Labo DiMeD PROCEDURE BACTERIOLOGIQUE : Référence : Fiche technique

ECBU+ATB OMS
V2 du 24 Juin 2022 Page : 1-2
1 - Objectifs
Déterminer la présence ou non d’une infection urinaire chez un patient
2 – CONTEXTE ET DOMAINE D’APPLICATION
Cette procédure s’applique uniquement au laboratoire en section Bactériologie pour des patients suite
à une prescription médicale
3 – RESPONSABILITE
DG – RT – RQ - Biologistes
5 – ABREVIATIONS
DG : Directeur General
RT : Responsable Technique
RQ : Responsable Qualité
6 – REFERENCES
Norme ISO 9001 V2015
7 – MODE OPERATOIRE

Examen Cytobactériologique des Urines + Antibiogramme

7.1-Prélèvement:
Cet examen se pratique sur les urines, avec un minimum de respect de certaines conditions tant
bien chez la femme que chez l’homme lors du prélèvement.
Pour cela;
 Les urines doivent être celles du matin et ayant séjourné au moins 04heures dans la vessie.
 Laisser tomber les premiers jets et recueillir uniquement les urines du milieu de jet dans le
flacon stérile remis tout en évitant que ce dernier touche au sexe.
 Apporter l’échantillon au laboratoire le plus tôt possible après le prélèvement.
7.2-Manipulation:
 Faire l’examen macroscopique des urines
 Prélever 10ml des urines bien mélangées dans un tube à centrifuger
 Centrifuger à vitesse moyenne (1000trs/min) pendant 10 minutes.
 Renverser le surnageant et apprécier le culot de centrifugation (culot infime, peu abondant,
ou abondant)
 Examiner entre lame et lamelles le culot de centrifugation (noter les éléments observés et les
quantifier).
 Colorer par la méthode de Gram le frottis séché et fixé à la flamme du culot urinaire
 Ensemencer systématiquement l’urine sur les plaques de gélose EMB, CLED Chapman,
Hectoen/SS et au sang frais ou cuit (pour les bactéries exigeantes) après coloration.
 Incuber à l’étuve bactériologique à 37o C pendant 18-24heures
 Sortir les boites et les lire
 Purifier les souches si nécessaire
 Faire l’identification du (des) germe(s) ayant poussé. En cas de présence de champignons,
l’échantillon est envoyé dans un laboratoire spécialisé (Laboratoire partenaire) pour la
culture fongique et l’antifongigramme.
 Réaliser l’antibiogramme sur la gélose MH et incuber les boites à 37 oC pendant 18 -
24heures
 Sortir les boites et mesurer les diamètres des zones d’inhibition pour chaque antibiotique
 Déclarer la souche bactérienne sensible, intermédiaire ou résistante à chacun de ces
antibiotiques suivant les instructions du fabricant inscrites sur l’abaque de lecture.
Sensibilité aux antibiotiques (antibiogramme)
Elle se fait sur le milieu nutritif de tonicité normale: la gélose de Mueller Hinton pour les
bactéries non exigeantes; enrichie au sang pour celles exigeantes.
Les conditions de réalisation sont décrites à la partie ̎ Pannel antibiogramme Labo DiMed,
2019 ̎ ainsi que les antibiotiques à tester.

8– DOCUMENT DE REFERENCE
Manuel des techniciens de laboratoire médical (OMS)
Rédaction / Biologistes Vérification Approbation
Leocadie DOKOUI
RQ : Fridos KOUDJALE DG : AKOUETE E. Coffi RT : Pr ZOHOUN S. Isidore
Labo DiMeD PROCEDURE BACTERIOLOGIQUE : Référence : Fiche technique
ECB du Pus, LCR, Liquide d’ascite, OMS
V2 du 24 Juin 2022 articulaire, synovial et pleural +ATB Page : 1 - 2
1 - Objectifs
Identifier le germe et déterminer l’antibiotique approprié pour traiter l’infection du patient
2 – CONTEXTE ET DOMAINE D’APPLICATION
Cette procédure s’applique uniquement au laboratoire en section Bactériologie pour des patients suite
à une prescription médicale
3 – RESPONSABILITE
DG – RT – RQ - Biologistes
5 – ABREVIATIONS
DG : Directeur General
RT : Responsable Technique
RQ : Responsable Qualité
6 – REFERENCES
Norme ISO 9001 V2015
7 – MODE OPERATOIRE

2. Examen Cyto-Bactériologique du pus, Liquide Céphalo Rachidien, du liquide

d’ascite, du liquide articulaire, du liquide synovial et du liquide pleural suivis
d’antibiogramme pour chaque)
2.1- Prélèvements
Il est souvent réalisé par les cliniciens surtout la ponction lombaire. Transporter
immédiatement le prélèvement au laboratoire
2.2- Manipulation
Examen macroscopique
- Noter la consistance du pus, du liquide:
 purulent
 séreux ou citrin : exsudat, transsudat
- Noter la couleur du pus: jaunâtre, bleue, chocolat etc.
Examen microscopique
Noter et quantifier les éléments observés sur la préparation entre lame et lamelles (état frais)
- Confectioner un frottis mince,
- Colorer par la méthode de Gram,
- Colorer au Giemsa en cas de LCR troubles pour identifier le(s) type(s) de leucocytes
- Noter la morphologie des bactéries ainsi que leur Gram
- Apprécier la:
 qualité de la flore : mono microbienne ou poly microbienne
 quantité de la flore : abondance de germes
 Culture
- Ensemencer :
 Les géloses CLED, EMB, Chapman
 La gélose au sang frais ou cuit (pour les bactéries exigeantes),
- Incuber à 37o C en aérobiose/anaérobiose selon les résultats de la coloration pendant
18-24 heures
Identification: Une fois les colonies isolées, l’identification est identique à celle
bactériologique classique.

Antibiogramme: Il se fait en fonction de la bactérie identifiée. Cf ̎ Pannel

antibigramme Labo DiMed,2019 ̎

8– DOCUMENT DE REFERENCE

Fiches techniques : Cours et Manuel des techniciens de laboratoire médical

Rédaction / Biologistes Vérification Approbation

Leocadie DOKOUI
RQ : Fridos KOUDJALE DG : AKOUETE E. Coffi RT : Pr ZOHOUN S. Isidore
Labo DiMeD PROCEDURE BACTERIOLOGIQUE : Référence : Fiche technique
ECB du Pus Urétral +ATB OMS
V2 du 24 Juin 2022 Page : 1 - 2
1 - Objectifs
Identifier le germe et déterminer l’antibiotique approprié pour traiter l’infection du patient
2 – CONTEXTE ET DOMAINE D’APPLICATION
Cette procédure s’applique uniquement au laboratoire en section Bactériologie pour des patients suite
à une prescription médicale
3 – RESPONSABILITE
DG – RT – RQ - Biologistes
5 – ABREVIATIONS
DG : Directeur General
RT : Responsable Technique
RQ : Responsable Qualité
6 – REFERENCES
Norme ISO 9001 V2015
7 – MODE OPERATOIRE

1. Examen cytobactériologique du Pus Urétral + Antibiogramme

Se renseigner sur les conditions d’apparition des brûlures, écoulement (récurrence) et
surtout l’antibiothérapie récente.

1.1 Prélèvement;
- En cas d’écoulement, prélever le pus avec deux écouvillons stériles;
- En absence d’écoulement, imbiber légèrement l’écouvillon d’eau
physiologique stérile et l’introduire sur environ 1cm dans l’urètre sans blesser
le patient.
1.2 Manipulation: Elle est immediate
. Examen macroscopique
- noter la consistance du pus, du liquide:
- noter la couleur du pus: jaunâtre, bleue, chocolat etc.
. Examen microscopique
- noter et quantifier les éléments observés sur la préparation entre lame et lamelles (état
frais)
- Confectioner un frottis mince,
- Colorer par la méthode de Gram,
- Noter la morphologie des bactéries ainsi que leur Gram (rechercher surtout les
diplocoques à l’intérieur des leucocytes ou près des leucocytes altérés)
- Apprécier la:
 qualité de la flore : mono microbienne ou poly microbienne
  quantité de la flore : abondance de germes
Culture. Ensemencer :
La gélose au sang cuit les géloses CLED, EMB, Chapman
- Incuber à 37o C en atmosphère riche en CO2 pendant 18-24 heures (peut aller à 48 heures pour
une bonne visibilité des colonies)
Identification: Une fois les colonies isolées, rechercher les caractères biochimiques et
identifier donc la (les) bactérie (s).

Antibiogramme: Il se fait en fonction de la bactérie identifiée. Cf ̎ Pannel antibigramme Labo

DiMed, 2019 ̎

8– DOCUMENT DE REFERENCE

Fiches techniques : Cours et Manuel des techniciens de laboratoire médical

Rédaction / Biologistes Vérification Approbation
Leocadie DOKOUI
RQ : Fridos KOUDJALE DG : AKOUETE E. Coffi RT : Pr ZOHOUN S. Isidore
 Labo DiMeD PROCEDURE BACTERIOLOGIQUE : Référence : Fiche technique
ECB du Prélèvement Vaginal +ATB OMS
V1 du 2 Décembre 2022 Page : 1 - 2
1 - Objectifs
Identifier le germe et déterminer l’antibiotique approprié pour traiter l’infection du patient
2 – CONTEXTE ET DOMAINE D’APPLICATION
Cette procédure s’applique uniquement au laboratoire en section Bactériologie pour des patients suite
à une prescription médicale
3 – RESPONSABILITE
DG – RT – RQ - Biologistes
5 – ABREVIATIONS
DG : Directeur General
RT : Responsable Technique
RQ : Responsable Qualité
6 – REFERENCES
Norme ISO 9001 V2015
7 – MODE OPERATOIRE

1- Examen du Prélèvement Vaginal +Antibiogramme (PV+ATB

1.1 Prélèvement:
Il se fait sur deux écouvillons: un consacré à l’endocol et l’autre à l’exocol
- Procedure:
 Etaler un drap sur la table gynécologique;

 Installer la patiente sur la table, en position gynécologique;

 Eclairer la Lampe d’examen;

 Se laver les mains et porter les gants;

 Placer le spéculum stérile dans le vagin de sorte que le col de l’utérus soit
visible;

 A l’aide du premier écouvillon, prélever les secrétions au niveau du cul de sac

postérieur (ex1.2ocol);

 Prélever ensuite l’endocol utérin en faisant de petites rotations avec l’autre

écouvillon;

 Mettre les écouvillons dans leurs étuis respectifs ;

  Retirer le speculum ;

 Noter le pH

 Apprécier l’aspect, l’abondance, la couleur et l’odeur si possible des

leucorrhées (examen macroscopique)

1.2 Manipulation
 Faire l’état frais et la coloration de Gram
 Ensemencer les plaques des géloses au sang, EMB, Chapman, CLED, SS/Hectoen et BEA.
 Mettre les boites à l’étuve pendant 18-24heures à 37oC en anaérobiose
 Sortir les boites et faire la lecture puis l’identification.
 Faire l’antibiogramme des germes qui ont poussé.

Antibiogramme: Il se fait en fonction de la bactérie identifiée. Cf ̎ Pannel antibiogramme

Labo DiMed, 2019 ̎
8– DOCUMENT DE REFERENCE

Fiches techniques : Cours et Manuel des techniciens de laboratoire médical

Rédaction / Biologistes Vérification Approbation
Leocadie DOKOUI
RQ : Fridos KOUDJALE DG : AKOUETE E. Coffi RT : Pr ZOHOUN S. Isidore
Labo DiMeD PROCEDURE BACTERIOLOGIQUE : Référence : Fiche technique
Spermoculture +ATB OMS
V2 du 24 Juin 2022 Page : 1 - 2
1 - Objectifs
Identifier le germe et déterminer l’antibiotique approprié pour traiter l’infection dans le sperme du
patient
2 – CONTEXTE ET DOMAINE D’APPLICATION
Cette procédure s’applique uniquement au laboratoire en section Bactériologie pour des patients suite
à une prescription médicale
3 – RESPONSABILITE
DG – RT – RQ - Biologistes
5 – ABREVIATIONS
DG : Directeur General
RT : Responsable Technique
RQ : Responsable Qualité
6 – REFERENCES
Norme ISO 9001 V2015
7– MODE OPERATOIRE

1. Spermoculture
1.1 Le prélèvement
La collecte du sperme se fait soit par masturbation soit par coït interrompu
1.2 Manipulation:
Examen macroscopique:
Noter la couleur du sperme, sa viscosité.
Etat frais: Noter
 La présence ou non des spermatozoïdes, leur quantité et mobilité;
 La présence et éventuellement la quantité des leucocytes;
 Les cellules épithéliales
 Les cellules rondes
Etat coloré au Gram
Colorer par la technique de Gram le frottis mince séché et fixé du sperme.
Culture
 Ensemencer les quatre milieux EMB, Chapman, CLED, SS/Hectoen et BEA.
et surtout la gélose au sang
Identification
Rechercher les caractères biochimiques de la bactérie ayant poussé et lui donner donc un nom
Antibiogramme: Il se fait en fonction de la bactérie identifiée. Cf ̎ Pannel antibiogramme Labo
DiMed,2019 ̎

8– DOCUMENT DE REFERENCE

Fiches techniques : Cours et Manuel des techniciens de laboratoire médical

Rédaction / Biologistes Vérification Approbation

Leocadie DOKOUI
RQ : Fridos KOUDJALE DG : AKOUETE E. Coffi RT : Pr ZOHOUN S. Isidore
 Labo DiMeD PROCEDURE BACTERIOLOGIQUE : Référence : Fiche technique
Coproculture +ATB OMS
V2 du 24 Décembre 2022 Page : 1 - 2
1 - Objectifs
Rechercher les bactéries pathogènes dans les selles du patient
2 – CONTEXTE ET DOMAINE D’APPLICATION
Cette procédure s’applique uniquement au laboratoire en section Bactériologie pour des patients suite
à une prescription médicale
Cet examen consiste à cultiver sur des milieux sélectifs les matières fécales, afin d’isoler des germes
pathogènes, responsables de diarrhées infectieuses. La coproculture permet d'isoler notamment : les
salmonella, les Yersinia, les Shigella, les Campylobacter, Pseudomonas aeruginosa, vibrion
cholérique, Escherichia coli entéropathogène.
3 – RESPONSABILITE
DG – RT – RQ - Biologistes
5 – ABREVIATIONS
DG : Directeur General
RT : Responsable Technique
RQ : Responsable Qualité
6 – REFERENCES
Norme ISO 9001 V2015
7– MODE OPERATOIRE

7.1 Coproculture + ATB

Le prélèvement des selles
Il est réalisé par le patient dans un récipient stérile ou dans un pot à coprologie. Des gants sont
généralement fournis. Il doit être ensuite transporté rapidement au laboratoire (ou gardé au
frais en attendant).

Chez le nourrisson, le prélèvement se fera directement dans la couche. Un écouvillonnage

rectal peut également être pratiqué.

Enfin, on notera la présence éventuelle de sang, de glaire. La consistance des selles sera
également notée.

7.2 Manipulation:
Examen macroscopique (voir procédure Coprologie parasitaire)
Etat coloré au Gram
Colorer par la technique de Gram l’étalement de selles prélevées sur lame.
7.3 Culture
Ensemencer les milieux EMB et TCBS
Identification
Rechercher les caractères biochimiques de la bactérie ayant poussé et lui donner donc un nom
Antibiogramme: Il se fait en fonction de la bactérie identifiée. Cf ̎ Pannel antibiogramme Labo
DiMed,2019 ̎

8– DOCUMENT DE REFERENCE

Fiches techniques : Cours et Manuel des techniciens de laboratoire médical

Rédaction / Biologistes Vérification Approbation
Leocadie DOKOUI
RQ : Fridos KOUDJALE DG : AKOUETE E. Coffi RT : Pr ZOHOUN S. Isidore