Transfusion Clinique et Biologique 13 (2006) 271–277

MISE AU POINT

Maîtrise des tolérances métrologiques :

application à la recherche des anticorps
anti-érythrocytaires (RAI) en test indirect à
l’antiglobuline (TIA) et au groupage sanguin ABO
par les procédés
de filtration et en microplaque
Validation of antibody screening by indirect antigloblin test and
ABO blood typing by filtration and microplate techniques:
assessment of robustness

L. Mannessier a,*, M. Delamaire b, O. Bouix c, C. Krause d, F. Roubinet e

a
Établissement français du sang Nord-de-France, site de Lille, 96, rue de Jemmapes, 59012 Lille cedex, France
b
EFS Bretagne, site de Rennes, France
c
EFS Pyrénées-Méditerranée, site de Nîmes, France
d
EFS Bourgogne-Franche-Comté, site de Dijon, France
e
EFS Centre-Atlantique, site de Tours, France

Disponible sur internet le 25 septembre 2006

Résumé

Dans le cadre de l’accréditation Cofrac, il convient de valider les méthodes utilisées en immunohématologie. Cela
impose de connaître les tolérances métrologiques des différentes techniques. Deux études multicentriques,
concernant la recherche d’anticorps antiérythrocytaires (RAI) en test indirect à l’antiglobuline et le groupage ABO en
technique manuelle, ont été réalisées pour définir les écarts maximums tolérables vis-à-vis des températures et
durée d’incubation ainsi que des volumes de réactants. Ces études ont nécessité l’emploi de matériels étalonnés
Cofrac (incubateur, thermomètre, pipettes...). La RAI a été réalisée vis-à-vis de différents supports de filtration ID
Diamed, Biovue Ortho and Scangel Biorad, avec la même gamme d’hématies test, un standard anti-RH1 calibré à
20 ng, un témoin positif anti-KEL1 et un témoin négatif. L’épreuve plasmatique du groupage ABO a été réalisée en
filtration et en microplaque avec les mêmes hématies test A1 et B. Ces deux études appliquées à la RAI et au groupage
ABO montrent que les résultats sont strictement identiques quelles que soient les combinaisons des quatre
paramètres critiques précités et permettent de définir les écarts maximums tolérables (EMT).
© 2006 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.

Abstract

According to requirements of the French Committee for Accreditation (Cofrac), it is essential to use validated and
standardised methods in Immunohematology. This imposes first the knowledge of metrological tolerances for all the
technics. Two multicenter studies were carried out to define the maximal acceptable deviations concerning
incubation temperature and time, volumes of patient plasma and tests cells for antibody screening using indirect
antiglobulin test on one hand and for reverse grouping on another hand. All equipment used (temperature test

* Auteur correspondant.
Adresse e-mail : lucienne.mannessier@efs.sante.fr (L. Mannessier).

1246-7820/$ - see front matter © 2006 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.
doi:10.1016/S1246-7820(06)00122-4
272 L. Mannessier et al. / Transfusion Clinique et Biologique 13 (2006) 271–277

chamber, chronometer, pipettes) were calibrated according to Cofrac standards. The antibody screenings were
performed manually using 3 different filtration systems: ID Diamed, Biovue Ortho and Scangel Biorad, the same tests
cells, a standard 20 ng/mL anti RH1, a positive control anti KEL1 and a negative control; the reverse blood grouping
was performed manually using the above mentionned filtration systems and microplate technic with the same A1 and
B test cells. These two studies showed that all the tests from the multiples combinations of the above parameters
gave the same results and allowed us to define a range of tolerance for 4 critical physical parameters involved in the
antibody screening and blood typing.
© 2006 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.

Mots clés : Écart maximum tolérable ; Groupage ABO ; RAI ; Tolérance métrologique ; Validation de méthode

Keywords: Validation of method; Metrological tolerance; Range of tolerance; Irregular antibodies; ABO blood grouping

Les laboratoires de biologie médicale candidats à l’accré- 2.1. Méthodes

ditation doivent se référer à la norme [1,2]. Dans le cadre
spécifique de l’accréditation Cofrac, les directeurs de labo-
ratoire doivent dans un premier temps choisir les méthodes
qu’ils vont utiliser, de préférence parmi celles qui sont
normalisées, et les valider.
Un des points importants de la validation d’une méthode
[3] est de s’assurer que celle-ci donne les résultats attendus
dans les limites métrologiques qu’il convient de définir.
Même si les consignes d’utilisation décrites par le fournis-
seur dans la notice technique d’un réactif font état des écarts
métrologiques acceptables, il est indispensable de s’assurer
que les équipements utilisés respectent bien ces exigences.
A fortiori, quand ces informations ne sont pas précisées, ce
qui est majoritairement le cas en immunohématologie, le
biologiste doit déterminer lui-même ces « bornes métrolo-
giques » pour la méthode qu’il utilise.
1. OBJET
Le but de notre travail était, dans le cadre d’une étude
multicentrique, de déterminer des seuils de tolérance pour
les principaux paramètres physiques critiques susceptibles
d’influencer les résultats de :
• la RAI en microfiltration ;
• l’épreuve plasmatique du groupage ABO en microfiltra-
tion et en microplaque.
Le protocole a consisté à établir les Erreurs maximales
tolérées (EMT) en étudiant les comportements croisés de
l’ensemble des paramètres physiques critiques susceptibles
d’influencer les résultats de la RAI et du typage érythrocy-
taire : température et durée d’incubation ainsi que les volu-
mes des réactants : hématies test et échantillons de plasma
ou de sérum.
2. MATÉRIEL ET MÉTHODES
L’ensemble des tests ont été réalisés manuellement en
techniques de microfiltration ou microplaque. Les gammes
d’hématies test étaient utilisées durant la dernière semaine
d’utilisation possible avant péremption.
Les méthodes étudiées ont été les suivantes :
• la RAI en microfiltration. Les supports de filtration cor-
respondant aux trois cartes de microfiltration existant à
ce jour (Biovue, ID-Diamed et Scangel) ont été testés
avec une gamme de trois hématies test (HT) pour le
dépistage des anticorps anti-érythrocytaires produite par
l’unité de production de réactifs (UPR) de l’établissement
français du sang (EFS) ;
• l’épreuve plasmatique du groupage ABO. Les supports
réactionnels étaient les cartes de filtration des trois mar-
ques précitées et la microplaque. Les hématies test A1 et
B utilisées pour l’épreuve plasmatique du groupage san-
guin ABO provenaient de l’UPR de l’EFS.
Les recommandations des fabricants mentionnées sur les
notices d’utilisation étaient les suivantes :
• RAI : déposer dans les colonnes de filtration 50 µl d’HT et
25 µl de plasma (40 µl pour le procédé Biovue), incuber
les supports à +37 °C pendant 15 minutes, centrifuger
dans une centrifugeuse spécifique programmée, lire vi-
suellement les réactions d’agglutination et coter de O à
4+ ;
• épreuve plasmatique du groupage sanguin ABO en micro-
filtration : déposer respectivement dans les colonnes de
filtration ID-Diamed, Scangel et Biovue-Ortho 50 µl d’HT
et 50 µl de plasma, incuber les supports à +22 °C pendant
dix minutes, centrifuger dans une centrifugeuse spécifi-
que programmée, lire visuellement les réactions et coter
de O à 4+ ;
• épreuve plasmatique du groupage sanguin ABO en micro-
plaque : déposer 25 µl d’HT et 25 µl de plasma, incuber la
microplaque à +22 °C pendant dix minutes, centrifuger
pendant une minute 30 à 190 g [3] puis effectuer la phase
d’agitation sous contrôle visuel jusqu’à négativation des
puits témoins.
L’étude métrologique et les EMT ont été restreints aux
bornes correspondant aux conditions de routine observées
dans les laboratoires et compatibles avec la réaction antigè-
ne–anticorps tant pour la RAI que le groupage ABO. Ils ont
été définis de façon consensuelle par le groupe immunohé-
matologie de la Société française de transfusion sanguine.
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Les différentes valeurs attendues et les EMT définies sont soit par l’utilisateur en fonction des indications de la notice
mentionnées dans le Tableau 1. fournisseur.
Du fait des combinaisons des paramètres critiques analy- De même, les paramètres de fréquence et de temps
sées, le nombre de tests réalisés avec chaque échantillon a d’agitation des microplaques n’ont pas été pris en compte du
été de 81 vis-à-vis des : fait du contrôle visuel de la négativité des témoins qui
• HT A1 et B pour l’épreuve plasmatique du typage ABO et indique la fin de l’agitation.
pour chaque échantillon de sang testé ;
• des 3 HT de la gamme de dépistage des anticorps anti- 2.2. Échantillons et réactifs
érythrocytaires et pour chaque anticorps testé.
En effet : Pour la RAI :
• pour la RAI, chaque échantillon a été testé à +34, +37 et • trois échantillons ont été étudiés :
+40 °C avec : C le standard anti-RH1 polyclonal du Centre national de
C pour chaque température, trois temps d’incubations référence pour les groupes sanguins (CNRGS) (lot
différents de 10, 15 et 20 minutes ; 99-02) calibré à une concentration de 20 ng par le
C pour chaque incubation, trois volumes différents de CNRGS et titrant 8 en TIA par le procédé de filtration
plasma de 20, 25 et 30 µl ; ID-Diamed vis-à-vis d’hématies d’expression homo-
C pour chaque volume de plasma : zygote RH:1,2,-3,-4,5,-8 et RH:1,-2,3,4,-5,-8 ;
– trois volumes différents d’HT de 40, 50 et 60 µl avec C les CQI marqués CE produits par l’UPR de l’EFS :
les supports ID-Diamed et Scangel ; – anti-KEL1 polyclonal de titre inférieur ou égal à
– trois volumes différents d’HT de 32, 40 et 48 µl avec 4 dans la technique d’utilisation conformément à
le support Biovue ; l’arrêté du 26 avril 2002 [4] ;
• pour l’épreuve plasmatique du groupage ABO, chaque – témoin négatif dépourvu d’anticorps anti-érythrocy-
échantillon a été testé à +18, +22 et +26 °C avec : taires ;
C – pour chaque température, trois incubations différen- • les réactifs utilisés provenaient de :
tes de 0, 10 et 20 minutes ; C Diamed, Ortho et Biorad pour les supports de filtra-
C pour chaque incubation : tion ;
– trois volumes différents de 40, 50 et 60 µl de plasma C l’UPR de l’EFS pour les hématies tests : l’antigène
avec les supports de filtration ; RH1 est exprimé sur les hématies nos 1 et 2 et l’anti-
– trois volumes différents de 24, 30 et 36 µl de plasma gène KEL1 est exprimé sur l’hématie no 1.
avec le support microplaque ; Pour l’épreuve plasmatique du groupage ABO :
C pour chaque volume de plasma : • trois échantillons ont été étudiés :
– trois volumes différents d’HT de 40, 50 et 60 µl avec C Les CQI A et B marqués CE produits par l’UPR de
les supports de filtration ID-Diamed et Scangel ; l’EFS ;
– trois volumes différents d’HT de 32, 40 et 48 µl avec • les réactifs utilisés provenaient de :
le support de filtration Biovue ; C Diamed, Ortho et Biorad pour les supports de filtra-
– trois volumes différents d’HT de 24, 30 et 36 µl avec tion et Ortho pour le support microplaque ;
le support microplaque. C l’UPR de l’EFS pour les hématies test A1 et B en
Compte tenu de la spécificité du matériel de centrifuga- suspension à 1 %.
tion pour les cartes de filtration et du préréglage du temps
de centrifugation, ce paramètre n’a pas été pris en compte 2.3. Équipements et étalonnage
dans l’évaluation des EMT. Pour les tests en microplaque, la
centrifugation est préprogrammée soit par le fournisseur, L’ensemble des équipements utilisés était étalonné selon
les exigences Cofrac : enceintes thermostatées, sondes,
Tableau 1
thermomètres à thermocouple, pipettes, minuteurs et chro-
Étude métrologique et EMT
nomètres reliés à l’horloge parlante, centrifugeurs pour
RAI-TIA Valeur attendue EMT cartes de filtration, microplaque et tachymètres...
Température °C +37 ±3
Durée minutes 15 ±5
2.3.1. Température
Plasma µl 25* ± 5*
Hématies test µl 50 ± 10 Les essais en température ont été réalisés dans des
*Ortho = 40 ± 8 µl incubateurs thermostatés. L’enceinte thermostatée VT
Groupage ABO Valeur attendue EMT 4002 Votsch a préalablement été caractérisée selon la
Température °C +22 ±4 norme NF X 15-140 [5] à l’aide d’une centrale d’acquisition
Durée minutes 10 ± 10 AOIP SA 32 équipée de neuf capteurs de type thermocouple
Plasma µl V* ± 20 % T. La caractérisation a été effectuée en neuf points aux
Hématies test µl V* ± 20 % consignes de température :+34, +37 et +40 °C. Les résultats
*V : cf. notice fournisseur. de cette caractérisation sont synthétisés dans le Tableau 2.
274 L. Mannessier et al. / Transfusion Clinique et Biologique 13 (2006) 271–277

Tableau 2
Résultats des étalonnages en température de l’enceinte Votsch
Valeur de consigne (°C) Erreur de justesse Incertitude élargie U Expression Borne inférieure Borne supérieure
(k = 2) des résultats
34 –0,13 0,47 34,13 ± 0,47 33,66 34,60

37 0,00 0,49 37 ± 0,49 36,51 37,49

40 0,03 0,49 39,97 ± 0,49 39,48 40,46

Tableau 3
Résultats des étalonnages en volume
Valeur de consigne Erreur de justesse Ev Erreur aléatoire Sv Expression Borne inférieure Borne supérieure
(en µl) des résultats
50 0,97 0,08 49,03 ± 0,08 48,95 49,11

250 0,95 0,30 249,05 ± 0,30 248,75 249,35

500 1,68 0,26 498,32 ± 0,26 498,06 498,58

De plus, pour une autre enceinte, un essai de caractéri- Temps :

sation a été effectué en quatre points à l’aide d’un thermo-
mètre FLUKE à thermocouple K étalonné avec une incerti-
tude élargie U de ± 0,1 °C aux mêmes consignes de
température +34, +37 et +40 °C : les résultats des tests de
RAI sont strictement identiques.
Pour le typage ABO à « température ambiante », un
enregistrement en continu des différentes températures
+18, +22 et +26 °C a été effectué durant toute la durée des
tests.
2.3.2. Volumes
Les essais en volume ont été réalisés avec des pipettes à
volume variable (µl) vérifiées par la société BIOHIT (ou dans
les services de métrologie des établissements de transfu-
sion) et jugées conformes selon la norme NF EN 8655. Les
résultats sont mentionnés dans le Tableau 3.
2.3.3. Temps
Les essais en temps ont été réalisés à l’aide de chrono-
mètres étalonnés en interne par rapport à l’horloge parlante
dont la confirmation métrologique est implicite.
2.3.4. Capabilité des instruments utilisés avec
les EMT
Les caractéristiques métrologiques des équipements uti-
lisés doivent être compatibles avec les EMT. La capabilité
d’un instrument de mesure avec les EMT est démontrée par
la formule suivante [6] extraite du Guide de métrologie à
l’usage des Laboratoires d’Analyses de Biologie Médicale édi-
tion 1, Collège français de métrologie) :
2U ≤ t/4 avec U = incertitude élargie ; t = tolérance =
2 × EMT.
Température :
• consigne 34 °C : 0,47 ≤ (2 × 3)/8 = 0,75 ;
• consigne 37 °C : 0,49 ≤ (2 × 3)/8 = 0,75 ;
• consigne 40 °C : 0,49 ≤ (2 × 3)/8 = 0,75.
Volumes :
• consigne 20 µl : 0,13 ≤ (2 × 4)/8 = 1 ;
• consigne 50 µl : 0,08 ≤ (2 × 10)/8 = 2,5.
• consigne 30 à 1200 secondes : 0,88 ≤ (2 × 3)/8 = 75.
Les caractéristiques des instruments utilisés dans le cadre
de cette étude, pour toutes les grandeurs, sont donc com-
patibles avec les EMT.
3. RÉSULTATS
3.1. RAI
Les intensités d’agglutination observées sont toutes iden-
tiques, égales à 2+, quelle que soit la combinaison des
valeurs de consigne, pour les deux anticorps testés vis-à-vis
des hématies tests possédant l’antigène correspondant.
Aucune agglutination n’a été observée avec l’échantillon
témoin négatif, pour toutes les combinaisons de valeur de
consigne.
Le Tableau 4 présente le détail des tests effectués et des
résultats obtenus. Les écarts maximums tolérables sont les
suivants :
• température d’incubation en 0 °C : 34–40 ;
• durée d’incubation en minute : 10–20 ;
• volume de plasma en microlitre : 20–30 ;
• volume d’hématies test* en microlitre : 40–60 (*32–48).
3.2. Groupage ABO
Les intensités d’agglutination sont toutes identiques, éga-
les à 4+, quelle que soit la combinaison des valeurs de
consigne, pour les trois échantillons testés.
Aucune fausse réaction positive n’a été observée.
Les Tableaux 5 et 6 présentent le détail des tests effectués
et des résultats obtenus. Les écarts maximums tolérables
sont les suivants :
• température d’incubation en 0 °C : 18–26 ;
• durée d’incubation en minute : 0–20 ;
• volume de plasma * en microlitre : 40–60 (* 24–36) ;
• volume d’hématies test * en microlitre : 40–60 (* 24–36).
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Tableau 4
Résultats de la RAI en filtration
Température Temps Volume Volume Anti-RH1 Anti-KEL1 Témoin négatif
(°C) (minute) Plasma Hématie* HT 1 HT 2 HT 3 HT 1 HT 2 HT 3 HT 1 HT 2 HT 3
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
20 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
10 25 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
30 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
20 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
34–37–40 15 25 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
30 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
20 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
20 25 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
40 2+ 2+ – 2+ – – – – –
30 50 2+ 2+ – 2+ – – – – –
60 2+ 2+ – 2+ – – – – –
* 32–40–48 pour Ortho.

Tableau 5
Résultats de l’épreuve plasmatique du groupage ABO en filtration
Température (°C) Temps Volume* Volume* CQI de groupe A CQI de groupe B CQI de groupe O
(minute) Plasma Hématie HT A HT B HT A HT B HT A HT B
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
0 50 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
18–22–26 10 50 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
20 50 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
40 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 50 – 4+ 4+ – 4+ 4+
60 – 4+ 4+ – 4+ 4+
* V : cf.° notice fournisseur.
276 L. Mannessier et al. / Transfusion Clinique et Biologique 13 (2006) 271–277

Tableau 6
Résultats de l’épreuve plasmatique du groupage ABO en microplaque
Température (°C) Temps V* Plasma V* Hématie CQI de groupe A CQI de groupe B CQI de groupe O
(minute HT A HT B HT A HT B HT A HT B
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
0 30 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
18–22–26 10 30 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
20 30 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+
24 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 30 – 4+ 4+ – 4+ 4+
36 – 4+ 4+ – 4+ 4+

4. DISCUSSION ties peuvent être hémolysées. Dans les conditions ainsi

Les groupages sanguins et les RAI sont des examens
immunohématologiques de première importance partici-
pant au maintien de la sécurité transfusionnelle [7]. Il était
intéressant de déterminer la robustesse des techniques
employées.
Dans ces deux études, ont été caractérisées les EMT
pour les principaux paramètres physiques critiques pouvant
avoir une influence sur la qualité du résultat : volumes des
réactants, temps et durée d’incubation des supports réac-
tionnels.
Nous n’avons pas tenu compte de l’erreur due aux ins-
truments de mesure tant elle est négligeable. Par exemple,
les minuteurs utilisés ont une résolution inférieure à une
seconde.
L’ensemble des résultats montrent que les limites accep-
tables concernant les volumes des réactants, les temps et
température d’incubation peuvent dévier de 25 à 33 % par
rapport aux valeurs indiquées sur les notices des fabricants.
Qu’il s’agisse de la RAI ou du groupage ABO, l’étendue
des EMT a été volontairement restreinte. En effet, pour les
RAI, lorsque les températures sont en dessous de la borne
inférieure définie, de nombreux anticorps faibles ne sont pas
mis en évidence. Les anticorps immuns ayant une incidence
transfusionnelle sont les anticorps d’allo-immunisation qui
par définition sont des anticorps « chauds ». Inversement,
au-delà d’une température supérieure à +40 °C, les héma-
définies, le seuil de détection d’un anti-RH1 est de l’ordre de
10 ng [8,9], soit deux fois moindre que le seuil requis dans
l’arrêté du 26 avril 2002. De même, pour le groupage ABO,
lorsque les températures sont inférieures à +18 °C, le risque
de perturbations de l’épreuve plasmatique par des agglutini-
nes froides est majoré mais dans ce cas, il y aura discordance
entre les épreuve globulaire et plasmatique et le résultat du
groupage ne pourra donc pas être rendu. Il sera de ce fait
nécessaire de pratiquer le groupage à des températures plus
élevées avec comme contrainte de sensibiliser la réaction
antigène–anticorps en travaillant avec un excès d’anticorps
car les anti-ABO sont des anticorps naturels de
type « froid ».
5. CONCLUSION
Les données métrologiques : étalonnage et capabilité des
instruments utilisés dans le cadre de cette étude, nous ont
permis de définir les seuils de tolérance pour les quatre
paramètres critiques impliqués dans la RAI et l’épreuve
plasmatique du groupage sanguin ABO réalisées en microfil-
tration avec les supports réactionnels des fournisseurs Dia-
med, Ortho, Biorad et en microplaque ainsi qu’avec les
hématies tests produites par l’UPR de l’EFS.
Cette étude a le mérite de montrer la robustesse de ces
techniques utilisées depuis plus de 60 ans.
 L. Mannessier et al. / Transfusion Clinique et Biologique 13 (2006) 271–277 277

RÉFÉRENCES [5] Enceintes climatiques et thermostatiques : caractérisation et

vérification. NF X 15-140. Paris: Afnor. Ed; 2002.
[6] Guide de métrologie à l’usage des Laboratoires d’Analyses de
[1] Prescriptions générales concernant la compétence des laboratoires
Biologie Médicale édition 1, Collège Français de Métrologie.
d’étalonnages et d’essais. NF EN ISO/CE1 17025. Paris: Afnor, Ed;
[7] Rouger P, Le Pennec PY, Noizat-Pirenne F. Le risque immunologique
2005.
en transfusion et sa prévention. In: Lefrère JJ, Rouger P, editors.
[2] NF EN ISO 15189. Transfusion sanguine : une approche sécuritaire. Paris: John Libbey
[3] Mannessier L, Guignier F, et le groupe de travail « Microméthodes et Eurotext Ed; 2000. p. 244–61.
immunohématologie ». Etude pour un essai de standardisation du [8] Mannessier L, Le Pennec PY. Évaluation externe de la qualité : étude
groupage ABO-D en microplaque à fond en U. Rev Fr Transfus de la sensibilité du procédé de filtration en test indirect à
Hémobiol 1992;35:33. l’antiglobuline. Transf Clin Biol 2005;12(N°5):399–400.
[4] Arrêté du 26 avril 2002 relatif à la bonne exécution des analyses de [9] Mannessier L. Nouvel arrêté de bonnes pratiques d’immuno-
biologie médicale. hématologie : analyse critique. Transf Clin Biol 2003;10:201–5.