T.

P n°1 : Microbiologie Appliquée:

ANTIBIOGRAMME

Réalisé par :
Jebari Sarra
Agrebi Mohamed Elyes
BIO2 GROUPE 1
BIO 2/1 Agrebi Mohamed Elyes & Jebari Sarra

Objectif :
- Tester la sensibilité d’une souche bactérienne vis-à-vis d’une collection
d’antibiotiques.

Principe :
- Méthode de diffusion sur disque et la méthode de dilution.

Matériel :
- Deux boites de gélose de Mueller-Hinton
- Pipette Pasteur.
- Poires
- Culture E. coli (jeune) dans un milieu LB
- Disque d’antibiotiques
- Pince stérile.
Manipulation :
Methode de diffusion sur disque :
- On verse dans chaque boite de pétri 1ml de suspension bactérienne d’E. coli,
avec une pipette Pasteur de manière à inonder toute la surface de la gélose
afin d’obtenir une grande quantité de la bactérie à la surface. C’est
l’ensemencement par inondation.
- Aspirer le surplus de la culture avec une autre pipette Pasteur stérile.
- On laisse sécher la suspension pendant environ 30’ à Température ambiante.
- A l’aide d’une pince stérile, on prélève un disque antibiotique et le disposer au
centre d’une boite de pétri, puis l’appuyer légèrement pour l’enfoncer dans la
gélose. Renouveler l’opération pour les 3 antibiotiques, en prenant soin de ne
pas toucher la surface de la gélose. La disposition des antibiotiques doit être
dispersé en formant un triangle au centre et loin des bords.
- La deuxième boite de gélose servira comme témoin, sans antibiotique.
- On place les boites dans une étuve pendant 24h à 37°C, le temps que la
bactérie E. Coli se développe.
- On observe les zones d’inhibition autour de chaque antibiotique et comparer
avec le tableau de référence.
Methode de dilution :
- Les méthodes de dilution sont effectuées en milieu liquide ou en milieu solide.
Elles consistent à mettre un inoculum bactérien standardisé au contact de
concentrations croissantes. En milieu liquide, l’inoculum bactérien est distribué
dans une série de tubes (méthode de macrodilution) contenant l’antibiotique.
Après incubation, la CMI est indiquée par le tube ou la cupule qui contient la

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plus faible concentration d’antibiotique où aucune croissance n’est visible.

La CMB constitue la concentration minimale bactéricide, la plus faible
concentration capable de tuer la bactérie. Pour la déterminer, prendre 100µl
du tube présentant la CMI et l’ensemencer dans un milieu de culture adéquat
au développement de la bactérie à tester puis étaler et incuber pendant 24h,
l’apparition d’une seule colonie indique que la CMB est supérieure à la CMI. En
cas d’absence de colonie CMI=CMB.
Lecture de résultats :
1/ méthode de diffusion sur disque :
Selon les zones observées et suivant le tableau de référence : trois catégories
cliniques ont été retenues pour l’interprétation des tests de sensibilité in vitro :
Sensible (S), Résistant (R) et Intermédiaire (I).
- Les souches catégorisées S : sont celles pour lesquelles la probabilité de
succès thérapeutique est forte dans le cas d'un traitement par voie systémique
avec la posologie recommandée dans le résumé des caractéristiques du produit
(RCP).
- Les souches catégorisées R : sont celles pour lesquelles il existe une forte
probabilité d’échec thérapeutique quels que soient le type de traitement et la
dose d’antibiotique utilisée.
- Les souches catégorisées I : sont celles pour lesquelles le succès
thérapeutique est imprévisible. Ces souches forment un ensemble hétérogène
pour lequel les résultats obtenus in vitro ne sont pas prédictifs d’un succès
thérapeutique.
1/ méthode de dilution :
- Déterminer CMI et CMB.
Les résultats : La bactérie qu’on a testé forme un cercle du diamètre 15mm
autour du disque de l’Oxacilline et 10mm autour de la Néomycine.
=> D’après le tableau de référence, on déduit que cette bactérie est résistante
contre ces deux antibiotiques.

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Antibiotiques
Les différentes familles d’antibiotiques :
Les antibiotiques sont classés en familles selon leurs modes d’action. Nous
distinguons :
- Les inhibiteurs de la synthèse des enveloppes bactérienne.
- Les inhibiteurs de la synthèse des protéines.
- Les inhibiteurs de la synthèse des acides nucléiques.
- Les inhibiteurs de la synthèse de l’acide folique.

1- Les inhibiteurs de la synthèse des enveloppes bactérienne :

Comprend les Bêta-lactamines tel que : les pénicillines, les céphalosporines
et les carbapénèmes.

• Les pénicillines : Ce sont les antibiotiques les plus anciens. Ils se

divisent en plusieurs catégories en fonction de leur spectre d’activité :
les pénicillines de type G sont actives sur une moins grande variété
de germes que les pénicillines de type A (amoxicilline, ampicilline).
L’amoxicilline est parfois associé à l’acide clavulanique qui permet
d’empêcher sa destruction par certaines bactéries.
Ces antibiotiques sont largement utilisés en médecine générale,
notamment pour traiter les infections des poumons, des bronches, du
nez, de la gorge ou des oreilles, de l'appareil digestif ou urinaire,
des voies génitales, des gencives et des dents.
• Les céphalosporines : Ce sont des antibiotiques proches des pénicillines
(elles ont un mécanisme d’action semblable). Elles sont divisées en
trois groupes dits de 1ère, 2ème ou 3ème génération. Elles sont
utilisées par voie orale dans le traitement de nombreuses maladies
infectieuses, notamment des poumons, des bronches, dessinus, de la
gorge ou des oreilles, et de l'appareil urinaire. Les céphalosporines
injectables sont surtout réservées à une utilisation hospitalière.
• Les carbapénèmes : Ces antibiotiques sont prescrits et, pour certains,
réservés à l’hôpital. Ils sont actifs sur certaines bactéries devenues
résistantes aux autres pénicillines. Ils sont utilisés en injection IV.

2- Les inhibiteurs de la synthèse des protéines :

Comprend principalement les aminosides, les cyclines et les macrolides.

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• Les aminosides : Ces antibiotiques sont actifs sur les bactéries gram
positif, notamment les staphylocoques. Ils ne passent pratiquement pas
à travers la paroi de l’intestin et sont donc administrés
par voie injectable. Ils sont indiqués dans le traitement de diverses
maladies infectieuses, notamment urinaires et rénales car ils sont
éliminés sous forme active par les reins. Les antibiotiques de cette
famille peuvent être toxiques pour l’oreille interne ou pour les reins. Ces
effets ont surtout été observés en cas de doses trop élevées ou
d’insuffisance rénale préexistante.
• Les cyclines : Ce sont des antibiotiques qui inhibent la synthèse des
protéines des bactéries. Elles sont actives sur différents germes,
notamment les chlamydies et les mycoplasmes, des bactéries
particulières qui ne se multiplient qu’à l’intérieur des cellules. Ils sont
indiqués dans diverses maladies infectieuses, notamment respiratoires et
génitales, et dans le traitement de l’acné (souvent pendant plusieurs
mois). La minocycline est une cycline qui peut être à l'origine de
réactions allergiques graves. Son utilisation est réservée au traitement
des infections résistantes aux autres cyclines et pour lesquelles aucun
autre antibiotique ne convient.
• Les macrolides : Ces antibiotiques sont actifs sur certaines bactéries gram
positif. Ils sont indiqués dans les infections du nez, de la gorge et des
oreilles (notamment lorsque les pénicillines ne peuvent pas être
utilisées), ainsi que des infections des bronches et des poumons, de la
peau, des organes génitaux et de la bouche. Certains macrolides,
notamment l’érythromycine, exposent à un risque d’interactions
médicamenteuses avec de nombreux médicaments d’utilisation
courante. L’utilisation de certains macrolides est possible pendant la
grossesse. Leurs effets indésirables sont surtout digestifs.

3- Les inhibiteurs de la synthèse des acides nucléiques :

Comprend principalement les quinolones.
• Les fluoroquinolones : Disponibles depuis plus de 30 ans, les
fluoroquinolones sont des antibiotiques puissants et très largement
utilisés. En 2019, la mise en évidence d’un risque d’effets indésirables
très rares, mais graves, a conduit les autorités de santé à restreindre
leur usage par voie générale (voie orale ou injections) aux situations
où elles sont indispensables. Cette restriction ne concerne pas les
crèmes, pommades ou collyres.
4- Les inhibiteurs de la synthèse de l’acide folique :
Comprend principalement les sulfamides :

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Ce sont une classe d’antibiotiques efficaces contre de nombreuses bactéries

Gram positives et Gram négatives. Certains sulfamides sont appliqués
directement sur la peau (localement) pour traiter les brûlures et les
infections cutanées, vaginales et oculaires.
Ils agissent en empêchant les bactéries de produire une forme d’acide folique
dont elles ont besoin pour se développer et se multiplier.

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