SH-FORM-43 Palu Revise

Fiche type de vérification (portée A) / validation
(portée B) d’une méthode de biologie médicale

Note : le laboratoire se réfèrera au tableau du § 9 du document Cofrac SH GTA 04 rev 01 pour
connaître les paramètres à déterminer dans le cadre d'une vérification sur site (portée A) ou d’une
validation (portée B) et complètera une fiche par examen de biologie médicale
EXAMEN DE BIOLOGIE MEDICALE

Identification du paramètre (comme identifié dans la liste détaillée des examens) :
Diagnostic du paludisme.
Processus simple ; Processus complexe (nombre de sous-processus : …2)
DESCRIPTION DU PROCESSUS
Modalités de vérification/validation1 :
5 frottis/1 opérateur 1. Répétabilité
6 frottis / 5 opérateurs 2. Fidélité intermédiaire
3 frottis / 12 opérateurs 3. Variabilité inter-opérateurs
NA 4. Justesse
EEQ :BP et Kalidiv (19 5. Exactitude
programmes)
Sous- 6. Sensibilité et spécificité analytique
Bibliographie
processus 1 :
Evaluation des risques 7. Incertitudes
Frottis mince
Bibliographie 8. Etendue de mesure
Analyse des résultats : 9. Comparaison de méthodes
1166 frottis
NA 10. Interférences
NA 11. Contamination
Bibliographie 12. Robustesse et fiabilité des réactifs
NA 13. Intervalle de référence
Modalités de vérification/validation :
2 gouttes / 5 opérateurs 1. Répétabilité
5 gouttes / 4 opérateurs 2. Fidélité intermédiaire
1 goutte / 5 opérateurs 3. Variabilité inter-opérateurs
NA 4. Justesse
EEQ : BP et Kalidiv (11 5. Exactitude
Sous-
programmes) 6. Sensibilité et spécificité analytique
processus 2 :
Bibliographie 7. Incertitudes
Goutte
Evaluation des risques 8. Etendue de mesure
épaisse
Bibliographie 9. Comparaison de méthodes
Analyses de données 10. Interférences
NA
11. Contamination
NA
12. Robustesse et fiabilité des réactifs
Bibliographie
NA 13. Intervalle de référence
Pour chaque étape, le laboratoire procèdera à la vérification / validation des items attendus, et
dupliquera autant que de besoin les pages 2 à 8 (évaluation des performances de la méthode) du
présent document. Si un autre élément du processus lui semble critique, il devra vérifier / valider cette
étape et le préciser dans la conclusion argumentée. C’est cette vérification qui lui permettra de
maitriser ce point critique.
Argumentaire (le cas échéant) :

1
Note : Pour la vérification/validation de méthodes quantitatives, le renseignement des items 1, 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12 et 13
est attendu a minima. Pour la vérification/validation de méthodes qualitatives, le renseignement des items 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12
et 13 est attendu, a minima.
Le types de vérification (bibliographique ou essais) est à indiquer.
L’absence d’applicabilité de certains items (NA) doit être justifiée dans le corps du document.
SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 1 sur 25

SOUS-PROCESSUS 1 : Frottis mince coloré au Diff Quick
Portée A ; Portée B (à justifier)
DESCRIPTION DE LA METHODE
Analyte / Mesurande : Hématozoaires responsables du paludisme
Principe de la Méthode : Observation microscopique d’un frottis sanguin mince
coloré par une coloration rapide panoptique, RAL 555
avec le colorateur RAL Stainer (ou par la coloration du
Diff Quick en solution dégradée) : recherche et
identification des Plasmodiums.
Calcul de la parasitémie : pourcentage du nombre
d’hématies parasitées par rapport au nombre total
d’hématies observées
Type d'échantillon primaire : Sang total
Type de récipient, additifs : Tube avec EDTA ou ACD (acide citrique-dextrose)
Prétraitement de l'échantillon : Après homogénéisation du prélèvement par
retournement, étalement d’un frottis sanguin de sang total
en couche mince sous PSM II
Unités : % pour la parasitémie
Critères d’interprétation2 : Négatif si aucun parasite observé après observation de
40 000 hématies
Marquage CE (Oui/Non) : OUI
Codage C.N.Q. (s'il existe) : PAR
Equipement (instrument, analyseur, etc.) : Colorateur RAL Stainer N° série 1641
Microscope optique à lumière blanche, Zeiss, objectif à
immersion X100
Référence du réactif : Méthanol
Référence : 20846.292
Fournisseur : VWR Internatinal
Conditions de conservation : conservation entre 15 et
25°C
Kit RAL Stainer 555
Référence : 362870, 361640, 361645, 361650
Fournisseur : RAL Diagnostics
Stabilité : conservation entre 15°C et 25°C (tolérance
jusqu’à 40°C) jusqu’à date de péremption, 30 cycles de
coloration ou 14 jours à bord du RAL Stainer
Diff Quick Solution 1 Médion Diagnostics
Diff Quick Solution 2 Medion Diagnostics
Référence : 726445, 726446
Fournisseur : Medion Diagnostics AG
Conditions de conservation : conservation entre 15 et
30°C
Matériau d'étalonnage (références) : NA
Type d'étalonnage, nombre de niveaux et
NA
valeurs :
2
Indiquer les valeurs de référence si différentes en fonction de l’anticoagulant. Tenir compte du sexe, âge…

MISE EN ŒUVRE
Opérateur(s) qualifié(s) et reconnu(s)
Techniciens, biologistes et internes habilités selon
compétent(s) ayant réalisé la
planning d’astreinte
vérification/validation de méthode :
Procédure de validation/mode opératoire : PN_VAM_P_001 : Procédure validation de méthode
Procédure de gestion de la portée flexible : PN_VAM_P_002 : gestion de la portée flexible
Période d’étude : Méthode utilisée depuis 1990 avec changement de
colorant en 2016 après validation interne.
Etude rétrospective avec exploitations des EEQ depuis
2013 et étude sur site 2016-2017.
Date de 1ère utilisation : 1990 avec mise en place du RAL Stainer en 2016

MAITRISE DES RISQUES

(le laboratoire adaptera les points critiques à maîtriser à partir du tableau ci-dessous pour chaque
paramètre vérifié/validé)
Moyens de maitrise (formation du
personnel, vérification
Echelle expérimentale, jeux d’essai, …) /
5M Points critiques de Eléments à maîtriser Documents (procédure,
criticité3 instruction, enregistrement, …)
avec les références du SMQ du
laboratoire
Identité 5 Formation et information du Gestion des NC :
personnel PN_DYS_P_001 : Procédure de
gestion des non conformités et des
réclamations, de gestion des risques
et du suivi des actions
PN_REC_P_009 : Gestion d'une
non-conformité pré-analytique (NCA)
au laboratoire
PN_REC_M_034 : Gestion des non-
conformités d'accueil en
Parasitologie
Préparation du 3 Information des patients et Instructions de prélèvement :
patient : préleveurs manuel de prélèvement de l’hôpital
Renseignements Bichat
épidémiologiques
Matière (échantillons)
Type de 4 Formation des préleveurs Instructions de prélèvement :

contenants : catalogue des analyses, feuilles de
Tube EDTA, tube demande des examens de
ACD Parasitologie - mycologie
Nature et volume 3 Contrôle à
de l’échantillon : réception d’acceptation/de PN_PRA_M_028 : pré-analytique
sang total, sur ACD refus du prélèvement : des diagnostics du paludisme
(rempli à 75% refus tube sec et dérogation PN_REC_F_077 : enregistrement
minimum) ou EDTA éventuelle si autres des demandes de paludisme
anticoagulants ;
non-conformité si délai de Habilitation des agents de la
transmission >2h (urgence) réception
PN_TOUS_E_011 : grille de tutorat
Délai et 4 Gestion logistique (navettes, des agents de réception en
température avant enceintes de transport) : parasitologie
traitement transport par pneumatique PN_GRH_E_786 critères
analytique : <2h ou directement par le d’habilitation des agents de réception
après prélèvement personnel infirmier des PN_GRH_E_233 : évaluation initiale
pour respecter délai services de soins des compétences des agents de
de rendu (4h) ; réception
transport à PN_GRH_E_234 : Fiche d'évaluation
température du maintien des compétences -
ambiante Agent de réception et pré-analytique
3
A préciser par le laboratoire, par exemple 1 non critique – 5 très critique ;

criticité instruction, enregistrement, …)
laboratoire
Conditions de 2 Les prélèvements sont pris PN_TOUS_P_009 : diagnostic du
conservation des en charge dès réception puis paludisme
échantillons (t°, conservés entre 2 et 8°C PN_ANA_M_049 : paludisme : frottis
…) : 24h à 20- pendant 30 jours ou avant sanguin
30°C, 72h à + 4°C transmission au CNR PN_VAB_M_090 : validation
Conditions de 2 Paludisme. biologique du diagnostic du
conservation et Les réactifs utilisés pour les paludisme
d’utilisation des colorations sont conservés Enregistrements métrologiques :
réactifs (t°, …) : entre 18°C et 25°C dans les PN_MAI_M_008 : Gestion des unités
15°-30°C armoires à solvants. surveillées et raccordement
Les températures de métrologique des enceintes
conservation des thermostatées
échantillons et des réactifs Relevés des températures
sont surveillées à l’aide du ambiance :
logiciel Sirius. PN_MAI_E_016 : Tableau de relevés
Fiche de stress des réactifs manuels des températures
Milieu
transmises par les PN_MAI_E_085 : Analyse de dérive

fournisseurs. d'une sonde de surveillance
PN_MAI_F_015 : Mode dégradé en
cas de panne des capteurs de
température
Raccordement des enceintes :
PN_MAI_M_028 Gestion et
raccordement métrologique des
sondes de surveillance
Fiches techniques des réactifs :
PN_ANA_F_078 : fiche technique du
RAL Stainer
PN_ANA_F_082 : Fiche technique
coloration par le Diff Quick
Qualité de l’eau 3 mesure du pH (papier pH) Traçabilité des vérifications :
PN_PREP_E_016 : Suivi du pH de
l'eau du robinet

laboratoire
Surveillance des 3 Nettoyage quotidien des Enregistrements des
dérives : objectifs, maintenance maintenances des microscopes et du
- Microscope annuelle des microscopes colorateur dans: Kalilab
- Automate de
coloration Suivi des colorations des PN_GCQ_E_134 : suivi des CQI
- Lames frottis : CQI des Frottis Frottis Paludisme
d’observation PN_GCQ_E_150 : tableau de suivi
dégraissées des CQI paludisme
EEQ annuel : ANSM + Enregistrement des EEQ dans Glims
Biologie perspective ou PN_GCQ_E_053: Recueil individuel
Kalidiv des résultats des EEQ
Suivi du maintien des PN_GRH_E_735 : critères
Matériel (équipements)
compétences des habilitation astreinte paludisme.

personnels participant aux PN_GRH_E_489 : fiche d’évaluation
astreintes du diagnostic du di maintien des compétences :
paludisme par lecture des diagnostic du paludisme
lames des EEQ
Gestion des stocks de
Maîtrise des équipements : consommables
absence de ruptures PN_GFO_F_030 Fiche processus -
Achats et Gestion des stocks
Contamination NA tests individuels
Informatique 4 Enregistrement et saisie PN_SIL_M_005 : Qualification des
manuelle systèmes d'informations
PN_REC_F_077 : enregistrement
Traçabilité de l’observateur des demandes de paludisme
et du biologiste valideur sur PN_ANA_F_165 : impression liste de
la feuille de paillasse travail paludisme
PN_TOUS_F_022 : Acquisition des
Transmission des résultats résultats de paludisme dans GLIMS
par téléphone et sur serveur PN_VAB_M_090 : validation
informatique après validation biologique du diagnostic du
biologiques paludisme

laboratoire
Conservation et 2 Les réactifs utilisés pour les PN_GFO_E_045 : fiche de suivi des
conditions colorations sont conservés lots de réactifs Paludisme
d’utilisation entre 18°C et 25°C dans les PN_HSL_F_062 Fiche processus -
armoires à solvants. Hygiène, sécurité et vigilances
Les températures de
conservation des PN_PIL_F_016 : Organisation de la
échantillons et des réactifs métrologie des laboratoires
sont surveillées à l’aide du PN_MAI_M_028 Gestion et
logiciel Sirius. raccordement métrologique des
Fiche de stress des réactifs sondes de surveillance
transmises par les PN_MAI_M_028 Gestion et
fournisseurs raccordement métrologique des
Matériel (réactifs)
PN_MAI_E_016 : Tableau de relevés

manuels des températures
Gestion des stocks 3 Gestion des stocks PN_GFO_F_030 : Fiche processus -

Commandes mensuelles Achats et Gestion des stocks
Suivi des réactifs PN_HSL_P_003 : Procédure
réactovigilance
PN_GFO_E_045 : fiche de suivi des
lots de réactifs Paludisme
Reconstitution des Réactifs prêts à l’emploi

réactifs
Qualité de l’eau 3 mesure du pH (papier pH) Traçabilité des vérifications :

PN_PREP_E_016 : Suivi du pH de
l'eau du robinet
Suivi des lots de réactifs :
Réalisation du 3 Frottis sanguin réalisé PN_ANA_M_049 : paludisme : frottis
frottis manuellement sous PSM 2 sanguin
selon le mode opératoire
Réalisation de la 4 Fixation du frottis par le PN_ANA_M_049 : paludisme : frottis

coloration méthanol après séchage sanguin
Coloration avec le RAL PN_ANA_DE_015 : mode d’emploi
Stainer par les réactifs du kit fabriquant RAL Stainer
Méthode
RAL 555 selon protocole PN_ANA_P_032 : mode d’emploi du

validé au laboratoire (ou RAL Stainer
manuellement avec les PN_ANA_F_078 : fiche technique kit
colorants Diff Quick en RAL Stainer 555
procédure dégradée).
Qualité de la coloration PN_GCQ_M_054 : CQI Frottis
vérifiée lors de l’observation sanguin paludisme
microscopique du frottis PN_GCQ_E_134 : suivi des CQI
Contrôle de qualité des Frottis Paludisme
frottis réguliers

laboratoire
2 Observation de 40 000 PN_ANA_M_049 : paludisme : frottis
Seuil de détection hématies, réalisation et sanguin
lecture de la goutte épaisse PN_VEI_DE_073 : Mise à jour 2017
si négatif ou faiblement des RCP 2007 sur la prise en charge
positif. Sensibilité : 100p/µl et prévention du paludisme
d'importation
Causes 2 Prélèvement dilué, Formation et habilitation du
d’incertitude de anomalies des globules personnel ; contrôle de la coloration ;
mesure rouges ; coloration de respect des modes opératoires
mauvaise qualité PN_GRH_E_490 : habilitation
astreinte diagnostic du paludisme
Rendu des Délai de rendu des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du
résultats résultats : dans les 2 heures paludisme
suivant la réception du PN_VAB_M_090 : validation
prélèvement en cas de biologique du diagnostic du
diagnostic initial. paludisme
Prestation de Appel systématique des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du

conseil résultats : transmission aux paludisme
prescripteurs pour les PN_VAB_M_090 : validation
prélèvements de l’hôpital biologique du diagnostic du
Bichat ; transmission aux paludisme
laboratoires transmetteurs PN_VAB_M_006 : Validation UF de
pour le GH et les hôpitaux parasitologie
extérieurs.
Traçabilité de la
communication du résultat
dans GLIMS et sur la feuille
de paillasse

laboratoire
Compétence et 4 Diagnostic du paludisme Enregistrements des compétences
maintien de réalisé selon planning du personnel :
compétence du d’astreinte par personnel - dossier d’habilitation
personnel habilité : biologiste, interne PN_GRH_E_487 : fiche de tutorat
ou technicien. astreinte diagnostic du paludisme
Habilitation des personnels : - habilitation des personnels
- formation initiale (reconnaissance de lames)
Main d’œuvre (Personnel)
- maintien des compétences PN_GRH_E_735 : critères

d’habilitation astreinte paludisme
PN_GRH_E_490 : habilitation
PN_GRH_E_488 : fiche d’évaluation
initiale des compétences : astreinte
du paludisme
- maintien des compétences / EEQ :
lecture par tout le personnel
individuellement (4/an)
du maintien des compétences :
diagnostic du paludisme
-Traçabilité de l’occupation des
postes de travail : PN_SOI_E_008 :
planning d’astreinte parasitologie

EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) : étalement sanguin
- Qualité du frottis monocouche
- Qualité de la coloration : hématies gris violettes, polynucléaires neutrophiles avec un noyau violet
foncé et des granulations bien visibles, noyau foncé pour les lymphocytes.
- Reconnaissance des Plasmodiums (noyau rouge et cytoplasme bleu) et identification de l’espèce
(voir mode opératoire)
- Parasitémie (voir mode opératoire)
- Observation d’autres pathogènes comme Trypanosomes, Babésia, microfilaires
REPETABILITE
Applicable ; non applicable (à justifier)
CV (%) retenu
Nombre
Ecart- CV (%) par le
Echantillons de valeurs Moyenne CV (%) Conclusion5
type fournisseur laboratoire (cf.
(N)
source4)
30-60
15%
Frottis (limite
(CV variabilité
sanguin 5 0.95 0.14 14.7 acceptabilité correcte
inter-opérateur
1708020268 biologie
sur EEQ)
prospective)
Argumentaire de la conclusion : Lecture visuelle sur 100 hématies / champ
FIDELITE INTERMEDIAIRE
Le laboratoire a évalué la reproductibilité de la parasitémie à partir de lames réalisées à partir de prélèvements

sanguins reçus pour un diagnostic de paludisme, lues par différents manipulateurs. La variabilité de la parasitémie doit
s’intégrer dans la signification clinique de celle-ci et ses conséquences sur la prise en charge thérapeutique du patient.
CV (%) retenu
Nombre
type fournisseur laboratoire (cf.
(N)
source4)
Précision de
Frottis
la lecture de
sanguins
30-60 la
1708014656 4 3.85 0.17 4.5 15%
(limite parasitémie :
1708014944 4 1.95 0.13 6.62 (CV variabilité
acceptabilité CV compris
1708017621 4 0.92 0.19 20.4 inter-opérateur
biologie entre 4.5% et
1507031555 5 0.57 0.13 22.8 sur EEQ)
prospective) 23%, sans
1708012457 4 0.015 0.001 8.5
conséquences
cliniques.
VARIABILITE INTER-OPERATEURS
Applicable ; non applicable
Opérateurs évalués : techniciens, Résultats individuels des EEQ (4/an) ; 8 à 12 opérateurs :

internes et biologistes - résultats négatifs : aucune variabilité
- résultats positifs : aucune variabilité dans l’identification des espèces
- parasitémie : CV de 13 à 47,5% selon la charge parasitaire
Echantillon 2014-2 : parasitémie : m = 3,97% ; CV = 13% (n=11)
4
Sociétés savantes, publications (SFBC, GEHT, RICOS, QUALAB, CLIA…). Préciser la référence utilisée.
5
Conforme/non conforme

Echantillon 2013-4 : parasitémie : m = 0,04% ; CV = 47,5% (n=12)
Echantillon 2013-4 : parasitémie : m = 0,06% ; CV = 33% (n=8)
Argumentaire de la conclusion : L’évaluation de la parasitémie est imparfaite, particulièrement dans les faibles
valeurs, mais les valeurs estimées restent dans les limites de leur importance en clinique.
JUSTESSE (à partir des CIQ externalisés)

Nombre Moyenne
Cible Biais (%) Biais (%) Biais (%)
de Valeurs générale
Echantillons (groupe /groupe / moyenne Conclusion5
valeurs Labo
de pairs) de pairs
(toutes
générale Limite4
(N) techniques)
Echantillon
CIQ niveau 1
Echantillon
CIQ niveau 2
Argumentaire de la conclusion : examen microscopique, pas de résultat chiffré
EXACTITUDE (à partir des contrôles externes ponctuels : EEQ/CNQ)

Contrôles quantitatifs ; Contrôles qualitatifs
Cible Biais (%) Biais (%) / Biais

Valeur
Echantillons Cible (toutes / groupe toute (%) Conclusion5
Labo
techniques) de pairs technique limite4
Biologie
prospective
F2013-1 Pf 0.5 Pf 0.5
F2013-2 Po 0.13 Po 0.2
F2013-3 Pm 0.023 Pm <0.1
F2013-4 Po 0.06 Po <0.1
F2014-1 Négatif Négatif
F2014-2 Pf 3.5 Pf 2.6
F2014-3 Négatif Négatif
F2014-4 Pf 0.75 Pf 0.7
F2015-1A Po 0.014 Po 0.15
F2015-2A Pf 1.03 Pf 0.5 NA A renseigner pour les contrôles quantitatifs Conformes
F2015-3A Pf 0.4 Pf 1.4
F2015-4A Pf 2.2 (NR) NC
F2016-1A Po 0.06 Po 0.1
F2016-2A Négatif Négatif
F2016-3A Pf 0.08 Pf 0.1
F2016-4A Po 0.3 Po 0.3
Kalidiv
2017-1 Pf 0.07 Pf 0.22±-0.08
2017-2 Pv 0.4 Pv
2017-3 Pf 0.13 Pf
Argumentaire de la conclusion : résultats conformes (ou lettre A) pour les EEQ sur frottis sanguin depuis 2015,
pour le résultat qualitatif (positif/négatif) ou identification de l’espèce et la parasitémie.
SENSIBILITE et SPECIFICITE ANALYTIQUE

(étude expérimentale indispensable en portée B)
(étude expérimentale possible si pertinente en portée A)
Vrais positifs Spécificité, sensibilité, VPN, VPP
Faux positifs
Vrais négatifs
Faux négatifs
Argumentaire de la conclusion : 146 diagnostics de paludisme en 2016, 168 en 2017. Performance analytique
conservée d’une année sur l’autre malgré le roulement du personnel et le changement de réactif de coloration.
INCERTITUDE DE MESURE (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :

Méthodologie choisie : analyse des risques (absence d’interférence résiduelle) ; calcul
Exigence de
Incertitudes calculées
performances

Mode de calcul (cf. SH GTA 14) : Formule utilisée Référence
Argumentaire de la conclusion : méthode qualitative ; pas de calcul possible si négatif

LIMITE DE DETECTION (étude expérimentale indispensable en portée B)

Limite de détection : Sensibilité théorique : 100p/µl dans les conditions de
lecture des frottis sur 40 000 hématies, considérant
4,5 T/L d’hématies.
Bibliographie : manuel OMS sur le diagnostic du
paludisme
Argumentaire de la conclusion : 100p/µl
COMPARAISON DE METHODES :
Données bibliographiques (fournisseurs, Mise à jour 2017 de la conférence de consensus
publications,…) : 2007 ; Manuel de diagnostic du paludisme de l’OMS
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le Goutte épaisse sur frottis négatifs
laboratoire, appareil en miroir ou back-up, EBMD :
Nombre de mesures : En 2017, sur 426 F/GE : 421 GE négatifs, et 5 GE
positives (1.18%) dont 2 prélèvements sous
traitements.
En 2016, sur 740 F/GE : 728 GE négatifs, et 12 GE
positives (1.6%) dont 6 prélèvements sous
traitements.
Intervalle de comparaison adaptée à l’étendue des Absence ou présence de Plasmodium
mesures du laboratoire : Identification de l’espèce en cause
Parasitémie :  0,0025%
Méthode d'exploitation des résultats : Comparaison de résultats qualitatifs
Equation de la droite de régression : NA
Diagramme des différences et/ou des rapports : NA
Argumentaire de la conclusion : La lecture des frottis est sensible, 98% des résultats négatifs sont confirmés en
goutte épaisse. Les résultats 2017 sont comparables à ceux de 2016 : le changement de colorant et de personnel
n’influence pas nos performances.
ETENDUE DE MESURE (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour :
troponine, micro albumine, plaquettes, PSA, TSH, …)
Limite de détection : Etude bibliographique (sources et Etude expérimentale (valeurs)
valeurs)
Limite de quantification : Etude bibliographique (sources et Etude expérimentale (valeurs)
valeurs)
Limite supérieure de linéarité : Etude bibliographique (sources et Etude expérimentale (valeurs)
valeurs)
Argumentaire de la conclusion : lecture microscopique, quantification non linéaire. Limite de détection associée à
nos critères de lecture : observation de 40 000 hématies, soit une limite de detection d’une hématie parasitée sur
40000, soit environ 100 parasites/µl pour une numération globulaire moyenne de 4,0T/L.
INTERFERENCES (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour : Hémolyse, turbidité, bilirubine,
médicaments, … - à prendre en compte dans les facteurs de variabilité - à évaluer si nécessaire)
Hémolyse Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Turbidité Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Bilirubine, ictère Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)

Médicaments Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge
… Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge
Argumentaire de la conclusion : L’observation d’un frottis sanguin coloré par le Giemsa n’est pas sensible à ces
interférences.
CONTAMINATION (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour les paramètres sensibles)
Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par Préciser les données fournisseur ou essai de
exemple Ag HBS, βHCG, …) : surcharge
Inter réactif si nécessaire (par exemple : LDH et Préciser les données fournisseur ou essai sur site
ALAT, cholestérol et phosphate, lipase et
triglycérides, …) :
Argumentaire de la conclusion : test individuel manuel, pas de contamination possible
ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS

Paramètres sensibles testés (t°, pH, position sur un Les réactifs RAL 555 pour le RAL Stainer ont une
support, …) puce RFID qui permet de surveiller leur utilisation.
Un contrôle de qualité de la coloration est réalisé
lors de chaque changement de coffret de réactifs.
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués, … Les réactifs sont valables 14 jours après ouverture
ou pour 300 cycles de coloration. Ils sont conservés
à température ambiante avant utilisation. Leur
température optimale de conservation est entre 15-
25°C mais le laboratoire confirme leur stabilité
jusqu’à 40°C (courrier RAL).
Argumentaire de la conclusion : La qualité des réactifs utilisés est maitrisée.
INTERVALLES de REFERENCE et/ou valeurs seuils en fonction des données démographiques (étude
expérimentale indispensable en portée B)
Valeurs de référence Préciser les données fournisseur ou essai sur site
Argumentaire de la conclusion :
DECLARATION d’APTITUDE
Conclusion : méthode conforme utilisée à partir du .15./12/2017….
Autorisée par : S. Houzé, biologiste référent du secteur

Signature

SOUS-PROCESSUS 2 : Goutte épaisse
Portée A ; Portée B (à justifier)
DESCRIPTION DE LA METHODE
Analyte / Mesurande : Hématozoaires responsables du paludisme
Principe de la Méthode : Observation microscopique d’une goutte épaisse colorée
par une solution de Giemsa: recherche et identification
des Plasmodiums. Observation de 1000 leucocytes avant
de rendre un résultat négatif.
Calcul de la parasitémie : nombre de parasites observés
pour 1000 leucocytes comptés.
Type d'échantillon primaire : Sang total
Type de récipient, additifs : Tube avec EDTA ou ACD (acide citrique-dextrose)
Prétraitement de l'échantillon : Etalement d’une goutte épaisse à partir du sang total
sous PSM II
Unités : Nombre de parasites pour 1000 globules blancs (GB)
Critères d’interprétation6 : Négatif si aucun parasite observé après observation de
1000GB
Marquage CE (Oui/Non) : OUI
Codage C.N.Q. (s'il existe) :
Equipement (instrument, analyseur, etc.) : Microscope optique à lumière blanche, Zeiss, objectif à
immersion X100
Référence du réactif : - Giemsa R
Référence : 320310-0125
Fournisseur : RAL Diagnostics
Conditions de conservation: entre 15°C et 25°C
(tolérance jusqu’à 40°C) jusqu’à date de péremption
- Eau du robinet
Fournisseur : ville de Paris
Matériau d'étalonnage (références) : NA
Type d'étalonnage, nombre de niveaux et
NA
valeurs :
MISE EN ŒUVRE
Opérateur(s) qualifié(s) et reconnu(s)
Techniciens, biologistes et internes habilités selon
compétent(s) ayant réalisé la
planning d’astreinte
vérification/validation de méthode :
Procédure de validation/mode opératoire : PN_VAM_P_001 : Procédure validation de méthode
Procédure de gestion de la portée flexible : PN_VAM_P_002 : gestion de la portée flexible
Période d’étude : Méthode utilisée depuis 1990
Etude rétrospective avec exploitations des EEQ depuis
2013
Date de 1ère utilisation : 1990
6
Indiquer les valeurs de référence si différentes en fonction de l’anticoagulant. Tenir compte du sexe, âge…


criticité7 instruction, enregistrement, …)
laboratoire
Identité 4 Formation et information du Gestion des NC :
personnel PN_DYS_P_001 : Procédure de
gestion des non conformités et des
réclamations, de gestion des risques
et du suivi des actions
PN_REC_P_009 : Gestion d'une
non-conformité pré-analytique (NCA)
au laboratoire
PN_REC_M_034 : Gestion des non-
conformités d'accueil en
Parasitologie
Renseignements 3 Information des patients et Instructions de prélèvement : manuel
épidémiologiques préleveurs de prélèvement de l’hôpital Bichat
Résultat du frottis et Logiciel de laboratoire GLIMS
antériorités de demandes
Type de 4 Formation des préleveurs Instructions de prélèvement :
Matière (échantillons)
contenants : catalogue des analyses, feuilles de

Tube EDTA, tube demande des examens de
ACD Parasitologie - mycologie
Nature et volume 3 Contrôle à
de l’échantillon : réception d’acceptation/de PN_PRA_M_028 : pré-analytique
sang total, tube refus du prélèvement : des diagnostics du paludisme
ACD rempli à 75% refus tube sec, et dérogation PN_REC_F_077 : enregistrement
minimum ou EDTA éventuelle si autres des demandes de paludisme
anticoagulants ; non
conformité si délai de Habilitation des agents de la
transmission >2h (urgence) réception
PN_TOUS_E_011 : grille de tutorat
Délai et 4 Gestion logistique (navettes, des agents de réception en
température avant enceintes de transport) : parasitologie
traitement transport par pneumatique PN_GRH_E_786 critères
analytique : <1h ou directement par le d’habilitation des agents de
après prélèvement personnel infirmier des réception
pour respecter délai services de soins PN_GRH_E_233 : évaluation initiale
de rendu (2h) ; des compétences des agents de
transport à réception
température PN_GRH_E_234 : Fiche
ambiante d'évaluation du maintien des
compétences - Agent de réception et
pré-analytique

laboratoire
Conditions de 2 Les prélèvements sont pris PN_TOUS_P_009 : diagnostic du
conservation des en charge dès réception puis paludisme
échantillons (t°, conservés entre 2 et 8°C PN_ANA_M_050 : goutte épaisse
…) : 24h à 20- pendant 30 jours ou avant pour le paludisme
30°C, 72h à + 4°C transmission au CNR PN_VAB_M_090 : validation
Conditions de 2 Paludisme. biologique du diagnostic du
conservation et Les réactifs utilisés pour les paludisme
d’utilisation des colorations sont conservés Enregistrements métrologiques :
réactifs (t°, …) : entre 18°C et 25°C dans les PN_MAI_M_008 : Gestion des
15°-30°C armoires à solvants. unités surveillées et raccordement
Les températures de métrologique des enceintes
conservation des thermostatées
échantillons et des réactifs Relevés des températures
Milieu
sont surveillées à l’aide du ambiance :

logiciel Sirius. PN_MAI_E_016 : Tableau de
Fiche de stress des réactifs relevés manuels des températures
transmises par les PN_MAI_E_085 : Analyse de dérive
fournisseurs. d'une sonde de surveillance
PN_MAI_F_015 : Mode dégradé en
cas de panne des capteurs de
température
Raccordement des enceintes :
PN_MAI_M_028 Gestion et
raccordement métrologique des
Fiches techniques des réactifs :
PN_PREP_DE_018: fiche technique
Giemsa R RAL
Surveillance des 3 Nettoyage quotidien des Enregistrements des
dérives : objectifs, maintenance maintenances des microscopes
- Microscope annuelle des microscopes dans Kalilab
- Lames
d’observation Temps de coloration : 20 Enregistrement des chronomètres
dégraissées minutes dans Kalilab et raccordement
- Chronomètre métrologique des enceintes
thermostatées
Matériel (équipement)
EEQ annuel : Biologie Enregistrement des EEQ dans Glims

perspective ou Kalidiv PN_GCQ_E_053: Recueil individuel
des résultats des EEQ
Suivi du maintien des PN_GRH_E_735 : critères
compétences des habilitation astreinte paludisme.
personnels participant aux PN_GRH_E_489 : fiche d’évaluation
astreintes du diagnostic du di maintien des compétences :
paludisme par lecture des diagnostic du paludisme
lames des EEQ
Maîtrise des équipements : Gestion des stocks de

absence de ruptures consommables : PN_GFO_F_030
Fiche processus -Achats et Gestion
des stocks
Contamination NA tests individuels

laboratoire
Informatique 4 Enregistrement et saisie PN_SIL_M_005 : Qualification des
manuelle systèmes d'informations
PN_REC_F_077 : enregistrement
Traçabilité de l’observateur des demandes de paludisme
et du biologiste valideur sur PN_ANA_F_165 : impression liste
la feuille de paillasse de travail paludisme
PN_TOUS_F_022 : Acquisition des
Transmission des résultats résultats de paludisme dans GLIMS
par téléphone et sur serveur PN_VAB_M_090 : validation
informatique après validation biologique du diagnostic du
biologiques paludisme
Conservation et 2 Les réactifs utilisés pour les PN_GFO_E_045 : fiche de suivi des
conditions colorations sont conservés lots de réactifs Paludisme
d’utilisation entre 18°C et 25°C dans les PN_HSL_F_062 Fiche processus –
armoires à solvants. Hygiène, sécurité et vigilances
Les températures de PN_PIL_F_016 : Organisation de la
conservation des métrologie des laboratoires
échantillons et des réactifs PN_MAI_M_028 Gestion et
sont surveillées à l’aide du raccordement métrologique des
logiciel Sirius. sondes de surveillance
Fiche de stress des réactifs PN_MAI_M_028 Gestion et
transmises par les raccordement métrologique des
Matériel (réactifs)
fournisseurs sondes de surveillance

PN_MAI_E_016 : Tableau de
relevés manuels des températures
Gestion des stocks 3 Gestion des stocks PN_GFO_F_030 : Fiche processus -

Commandes mensuelles Achats et Gestion des stocks
Suivi des réactifs PN_HSL_P_003 : Procédure
réactovigilance
Reconstitution des Dilution du Giemsa avant PN_ANA_M_050 : goutte épaisse
réactifs coloration pour le paludisme
PN_TOUS_E_037 : Suivi du Giemsa
dilué
Qualité de l’eau 3 Mesure du pH (papier pH) Traçabilité des vérifications :
PN_PREP_E_016
Réalisation de la 3 Goutte épaisse réalisée PN_ANA_M_050 : goutte épaisse
Métho
goutte épaisse manuellement sous PSM 2 pour le paludisme

de
selon le mode opératoire

laboratoire
Réalisation de la 4 Après séchage, PN_ANA_M_050 : goutte épaisse
coloration déshémoglobinisation et pour le paludisme
coloration avec le Giemsa R
dilué à 7% dans l’eau du PN_TOUS_E_037 : suivi du Giemsa
robinet dans une boite de dilué
Laveran pendant 20
minutes.
Qualité de la coloration
vérifiée lors de l’observation
microscopique de la goutte
épaisse
2 Observation de 1000 PN_ANA_M_050 : goutte épaisse
Seuil de détection leucocytes. pour le paludisme
Sensibilité  10p/µl PN_VEI_DE_073 : Mise à jour 2017
des RCP 2007 sur la prise en charge
et prévention du paludisme
d'importation
Causes 2 Prélèvement dilué, Formation et habilitation du
d’incertitude de anomalies des globules personnel ; contrôle de la coloration ;
mesure rouges ; coloration de respect des modes opératoires
mauvaise qualité PN_GRH_E_490 : habilitation
Rendu des Délai de rendu des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du

résultats résultats : dans les 2 heures paludisme
suivant la réception du PN_VAB_M_090 : validation
prélèvement en cas de biologique du diagnostic du
diagnostic initial. paludisme
Prestation de Appel systématique des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du

conseil résultats : transmission aux paludisme
prescripteurs pour les PN_VAB_M_090 : validation
prélèvements de l’hôpital biologique du diagnostic du
Bichat ; transmission aux paludisme
laboratoires transmetteurs PN_VAB_M_006 : Validation UF de
pour le GH et les hôpitaux parasitologie
extérieurs.
Traçabilité de la
communication du résultat
dans GLIMS et sur la feuille
de paillasse

laboratoire
Compétence et 4 Diagnostic du paludisme Enregistrements des compétences
maintien de réalisé selon planning du personnel :
compétence du d’astreinte par personnel - dossier d’habilitation
personnel habilité : biologiste, interne PN_GRH_E_487 : fiche de tutorat
ou technicien. astreinte diagnostic du paludisme
Habilitation des personnels : - habilitation des personnels
- formation initiale (reconnaissance de lames)
Main d’œuvre (Personnel)
- maintien des compétences PN_GRH_E_735 : critères

d’habilitation astreinte paludisme
PN_GRH_E_490 : habilitation
initiale des compétences : astreinte
du paludisme
- maintien des compétences / EEQ :
lecture par tout le personnel
individuellement (4/an)
du maintien des compétences :
Traçabilité de l’occupation des
postes de travail : PN_SOI_E_008 :
planning d’astreinte parasitologie

EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) : goutte épaisse
- Qualité de l’étalement après coloration
- Qualité de la coloration : fond clair bleuté sans hématie résiduelle, leucocytes bien colorés
avec noyau foncé
- Reconnaissance des plasmodiums par le noyau foncé et le cytoplasme bleu clair pour les
formes asexuées, présence de pigment selon le stade parasitaire
- Parasitémie rapportée au nombre de leucocytes
- Observation possible d’autres parasites sanguicoles : Trypanosomes, Babesia, microfilaires.
REPETABILITE
Le laboratoire a évalué la répétabilité de la quantification de la parasitémie sur 2 gouttes épaisses lues 5 fois
par un même opérateur
CV (%) retenu
Nombre
type fournisseur
laboratoire (cf.
(N)
source8)
15 à 100% (pour
les techniques
microscopiques,
Gouttes l’observation
épaisses d’une cellule
NA
1712015491 5 194 49 25 supplémentaire
1712003392 5 128 19 15 sur un nombre
de 0 à 2 cellules
entraine un CV
de 100%)
Argumentaire de la conclusion : Le CV est compris entre 15 et 25%, témoigne de la répartition souvent
inhomogène des parasites sur la goutte épaisse. Cette variation n’a pas de conséquence clinique mais doit être
connue afin de l’intégrer lors de la comparaison éventuelle de 2 résultats.
FIDELITE INTERMEDIAIRE
Le laboratoire a évalué la reproductibilité de la quantification de la parasitémie sur 5 gouttes épaisses de

différentes parasitémies lues par 4 opérateurs différentes
Nombre CV (%) retenu par

Ecart- CV CV (%)
Echantillons de valeurs Moyenne
type (%) fournisseur
le laboratoire (cf. Conclusion5
(N) source4)
8
Sociétés savantes, publications (SFBC, GEHT, RICOS, QUALAB, CLIA…). Préciser la référence utilisée.
9
Conforme/non conforme

15 à 100% (pour
Gouttes les techniques
épaisses microscopiques,
196 6 3
1711076512 4 l’observation d’une
172 30 17
1711076632 4 NA cellule Conforme
3 1 35
1712006013 4 supplémentaire sur
23 10 41
1712001988 4 un nombre de 0 à 2
22 2 10
1711091552 4 cellules entraine un
CV de 100%)
Argumentaire de la conclusion : Le CV est compris entre 35 et 3%, fonction de la parasitémie : l’observation d’un
parasite supplémentaire sur la goutte épaisse quand la parasitémie est de 3 entraine un CV mathématique de
35% sans signification clinique. Par contre, l’absence de résultat négatif malgré cette faible parastémie confirme
l’aptitude du laboratoire à faire un diagnostic de paludisme quel que soit l’opérateur.
VARIABILITE INTER-OPERATEURS
Le laboratoire a évalué la reproductibilité de la quantification de la parasitémie sur une goutte épaisse

positive (1712003392) lues par 5 opérateurs différents
Opérateur 1 120 parasites/1000 leucocytes

Argumentaire de la conclusion : La valeur moyenne de la parasitémie est de 128 19 parasites / 1000 leucocytes
avec un CV de 15% pour cette évaluation de la variabilité inter-opérateur. Cette variabilité n’a pas de
conséquence clinique puisque la parasitémie est évaluée sur le frottis pour la prise en charge thérapeutique.

JUSTESSE (à partir des CIQ externalisés)

Nombre Moyenne
Cible Biais (%) Biais (%) Biais (%)
de Valeurs générale
Echantillons (groupe /groupe / moyenne Conclusion5
valeurs Labo
de pairs) de pairs
(toutes
générale Limite4
(N) techniques)
Echantillon
CIQ niveau 1
Echantillon
CIQ niveau 2
Argumentaire de la conclusion : examen microscopique, pas de résultat chiffré
EXACTITUDE (à partir des contrôles externes ponctuels : EEQ/CNQ)

Contrôles quantitatifs ; Contrôles qualitatifs
Biais
(%)
Cible Cible Biais (%) /
/ Biais (%) Conclusion
Echantillons Valeur Labo (groupe de (toutes toute
groupe limite4 5
pairs) techniques) technique
de
pairs
Biologie
prospective
G2015-1A Pos trophozoites Pos trophozoites
G2015-2A Pos trophozoites Pos trophozoites
G2015-3A P gamétocytes P gamétocytes
G2015-4A Négative (NR) Négative
G2016-1A Négatif Négative
A renseigner pour les contrôles Conformes
G2016-2A Pos Pf trophoz. Pos trophozoites
quantitatifs ou lettre A
G2016-3A Non Pf 12/00 Annulée
G2016-4A Négative Annuleé
Kalidiv
2017-1 Pos Pfalciparum Pos Pfalciparum
2017-2 Pos Pvivax Pos Pvivax
2017-3 Pos Pfalciparum Pos Pfalciparum
Argumentaire de la conclusion : résultats des EEQ conformes aux résultats attendus qualitativement
(positif/négatif), et pour l’identification des stades parasitaires. Les programmes d’EEQ n’évaluent pas la
quantification sur goutte épaisse.
SENSIBILITE et SPECIFICITE ANALYTIQUE

Vrais positifs Spécificité, sensibilité, VPN, VPP
Faux positifs
Vrais négatifs
Faux négatifs
En 2016, 1353 GE dont 1233 négatives, 120 positives (dont 12 frottis négatifs et 82 dont les frottis étaient
positifs)
En 2017, 1302 GE dont 1225 négatives, 76 positives (dont 5 frottis négatifs et 41 dont les frottis étaient positifs).
La méthode est corrélée au frottis, confirmant les diagnostics négatifs et confirmant les faibles parasitémies
décelées par le frottis sanguin. Les discordances entre le frottis et la goutte épaisse sont peu nombreuses et
corrélées à la parasitémie.
INCERTITUDE DE MESURE (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :

Méthodologie choisie : analyse des risques (absence d’interférence résiduelle) ; calcul

Exigence de
Incertitudes calculées
performances
Mode de calcul (cf. SH GTA 14) : Formule utilisée Référence
Argumentaire de la conclusion : méthode qualitative ; pas de calcul possible si négatif
LIMITE DE DETECTION (étude expérimentale indispensable en portée B)

Limite de détection : Avec une numération moyenne de leucocytes
estimée à 8G/L, la limite de détection théorique est
de 10 p/µL après observation de 1000 leucocytes.
Les patients ayant le paludisme étant fréquemment
leucopéniques, avec une numération leucocytaire
moyenne de 4.5G/L, la sensibilité est diminuée, de
l’ordre de 20 p/µL.
Argumentaire de la conclusion : résultat suite à l’observation d’un nombre donné de leucocytes dont la répartition
sur la lame n’est pas régulière. Sensibilité fonction de la numération leucocytaire du patient.
COMPARAISON DE METHODES :
Données bibliographiques (fournisseurs, Recommandations 2017 pour la prise en charge du
publications,…) : paludisme d’importation, guides OMS pour le
Méthodes comparées : méthode précédente, autre
méthode utilisée dans le laboratoire, appareils en Frottis : goutte épaisse
miroir ou back-up, EBMD, …
Nombre de mesures : Résultats 2016 et 2017
Intervalle de comparaison adaptée à l’étendue des NA
mesures du laboratoire :
Méthode d'exploitation des résultats : NA
Equation de la droite de régression : NA
Exploitation des résultats de comparaison Comparaison des résultats
(diagramme de différences, concordance
catégorielle) :
En 2016, 1353 GE dont 1233 négatives, 120 positives (dont 12 frottis négatifs et 82 dont les frottis étaient
positifs)
En 2017, 1302 GE dont 1225 négatives, 76 positives (dont 5 frottis négatifs et 41 dont les frottis étaient positifs).
La méthode est corrélée au frottis, confirmant les diagnostics négatifs et confirmant les faibles parasitémies
décelées par le frottis sanguin. Les discordances entre le frottis et la goutte épaisse sont peu nombreuses et
corrélées à la parasitémie
ETENDUE DE MESURE (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour :
troponine, micro albumine, plaquettes, PSA, TSH, …)
Limite de détection : Etude bibliographique (sources et Etude expérimentale (valeurs)
valeurs)
Limite de quantification : Etude bibliographique (sources et Etude expérimentale (valeurs)
valeurs)
Limite supérieure de linéarité : Etude bibliographique (sources et Etude expérimentale (valeurs)
valeurs)
Argumentaire de la conclusion : lecture microscopique, quantification non linéaire. Limite de détection associée à
nos critères de lecture : observation de 1000 leucocytes, soit une limite de détection d’un parasite pour un
volume de sang contenant 1000 leucocytes, soit environ 10 parasites/µl pour une numération leucocytaire
moyenne de 6G/L.

INTERFERENCES (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour : Hémolyse, turbidité, bilirubine,
médicaments, … - à prendre en compte dans les facteurs de variabilité - à évaluer si nécessaire)
Hémolyse Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Turbidité Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Bilirubine, ictère Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Médicaments Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge
… Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge
Argumentaire de la conclusion : L’observation d’une goutte épaisse colorée par le Giemsa n’est pas sensible à
ces interférences.
CONTAMINATION (étude expérimentale indispensable en portée B)

Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par Préciser les données fournisseur ou essai de
exemple Ag HBS, βHCG, …) : surcharge
Inter réactif si nécessaire (par exemple : LDH et Préciser les données fournisseur ou essai sur site
ALAT, cholestérol et phosphate, lipase et
triglycérides, …) :
Argumentaire de la conclusion : tests individuels manuels, pas de contamination possible.
ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS

Paramètres sensibles testés (t°, pH, position sur un Le suivi du pH de l’eau du robinet de la ville de Paris
support, …) montre que celui-ci est stable et dans les limites de
conformité pour la dilution du réactif.
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués, … Stabilité du Giemsa non dilué entre 15 et 25°C, mais
supporte des températures entre 0 et 40°C (courrier
RAL)
Renouvellement du giemsa dilué toutes les 4h
Argumentaire de la conclusion : les réactifs sont stockés et utilisés dans des conditions conformes
INTERVALLES de REFERENCE et/ou valeurs seuils en fonction des données démographiques (étude
expérimentale indispensable en portée B)
Valeurs de référence Préciser les données fournisseur ou essai sur site
DECLARATION d’APTITUDE
Conclusion : méthode conforme utilisée à partir du .15./12/2017.
Autorisée par : Sandrine Houzé, biologiste référent du secteur
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Fiche type de vérification (portée A) / validation

(portée B) d’une méthode de biologie médicale

EXAMEN DE BIOLOGIE MEDICALE

Argumentaire (le cas échéant) :

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 1 sur 25

SOUS-PROCESSUS 1 : Frottis mince coloré au Diff Quick

Portée A ; Portée B (à justifier)

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 2 sur 25

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 3 sur 25

MAITRISE DES RISQUES

Type de 4 Formation des préleveurs Instructions de prélèvement :

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 4 sur 25

transmises par les PN_MAI_E_085 : Analyse de dérive

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 5 sur 25

compétences des habilitation astreinte paludisme.

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 6 sur 25

PN_MAI_E_016 : Tableau de relevés

Gestion des stocks 3 Gestion des stocks PN_GFO_F_030 : Fiche processus -

Reconstitution des Réactifs prêts à l’emploi

Qualité de l’eau 3 mesure du pH (papier pH) Traçabilité des vérifications :

Réalisation de la 4 Fixation du frottis par le PN_ANA_M_049 : paludisme : frottis

RAL 555 selon protocole PN_ANA_P_032 : mode d’emploi du

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 7 sur 25

Prestation de Appel systématique des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 8 sur 25

- maintien des compétences PN_GRH_E_735 : critères

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 9 sur 25

EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE

Le laboratoire a évalué la reproductibilité de la parasitémie à partir de lames réalisées à partir de prélèvements

Opérateurs évalués : techniciens, Résultats individuels des EEQ (4/an) ; 8 à 12 opérateurs :

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 10 sur 25

JUSTESSE (à partir des CIQ externalisés)

EXACTITUDE (à partir des contrôles externes ponctuels : EEQ/CNQ)

Cible Biais (%) Biais (%) / Biais

SENSIBILITE et SPECIFICITE ANALYTIQUE

INCERTITUDE DE MESURE (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 11 sur 25

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 12 sur 25

LIMITE DE DETECTION (étude expérimentale indispensable en portée B)

ETENDUE DE MESURE (étude expérimentale indispensable en portée B)

INTERFERENCES (étude expérimentale indispensable en portée B)

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 13 sur 25

CONTAMINATION (étude expérimentale indispensable en portée B)

ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS

Autorisée par : S. Houzé, biologiste référent du secteur

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 14 sur 25

SOUS-PROCESSUS 2 : Goutte épaisse

Portée A ; Portée B (à justifier)

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 15 sur 25

MAITRISE DES RISQUES

contenants : catalogue des analyses, feuilles de

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 16 sur 25

sont surveillées à l’aide du ambiance :

EEQ annuel : Biologie Enregistrement des EEQ dans Glims

Maîtrise des équipements : Gestion des stocks de

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 17 sur 25

fournisseurs sondes de surveillance

Gestion des stocks 3 Gestion des stocks PN_GFO_F_030 : Fiche processus -

goutte épaisse manuellement sous PSM 2 pour le paludisme

selon le mode opératoire

SH FORM 43 rev 01 – 15 avril 2015 Page 18 sur 25

Rendu des Délai de rendu des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du

Prestation de Appel systématique des PN_TOUS_P_009 : diagnostic du