La culture de la bactérie

La culture de la bactérie responsable de la tuberculose, Mycobacterium tuberculosis,

est une technique essentielle pour diagnostiquer l'infection et pour déterminer la
sensibilité aux antibiotiques. La culture permet de cultiver et de faire se multiplier les
bactéries dans un milieu de culture approprié, ce qui permet ensuite de les identifier
et de tester leur résistance aux médicaments.

Voici les étapes générales impliquées dans la culture de la bactérie de la tuberculose

:

1.Prélèvement de l'échantillon : Un échantillon clinique est prélevé, généralement du

crachat, mais aussi parfois du sang ou d'autres fluides corporels, chez une personne
suspectée d'avoir une infection à la tuberculose.

2.Préparation de l'échantillon : L'échantillon prélevé est traité pour éliminer les

substances indésirables, telles que les cellules et les particules non bactériennes.
Cela peut impliquer des étapes de décontamination et de concentration de
l'échantillon.

3.Inoculation sur un milieu de culture : L'échantillon préparé est ensuite inoculé sur
un milieu de culture spécifique pour les mycobactéries, tel que le milieu de
Löwenstein-Jensen. Ce milieu contient des nutriments et des substances favorables
à la croissance des bactéries de la tuberculose.

4.Incubation : Les plaques ou les tubes contenant les échantillons inoculés sont
ensuite incubés à une température optimale, généralement autour de 37 degrés
Celsius, pendant plusieurs semaines. Les bactéries de la tuberculose se développent
lentement et nécessitent donc une période d'incubation prolongée.

5.Observation et identification : Après l'incubation, les colonies de bactéries qui se

sont développées sont observées. Les colonies caractéristiques de Mycobacterium
tuberculosis sont généralement rugueuses, crémeuses ou jaunâtres. Des tests
biochimiques et des colorations spécifiques, tels que la coloration de Ziehl-Neelsen
ou la coloration à l'auramine-rhodamine, peuvent être utilisés pour confirmer
l'identification de la bactérie.

6.Test de sensibilité aux médicaments : Une fois que la culture de M. tuberculosis a

été confirmée, des tests de sensibilité aux antibiotiques, tels que le test de proportion
ou le test de sensibilité moléculaire, peuvent être réalisés pour déterminer quels
médicaments sont efficaces contre la souche spécifique isolée. Cela aide les
médecins à choisir le traitement approprié pour le patient.

Il est important de noter que la culture de M. tuberculosis est une technique

spécialisée qui nécessite un laboratoire bien équipé et des conditions de sécurité
appropriées en raison de la nature infectieuse de la bactérie.
 Le milieu de culture

Le milieu de culture le plus couramment utilisé pour la culture de Mycobacterium

tuberculosis, la bactérie responsable de la tuberculose, est le milieu de Löwenstein-
Jensen. Ce milieu sélectif et enrichi fournit les nutriments essentiels à la croissance
des bactéries de la tuberculose et inhibe la croissance d'autres organismes
indésirables.

Voici les principaux composants du milieu de Löwenstein-Jensen :

Ovoglobuline : C'est une source de protéines qui fournit les acides aminés
nécessaires à la croissance des bactéries de la tuberculose.

Extrait de malte : Il fournit des nutriments supplémentaires, notamment des sucres,

des vitamines et des sels minéraux.

Glycérol : Il sert de source de carbone pour les bactéries.

Asparagine : C'est une source d'azote pour les bactéries.

Citrate de fer : Il fournit du fer, un cofacteur essentiel pour la croissance bactérienne.

Sulfate de magnésium : Il fournit du magnésium, un autre élément essentiel pour la

croissance des bactéries.

En plus de ces composants, le milieu de Löwenstein-Jensen contient également des

inhibiteurs sélectifs, tels que l'acide malachite verte, l'acide pénicillique et des
antibiotiques tels que la nalidixique, qui empêchent la croissance d'autres bactéries
non liées à la tuberculose.

Après la préparation du milieu de Löwenstein-Jensen, il est généralement versé dans

des tubes ou des plaques de Petri, puis stérilisé avant d'être utilisé pour l'inoculation
des échantillons cliniques prélevés. Les cultures sont ensuite incubées à une
température optimale d'environ 37 degrés Celsius pendant plusieurs semaines,
permettant aux bactéries de la tuberculose de se développer lentement et de former
des colonies caractéristiques.
 L'antibiogramme
L'antibiogramme est une méthode utilisée pour déterminer la sensibilité d'une souche
bactérienne aux différents antibiotiques. Cependant, il convient de noter que
Mycobacterium tuberculosis, la bactérie responsable de la tuberculose, présente
certaines particularités qui rendent l'antibiogramme moins couramment utilisé par
rapport à d'autres bactéries.

La culture de M. tuberculosis est généralement utilisée pour déterminer la sensibilité

aux antibiotiques. Les souches isolées sont testées contre différents médicaments
pour déterminer lesquels sont efficaces pour traiter l'infection. Les méthodes
couramment utilisées pour l'antibiogramme de M. tuberculosis comprennent le test
de proportion et les tests de sensibilité moléculaire.

Test de proportion : Ce test consiste à cultiver les bactéries en présence

d'antibiotiques à des concentrations différentes. Les résultats sont ensuite évalués
pour déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI), c'est-à-dire la
concentration la plus faible d'antibiotique qui inhibe la croissance bactérienne. Les
concentrations minimales inhibitrices sont comparées à des seuils spécifiques pour
déterminer si la souche est résistante, intermédiaire ou sensible à l'antibiotique testé.

Tests de sensibilité moléculaire : Ces tests utilisent des techniques de biologie

moléculaire pour détecter des mutations spécifiques dans les gènes de résistance
aux antibiotiques de M. tuberculosis. Par exemple, le test de résistance aux
mutations de la région codante de la gyrase A (quinolones) et le test de résistance
aux mutations du gène rpoB (rifampicine) sont utilisés pour détecter la résistance aux
antibiotiques couramment utilisés dans le traitement de la tuberculose.

Il est important de noter que M. tuberculosis est connue pour développer des
résistances aux antibiotiques, en particulier dans les cas de tuberculose
multirésistante (TB-MDR) et de tuberculose ultra-résistante (TB-XDR). La
détermination de la sensibilité aux antibiotiques est cruciale pour guider le choix des
médicaments anti-tuberculeux appropriés et pour élaborer des schémas
thérapeutiques efficaces contre l'infection.

L'interprétation des résultats de l'antibiogramme de M. tuberculosis doit être

effectuée par des experts et être basée sur les recommandations et les seuils de
sensibilité établis par des organismes de référence, tels que l'Organisation mondiale
de la santé (OMS) et les autorités sanitaires nationales