UNIVERSITE DE DOUALA DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE

FACULTE DES SCIENCES UE BCH 336

MICROBIOLOGIE
2022/2023
Barrons la route au COVID-19
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 PREAMBULE
Microbes: organismes unicellulaires ou multicellulaires
microscopiques. Ils peuvent être ubiquistes (organisme /
environs)

Objectif :
Connaitre et expliquer les
mécanismes
physiologiques et la
systématique chez les
bactéries, champignons
et virus.
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Le Microbiologiste

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Sécurité du laboratoire de microbiologie

4
5
Niveaux de sécurité des laboratoires

6
Niveaux de sécurité des laboratoires

7
Matériel

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I-Culture microbienne

• Un milieu de culture microbien est un support permettant la

multiplication des cellules de microorganismes (bactérie,
levure, moisissure) pour leur étude…
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 Le milieu….
• Milieu minimum ou milieu défini: milieu comportant les éléments
chimiques strictement nécessaires à la croissance microbienne, sous une
forme utilisable par des microorganismes n'ayant pas d'exigence particulière.

Composition:
• une source de carbone et d'énergie, généralement le glucose ;
• une source de potassium et de phosphore : K2HPO4 ;
• une source d'azote et de soufre : (NH4)2SO4 ;
• une source de magnésium : MgCl2 ;
• une source de calcium : CaCl2 ;
• une source de fer : citrate de fer (le citrate maintient le fer en solution) ;
• une source d'oligo-éléments : sels de Cu, Zn, Co, Ni, B, Ti ;
• une source d'eau, indispensable à toute forme de vie: on utilise l'eau distillée
(stérile) ;
• un tampon pH : il permet de maintenir un pH correct voire optimum:
KH2PO4 par exemple.
En l'absence de l'un de ces composants, les microorganismes ne se développent pas, car
ils ne peuvent synthétiser ces produits. L'ajout de facteurs de croissance appropriés
permet aux espèces exigeantes de se développer.
10
 Le milieu….

Milieux synthétiques: préparés exclusivement avec des produits chimiques

purs, sont de composition bien définie et constituent le milieu de culture
idéal. Ce type de milieu permet d'obtenir des résultats comparables et de
déceler avec précision les modifications qu'il subit au cours du développement
microbien. Ils conviennent surtout aux moisissures (champignons
microscopiques) mais fort peu aux bactéries.

Milieux complexes : dont on ne connaît que partiellement la composition.

Peuvent contenir des extraits de levure (cellule de levure déshydratée et
lysées) qui fournissent une source d'acide aminé de vitamine et d'azote, des
extraits de malt apportant une source de carbone, des peptones (protéine
animale, de poisson, de caséine de lait) source d'azote organique qui intéresse
les individus hétérotrophes. (Ex. bouillon nutritif, bouillon au soja.).

Milieux semi-synthétiques
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https://youtu.be/of1nflZOD_M https://youtu.be/cneascR3OEc
Le milieu…..
• Milieu empirique: contient des produits d'origine naturelle et dont on ne connaît pas
exactement la composition. Ex. Cœur-cervelle
• Milieu sélectif: permet uniquement la culture de certains genres microbiens ; pour cela
sont ajoutés des éléments qui inhibent la croissance des micro-organismes indésirables
Ex. SS, Sabouraud
• Milieu enrichi: contiennent, outre les composants de base, des composants
indispensables aux bactéries, que celles-ci ne peuvent pas synthétiser. Ce sont des
milieux utilisés pour l'obtention des bactéries dites exigeantes et auxotrophes. Ex.
BP(Baird-Parker, sélectif et différentiel pr S. aureus), gélose au sang frais
• Milieu différentiel ou indicateur: permet de distinguer deux types de microorganismes
se développant dans un même milieu, il met en évidence certaines caractéristiques
biochimiques des microorganismes (principalement l'aptitude à dégrader un substrat) en
présence d'indicateur(s) de la réaction chimique (indicateurs colorés de pH ou d'oxydo-
réduction: rouge neutre, éosine, bleu de méthylène, …). Ex. Mc Conkey, Chapman
• Milieu chromogène (ou discriminant): peut être sélectif ou non. Son principe repose sur
la présence d'un ou plusieurs substrat(s) couplé(s) à une molécule chromogène. Lorsque
ce substrat est métabolisé par une enzyme microbienne spécifique, le chromogène
associé prend une couleur particulière (devient un chromophore) directement lisible sur
la colonie. Si l'enzyme n'existe que chez une espèce bactérienne donnée, l'identification
est immédiate. Ex CPS (ex. infections urinaires à E. coli), MRSA (Chromagar), SM2, CAN2,
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Géloses de culture

13
Géloses et bouillons…

14
II-Ensemencement

15
Ensemencement

16
Ensemencement https://youtu.be/pLm_R7czwXw

17
Ensemencement

18
Ensemencement

19
20
III- Numération

21
Numération

22
Numération

23
 VIROLOGIE

Diagnostique en Double
Immodiffusion des maladie virales

Université de Douala
2022 – 2023
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 Objectifs
 Définir
les différentes méthodes
diagnostiques des maladies virales

 Acquisition
des connaissances pour
effectuer des tests rapides VIH

25
 Les techniques
d’identification des
virus

Personnel Agents de santé Conseillers 26

De labo
• Microscope électronique à balayage

SRA
VIH SIDA EBOLA COVID 19
• L’identification du matériel génétique (PCR)

• La culture (aspects caractéristiques)

• L’identification des protéines spécifiques

(TDR= Objectif du TP)
Personnel Agents de santé Conseillers 27
De labo
Test de dépistage rapide du VIH:
avantages

 Augmentation de l’accès à la prévention et les

interventions en PTME (Prévention de la transmission de la mère à l’enfant)
 Augmentation du nombre croissant des sites de
dépistage
 Faire le counseling et dépistage le même jour
 Simple et facile à utiliser
 Résultat obtenu en moins de 30 minutes

Personnel Agents de santé Conseillers 28

De labo
Test de dépistage rapide du VIH:
avantages (suite)
La majorité des tests ne doit être conservée
au frais

Peu ou pas d’équipement requis

Un minimum de compétence technique

Personnel Agents de santé Conseillers 29

De labo
Test de dépistage rapide du VIH :
Inconvénients
Variation dans la lecture et l’interprétation
des résultats

Stabilité des résultats limitée

Variation de la performance du test selon le

produit

Personnel Agents de santé Conseillers 30

De labo
 Liquides biologiques utilisés
pour les tests rapides de VIH
 Sérum

Plasma

Sang total

Sécrétions orales

Personnel Agents de santé Conseillers 31

De labo
 Les trois types de test
rapide du VIH
Immuno-concentration (Flux vertical)

Immuno-chromatographie (Flux latéral)

Agglutination de particules

Personnel Agents de santé Conseillers 32

De labo
Principe de l’immuno-
concentration
Les anticorps anti-VIH se lient sur les
antigènes peptidiques du VIH et forment
une tache colorée
Contrôle interne
Peptide VIH-1

peptide VIH-2

Personnel Agents de santé Conseillers 33

De labo
Tests Basés sur l’immuno-
concentration
Test à flux vertical:
Plusieurs taches
Génie II Vue de dessus

Vue de côté

Personnel Agents de santé Conseillers 34

De labo
Lecture des résultats: Genie II
Nous ne pouv ons pas afficher l’image. Nous ne pouv ons pas afficher l’image.

Non-reactive Reactive
Personnel Agents de santé Conseillers 35
De labo
 Principe de l’immuno-
chromatographie

Ajouter
L’échantillon Ligne Ligne de
Conjugué contrôle
de test

Anticorps IgG Or colloidal Antigène anticorps

Anticorps anti- VIH conjugué à Anti-IgG/Or
VIH
l’antigène du VIH

Personnel Agents de santé Conseillers 36

De labo
Tests Basés sur l’immuno-
chromatographie
Exemples de tests à
flux latéral:
Determine Bande de contrôle

Hema-Strip Antigène VIH

OraQuick
Unigold
Nous ne pouv ons pas
afficher l’image. Nous
ne
pouv
ons

Zone de conjugaison
pas
affich
er
l’ima
ge.

des réactifs

Specimen Flux

Personnel Agents de santé Conseillers 37

De labo
Lecture des résultats: Determine
Nous ne pouv ons pas afficher l’image.

Non
Réactif

Réactif

Réactif

Zone de dépôt Ligne de Ligne de

de l’échantillon test contrôle
Personnel Agents de santé Conseillers 38
De labo
Lecture des résultats: OraQuick

Nous ne pouv ons pas afficher l’image.

Non
Réactif
Réactif

Personnel Agents de santé Conseillers 39

De labo
Principe d’agglutination de
particules
Les anticorps anti-VIH s’attachent aux
antigènes fixés sur des paticules de
latex.

Antigène

Anticorps

Personnel Agents de santé Conseillers 40

De labo
Tests basés sur l’agglutination

Appareils d’agglutination
:
Capillus
Serodia

Personnel Agents de santé Conseillers 41

De labo
Lecture des résultats: Capillus

Non
Réactif

Faiblement
Réactif

Fortement
Réactif

42
Personnel Agents de santé Conseillers
De labo
Trois résultats possibles
pour les tests unitaires rapides de détection
d’anticorps anti VIH

Réactif https://youtu.be/iN1P2y36vow
Bande de test
Bande de contrôle
Non Réactif
Bande de contrôle uniquement
Invalide
 Absence de bande de contrôle
Test non valide. Reprendre le test.
Personnel Agents de santé Conseillers 43
De labo
 Exercice
• Pourquoi d’après vous les méthodes standard de
multiplication et de détection des bactéries ou
des fonges ne peuvent-elles s’appliquer aux
virus?

• Comparées aux techniques de dénombrement

des bactéries, les TDR peuvent-ils jouer le même
rôle pour évaluer la charge virale d’un
échantillon? Une méthode est-elle plus
appropriée? Si oui, laquelle?
https://youtu.be/ThG_02miq-4

Personnel Agents de santé Conseillers 44

De labo