CI-Procédés industriels et environnement

Méthode d’analyse Microbiologique

Présenté par :
Encadré par :
 EL GHARRAK OUMAYMA
 Mr. GHALIT MOHAMMED
 ZEKRAOUI IDRISS
Année universitaire : 2023/2024
 PLAN
I. Introduction

II. Principe et Objectif

III. Les Étapes de l'Analyse Microbiologique

IV. Les différents types de l'Analyse Microbiologique de l'Eau

V. Conclusion
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INTRODUCTION

L’eau est un élément essentiel au fonctionnement de tout écosystème, mais aussi des
activités humaines (agriculture, industrie) et de notre vie de tous les jours (usage
domestique, loisirs).
La contamination microbiologique de l’eau peut être directe ou indirecte par les
excrétas humain ou d’animaux et surtout de la contamination fécale.
L'analyse microbiologique de l'eau est une procédure vitale utilisée pour évaluer la
qualité de l'eau en termes de contamination bactérienne et microbienne.
Elle est essentielle pour garantir la sécurité de l'eau potable, la protection de
l'environnement aquatique, et la prévention de maladies liées à l'eau.

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Principe et Objectif

Le principe de la méthode d'analyse microbiologique de l'eau repose sur la

détection et la quantification des micro-organismes présents dans l'échantillon
d'eau.

L'objectif principal est d'identifier la présence de bactéries indicatrices de la

qualité de l'eau, qui peuvent signaler une contamination microbiologique de l'eau
potable, tels que les coliformes fécaux, Escherichia coli, les virus pathogènes et
d'autres micro-organismes.

Ces méthodes sont régulièrement utilisées par les autorités de santé publique,
les laboratoires de traitement de l'eau et les organismes de réglementation pour
s'assurer que l'eau potable est propre et sans danger pour la consommation
humaine.
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Étapes de l'Analyse Microbiologique

1. Prélèvement de l'échantillon
 Utilisation de récipients stériles pour éviter la contamination.
 Prélèvement à un endroit représentatif de la source ou du réseau d'eau.

2. Filtration
 L'échantillon peut être filtré pour
éliminer les particules en
suspension et les impuretés.
 Des membranes filtrantes de taille
spécifique (généralement 0,45
µm) sont utilisées pour retenir les
bactéries.

Schéma explicatif de la filtration 4

 Étapes de l'Analyse Microbiologique

3. Incubation
 Les membranes filtrantes ou l'échantillon lui-même sont placés dans des milieux de culture spécifiques.
Cette étape permet de donner le temps aux micro-organismes de se multiplier et de former des colonies
visibles.
• Les milieux de cultures :

• Milieu Slanetz : c’est un milieu sélectif et de

dénombrement des entérocoques intestinaux.
• Milieu Tergitol : c’est un milieu sélectif de
dénombrement des coliformes.
• La gélose nutritive : c’est un milieu nutritif pour les
germes totaux qui n’a pas des exigences particulières.

 Incubation à des températures appropriées (souvent 35-37 °C) pendant un temps défini (généralement 18-
24 heures).
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 Étapes de l'Analyse Microbiologique
4. Lecture des Résultats
 À la fin de l'incubation, les milieux de culture sont examinés pour détecter la croissance bactérienne.
 Les caractéristiques des colonies (taille, couleur, forme) peuvent donner des indices sur les types de micro-
organismes présents.

• Les coliformes fécaux présentent • Les coliformes totaux

des colonies de coloration jaune au présentent des colonies de
orangée à l’intérieur d’un halo coloration jaune sur le milieu
jaune visible sur le milieu Tergitol Tergitol à 37°C.
à 44°C.

• Les entérocoques intestinaux

• Germes totaux présentent
présentent des petites colonies
des colonies de
rouge brique sur milieu
coloration blanche.
Slanetz à 37°C.

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Étapes de l'Analyse Microbiologique

5-Analyse et Rapport des résultats

 Interpréter les résultats pour déterminer la qualité microbiologique de l'eau.
 Comparer les données obtenues aux normes et aux critères de qualité établis.
 Les résultats de l'analyse sont rapportés en termes d'unités formant colonies (UFC) par unité de
volume d'eau.
 Documenter les résultats dans un rapport complet.
 Si nécessaire, recommander des mesures correctives ou des actions pour garantir la sécurité de l'eau.

Ces étapes générales constituent la base de l'analyse microbiologique de l'eau, mais les
détails précis et les méthodes spécifiques peuvent varier en fonction des objectifs de
l'analyse, des réglementations en vigueur, et des micro-organismes ciblés.

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Les différents types de l'Analyse Microbiologique de l'Eau

1-principe du contrôle sanitaire

L’eau destinée à la consommation humaine ne doit pas nuire à la santé des

consommateurs, elle doit donc être exempte de tout micro-organisme pathogène.

Rechercher l’ensemble des germes pathogènes (bactéries, virus, parasites) ;

 leur recherche est souvent complexe et laborieuse, certaines ne sont réalisables

que par des laboratoires haute­ment spécialisés.
 leur présence est irrégulière et aléatoire.

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Les différents types de l'Analyse Microbiologique de l'Eau

2-les analyses bactériologiques

Les laboratoires disposent de méthodes normalisées pour répondre au

besoin du contrôle sanitaire.
Le dénombrement des germes totaux s’effectue par incorporation d’un
faible volume d’échantillon en milieu solide nutritif.
Pour les germes indicateurs, les méthodes les plus usitées sont les méthodes
par filtration sur membrane puis dépôt de celle-ci sur un milieu de culture
gélosé spécifique ou adapté à la bactérie recherchée.
Le milieu est incubé selon des conditions optimales de croissance, en
Dénombrement des coliformes totaux
termes de température et de temps.
sur membrane filtrante

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Les différents types de l'Analyse Microbiologique de l'Eau

3-. les analyses virologiques

La méthode la plus utilisée consiste à dénombrer les entérovirus.

Une concentration préliminaire est indispensable. Les techniques les plus employées sont la filtration ou
l’ultrafiltration sur membranes, les méthodes d’adsorption-élution sur différents supports (nitrate de cellu­
lose, cartouche en microfibre de verre, poudre de verre), les méthodes de floculation organique.

La plupart des virus habituellement recherchés dans le milieu hydrique peuvent être isolés sur différents
systèmes cellulaires.

La probabilité d’isoler un virus aug­mente avec le nombre de systèmes cellulaires utilisés. Il est ainsi
recommandé d’employer au moins deux systèmes différents.

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 Les différents types de l'Analyse Microbiologique de l'Eau

4-les techniques de biologie moléculaire

Appliquées au contrôle sanitaire de l’eau potable, les techniques de détection moléculaire
devraient cons­tituer une révolution dans le domaine de l’analyse et permettre d’assurer une
surveillance plus complète et plus réactive de la qualité microbiologique de l’eau. Seules
quelques applications existent à ce jour mais de nombreux programmes de recherche et
développement sont en cours.
Parmi les différentes techniques moléculaires, la technique PCR (Polymerase Chain
Reaction) constitue l’un des outils de diagnostic les plus prometteurs. Cette étape
d’amplification génique consiste à multiplier près d’un million de fois l’ADN cible du
micro-organisme recherché, il n’est donc plus besoin de cultiver les bactéries sur boîtes de
pétri ou d’isoler les virus par culture cellulaire. Pour mettre en évidence la viabilité des
micro-organismes et s’assurer qu’ils ne sont pas « morts », les chercheurs utilisent la
technique de RT- PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction) qui cible les
molécules d’ARN, dont la présence témoigne d’une activité métabolique des cellules.
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Conclusion

Des dizaines de milliers d'analyses microbiologiques de l'eau, Les laboratoires d'unité de

production contrôlent la qualité microbiologique des matières premières, l'efficacité des procédés
de traitement, un certain nombre de points de contrôle dans les chaînes de fabrication ainsi que la
qualité des produits finis. Les laboratoires publics surveillent la qualité des produits alimentaires,
de l'eau potable et des eaux destinées aux baignades et aux activités de loisirs, afin de déterminer si
elle satisfait aux réglementations nationales ou internationales.

Dans ce contexte, la mise en place de procédures d'assurance et de contrôle qualité, incluant

notamment l'utilisation de matériaux de référence microbiologiques, joue un rôle fondamental dans
la fiabilité et la traçabilité des résultats ainsi que dans l'accréditation des laboratoires.

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