiche individuelle du donneur de sang pour remplir
- Faire les pré-tests : taux hémoglobine, TDR HIV
- Envoyer le donneur avec sa fiche chez le médecin consultant
- Le médecin établit éligibilité ou non du donneur
- Si le donneur est éligible, installer le donneur au poste 2

 POSTE II
Ce poste s’occupe du prélèvement de donneur éligible
- Enregistrer le donneur dans le registre de prélèvement
- Attribuer un code au donneur jour/mois/année/numéro d’ordre
- Etiqueter un tube sec, un tube EDTA et la poche de sang avec le code du donneur
- Installer confortablement le donneur sur le fauteuil
- Lui donner 2 gobelets de l’eau à boire
- Allumer l’agitateur de poche et placer la poche principale sur l’agitateur de poche
- Demander au donneur de fermer son poignet
- Placer le garrot à 10 cm du site de ponction veineuse
- Désinfecter le site de ponction veineuse avec du coton imbibé d’alcool à 70° et du
dakin
- Fermer tous les clamps des poches de sang
- Retirer le protecteur d’aiguille avec un mouvement de rotation et effectuer la
ponction veineuse, ne pas toucher l’aiguille
- Fixer la tubulure au bras du donneur en utilisant le sparadrap
- Ouvrer le clamp de la tubulure d’échantillonnage et fermer après son remplissage
- Casser le connecteur de la tubulure en pliant d’avant en arrière, puis ouvrer le
clamp de la poche principale
- Introduire successivement le tube sec et le tube EDTA dans la poche
d’échantillonnage pour prélever la quantité recommandé
- Une fois prélever, fermer le clamp de la poche d’échantillonnage
- Vérifier que le sang total se mélange à l’anticoagulant au cours du prélèvement
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- Dès que la poche principale est remplit, fermer le clamp de la poche principale et
glisser le PAU le plus près possible de l’aiguille.
- Détacher le garrot, d’une main prenez le coton sec appliquer sur le site de la
ponction et demander au donneur d’appuyer le coton
- De l’autre main tenir l’embase de l’aiguille, tirer délicatement et d’un coup sec
l’aiguille du bras du donneur
- Immédiatement après le retrait de l’aiguille, sceller la tubulure de la poche
principale et la tubulure de l’aiguille
- Couper l’aiguille et la poche d’échantillonnage
- Déposer l’unité de sang total et les échantillons (tubes sec et EDTA) au poste III

 POSTE III
Dans ce poste le personnel qualifié de banque de sang effectue entre autre les taches
suivant :
- Apprêter la zone de travail
- Ressortir les kits de réfrigérateur et ramener à la température du laboratoire
- Etablir la fiche de paillasse journalière
- Etablir le cahier des tests ELISA
- Etiqueter les tubes à hémolyses pour le groupage sanguin/rhésus
- Faire le groupage sanguin/rhésus et phénotypage selon les procédures du
laboratoire
- Réaliser les tests ELISA (HIV 1 et 2, HCV, AgHBs, TPHA)
- Préparer les produits sanguins labiles selon les procédures du laboratoire

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LES ANALYSES

 Le Groupage Sanguin/Rhésus et Phénotype Rhésus-kell

PRINCIPE :
La détermination d’un groupe sanguin ABO comporte deux épreuves : une épreuve
globulaire (Beth-Vincent) qui permet de rechercher les antigènes portés par les globules
rouges du sujet testé à l’aide d’antisérums anti-A et anti-B, et une épreuve sérique
(Simonin) qui met en évidence les anticorps présents dans le sérum à l’aide de globules
rouges de phénotype connu.
Le principe et la technique de détermination du système rhésus et phénotype-kell sont
les mêmes que pour le système ABO. Cependant, les réactifs sont différents.

Principaux résultats du groupage dans le système ABO/Rh-D

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 Préparation des produits sanguins labiles


Les produits sanguins labiles sont obtenus à partir d’un don de sang total et destiné à
être transfusé à un patient. Au laboratoire de l’HGOPED, les PSL proviennent de
donneurs de sangs familiaux et bénévoles. Il existe entre autre concentré globulaire
rouge, plasma frais congelé, concentré plaquettaire standard. Tous ces composants
peuvent être obtenus à partir du sang total après centrifugation puis séparation. Ceci
apporte un gain en sécurité, en rentabilité et en efficacité.

 La centrifugation
La séparation du sang total nécessite une centrifugation en fonction des composés qu’on
désire obtenir. Le résultat de la séparation dépend de la viscosité du plasma, la taille, la
forme et la densité des cellules, ainsi que de la température du milieu lors de la
centrifugation.

 La décantation
Elle consiste à la séparation physique du plasma surnageant des cellules après la
centrifugation à l’aide d’une presse manuelle qui élimine le plasma dans un conteneur
ou dans une poche satellite et conserve les cellules dans la poche d’origine. La
manipulation est rapide et facile mais nécessite une dextérité relative pour éviter le
mélange des composants.

 Mode opératoire de préparation des PSL


 Préparation du CGR
PRINCIPE
Pour préparer ce composant sanguin, on le sépare de l’unité de sang total après
centrifugation et décantation dans une poche pouvant contenir une solution additive.

MATERIELS
Centrifugeuse, Scelleuse, Presse manuelle

METHODE
- Centrifuger la poche de sang en équilibrant la centrifugeuse
- Retirer délicatement la poche sans le secouer
- Décanter le plasma à l’aide de la presse manuelle
- Pincer la poche du plasma
- Mélanger le CGR avec l’anticoagulant
- Stripper et Sceller la tubulure de la poche du CGR à plusieurs endroits
- Libérer la poche
- Etiqueter, enregistrer la poche
- Conserver la poche du CGR entre 2°C et 6°C de 35jrs à 42jrs selon l’anticoagulant

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 Préparation du PFC
La technique et le principe sont les mêmes que pour le CGR mais la conservation du
plasma frais congelé est de -50°C à -80°C pendant au maximum deux ans.

 Tests de compatibilité et délivrance des unités de soins


Avant de délivrer le produit, le personnel du laboratoire effectue un certain nombre de
tests de compatibilité entre le donneur et le receveur.

- Les tests de compatibilité

Les règles de compatibilité


Les règles de compatibilité transfusionnelle dans le système ABO doivent respecter les
schémas ci-après :

PRINCIPE
Une épreuve de compatibilité consiste à mettre en évidence des globules rouges du
donneur en présence du sérum du receveur ou les globules rouges du receveur en
présence du sérum du donneur.
- Si le résultat des tests de compatibilité est négatif (absence d’agglutination) : Les
GR sont déclarés compatibles pour le receveur. Le test n’a pas permis de mettre
en évidence des anticorps du receveur dirigés contre les GR du donneur.
- Si le résultat de tests est positif (présence d’agglutination) : les GR du donneur
sont déclarés incompatibles vis-à-vis du sérum du receveur. Le test a permis de
mettre en évidence des anticorps du receveur dirigés contre les GR du donneur.
Il faut refaire le test avec une autre poche.

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- Les tests de diagnostic rapide (TDR)


Les TDR sont des tests immuno-chromatographique : AcHCV, HIV, AgHBs

PREINCIPE
Le test de diagnostic rapide est un test qualitatif de détection rapide de l’anticorps
éventuellement présent dans le sang du sujet avec une particule antigénique le plus
souvent recombinante, conjuguée et fixé sur une bandelette de chromatographie. La
détection combinée de l’antigène et de l’anticorps est possible. La membrane immuno-
chromatographique poreuse porte sur toute sa longueur des antigènes recombinants
conjugués au révélateur. La bande porte également ces antigènes conjugués. La bande
témoin porte des anticorps spécifiques des antigènes correspondants. La migration des
complexes formés par l’anticorps du malade, l’antigène recombinant et le révélateur
développe une couleur visible à l’œil nu.

MATERIELS
Echantillon du donneur (sérum), Bandelette, Tampon réactif, pipette.

METHODE
Déposer une goutte de sérum ou de sang total dans un orifice à l’extrémité de la
bandelette, attendre au moins 3 minutes pour observer la migration. La migration s’est
bien effectuée quand la bande témoin positif est clairement colorée en rouge.

RESULTAT
S’il apparait une bande supplémentaire sur la zone de révélation de la réaction, le test
est : réactif
Si en cas d’absence totale de la bande supplémentaire sur la zone de révélation, le test
est dit : non réactif

Dépôt d’échantillon Bande Contrôle

Bande Positif
Sens de Migration

Dépôt d’échantillon Bande Contrôle

Absence de Bande

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IV. CONTROL QUALITE

PRINCIPE
Dans le domaine de la biologie médicale, la qualité est une adéquation entre les moyens
mis en œuvre et l’information attendue par le médecin prescripteur ainsi que la réponse
aux attentes du patient. Les dispositions à prendre s’appliquant depuis l’accueil du
patient jusqu’au rendu des résultats. Ainsi, l’assurance de la qualité nous permet de
maîtriser l’organisation des tâches conduisant à la qualité. Elle couvre notamment les
étapes pré-analytique, analytique et post analytique. Pour veiller à l’application de la
qualité au sein du laboratoire, un contrôle de qualité externe et interne doit être
régulièrement effectué.

1. Control qualité interne

Le contrôle de qualité interne est l’ensemble des procédures mises en œuvre dans un
laboratoire en vue de garantir la qualité des résultats d’analyse au fur et à mesure de
l’exécution de celle-ci. Il comprend :
- Les instructions relatives à la préparation du patient et aux modalités de prélèvement
- Le choix des tubes ou pots destinés à recevoir l’échantillon
- La conservation des échantillons,
- L’appareillage (maintenance, calibrage, étalonnage),
- Les réactifs (préparation, étiquetage, utilisation, conservation, péremption),
- Préparation des contrôles,
- Réalisation de l’analyse avec description de la méthode utilisée,
- Règles de validation, de transmission des résultats,
- Entretien des locaux et du matériel,
- La gestion du système informatique,
- L’assurance qualité.
Tout résultat n’est remis au patient qu’après validation technique sur la paillasse par le
technicien et une validation biologique par le médecin biologiste.

2. Control qualité externe

Le contrôle de qualité externe est un contrôle effectué par un organisme extérieur (le
comité de contrôle d’éthique des laboratoires de biologie clinique) qui vérifie la qualité
des résultats fournis par un laboratoire. Ce contrôle rétrospectif permet une
confrontation inter laboratoire en vue d’évaluer et d’améliorer la qualité du travail de
l’ensemble des participants. L’organisme extérieur adresse les mêmes échantillons aux
différents laboratoires, rassemble les résultats obtenus, refait l’analyse et transmet les
résultats avec commentaires aux laboratoires participants.

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V. BILAN
1. Personnel et relationnel

D’un point de vue personnel le stage m’a intéresser, j’ai pu découvrir le travail d’un
laboratoire de biologie clinique et les responsabilités qui incombent à un technicien. Je
suis aussi ravi que toutes les personnes du laboratoire, m’aient accordé du temps pour
m’apprendre et m’expliquer le fonctionnement des machines, j’ai pu aussi m’épanouir
dans une grande liberté et même utiliser le matériel du laboratoire pour m’exercer. Je
voudrais insister sur le relationnel entre les différents personnes du laboratoire, en effet
dans ce travail le bon fonctionnement est dû essentiellement à la communication.

2. Découvertes du monde du travail

Ce stage est le premier que j’ai fait, je n’avais jamais découvert le monde du médical. J’ai
découvert un travail enrichissant basé sur l’utilisation de machines, le travail de
technicien est de vérifier l’état de fonctionnement de ces machines mais aussi de faire
un premier diagnostic pour le biologiste. Le travail de technicien réclame rigueur,
précision et une prise d’initiative constante. Dans le cadre de mon stage j’ai pu
m’entretenir avec plusieurs techniciens et j’ai pu avoir plus de précisions sur le métier
de technicien, malheureusement ce métier est « voué à disparaître », en effet avec
l’automatisation de tous les tests de laboratoire il n’y aura besoin que d’un technicien
pour vérifier le bon fonctionnement des machines et un biologiste pour valider les
résultats. Le nouveau rôle du technicien sera d’assurer le prélèvement sanguin, le pré et
le post analytique.

3. Les connaissances théoriques et pratiques

Cette période de stage que j’ai effectué au laboratoire de biologie clinique de HGOPED
m’a offert la possibilité de renforcer et de développer mes connaissances théoriques et
pratiques.
Ces 3 mois de stage m’ont beaucoup apporté tant sur le plan personnel que
professionnel. J’ai apprécié tout particulièrement la confiance et l’autonomie que m’ont
laissée l’unité d’hématologie et l’unité de banque de sang sur les différentes tâches
effectuées. Toutes les difficultés que j’ai rencontrées ont pu être résolues avec l’aide
précieuse de mes chefs de paillasse. J’ai eu la chance de travailler avec des personnes très
intéressantes et sympathiques, ce qui m’a permis de m’intégrer facilement dans l’équipe
et de me trouver dans des très bonnes conditions pour approfondir mes connaissances
et en acquérir de nouvelles notamment dans le domaine de la transfusion sanguine.

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CONCLUSION

En somme, je peux affirmer que, ce stage effectué dans le laboratoire de biologie clinique
de l’HGOPED m’a permis d’acquérir beaucoup plus de connaissance et d’explorer de
nouvelles techniques dans le domaine de l’immunologie et de l’hématologie, de concilier
la théorique et la pratique, de toucher du doigt les réalités du terrain du secteur médical,
de pouvoir mettre sur pied des procédures d’analyse et d’intégrer les notions de qualité,
de métrologie et de gestion des déchets.

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Reference

- Rapport de stage en entreprise Laboratoire d'analyse médicale


- Rapport de stage effectué au laboratoire de biologie clinique de l’hôpital gynécoobstétrique et
pédiatrique de Douala du 10 Mars au 10 Décembre 2018
- Procédures et mode opératoires du laboratoire
- www.hgoped.cm
- Manuel pratique du laboratoire de transfusion sanguine dans les pays en développement
- Manuel de prélèvement INSTITUT PASTEUR DU MAROC CENTRE DE BIOLOGIE MEDICALE
- Item : 316 : Hémogramme
- Manuel d’utilisation du MINDRAY BC 1800
- Manuel d’utilisation du Pentra XL 80

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Quelques machines du laboratoire

Automate de bilan d’hémostase Automate d’hémogramme Microscope optique


Start Max mindray BC-1800

Automate d’hémogramme
ABX Pentra XL 80 Micropipettes
Réfrigérateur
poches de sang
qualifiées

Rhésuscope, HémaTest (VS), Micropipettes


Réfrigérateur

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