Abg STD Final

ANTIBIOGRAMME
STANDARD
1
PLAN
INTRODUCTION
I. Rappels
II. Réalisation de l’antibiogramme
III. Contrôle qualité
IV. Interprétation de l’antibiogramme
V. Limites et causes d’erreurs
Conclusion
2
INTRODUCTION:
1. Définition :
- Etude in vitro de l’action d’un ATB sur une souche bactérienne,

permettant de déterminer la sensibilité de la bactérie à l’ATB en cause.
- Consiste à étudier la croissance bactérienne face à un gradient de

concentration d’ATB .
3
INTRODUCTION:
2. Intérêt :
- Epidémiologique : Surveillance des résistances bactériennes aux

antibiotiques  Évolution des spectres cliniques des antibiotiques
- Diagnostic : l’identification du germe par la mise en évidence de
résistances naturelles.
- Thérapeutique : Orientation du clinicien dans le choix d’un
antibiotique pour traiter une infection bactérienne
4
I. Rappels
5
I. Rappels
1. Mécanisme d’action des antibiotiques :
6
I. Rappels
2. Résistance bactérienne aux antibiotiques :
- Croissance d’une bactérie , en présence d’une concentration

d’antibiotique plus élevée que celle qui inhibe les autres souches de la
même espèce .
- Deux types de résistances : Naturelle et Acquise .
7
I. Rappels
2. Résistance bactérienne aux antibiotiques :
• Naturelle : • Acquise:
- Innée - Propre à certaines souches d’une espèce
- - Support : chromosome , extra-chromosome

Propre à une espèce
- Phénotype Résistant
- Support : chromosome
- Fréquente
- Phénotype sauvage
- Rare
8
I. Rappels
3. Mécanismes de résistances :
9
II. Réalisation de
l’antibiogramme standard
10
II. Réalisation de l’antibiogramme standard
• Méthode de Kirby-Bauer (recommandée par l’OMS)
• Méthode de diffusion sur gélose
• Permet de mesurer les diamètres d’inhibition de la croissance d’une

bactérie autour d’un disque imprègné d’antibiotique et de les comparer
aux diamètres pré établis .
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1. Principe:
- Des disques imprégnés d’antibiotiques sont déposés à la surface d’un milieu de

culture standardisé , préalablement ensemencé avec un inoculum calibré de la
bactérie à tester.
- Le diamètre de la zone d’inhibition est proportionnel à la sensibilité de la

bactérie testée.
- Catégorisation clinique (résistant, intermédiaire, sensible)

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2. Choix du milieu :
- Gélose Mueller-Hinton (MH) : Milieu standardisé de 4 mm d’épaisseur.
- Additionné de 5 % de sang de cheval ou de mouton pour les bactéries

exigeantes.
- pH neutre : entre 7,2 et 7,4
- Teneur en (Ca2+, Mg2+) contrôlée
13
3. Disques d’antibiotiques :
- Conservation à 2 - 8 °C avec un déshydratant.
- Au sec et à l’abris de la lumière .
- Le diamètre des disques est de 6,35 mm.
- Abréviation ou sigle de 1-3 lettres .
14
Sigle Antibiotique Famille
AM Ampicilline Aminopénicilline
AMC Amoxicilline + acide Aminopénicilline

clavulanique
AMX Amoxicilline Aminopénicilline
AN Amikacine Aminosides
ATM Aztréonam Monobactame
AZM Aziththromycine Macrolides
B Bacitracine Polypeptides
C Chloramphénicol Phénicolés
Exemples d’abréviation de quelques antibiotiques. 15

4. Etapes de réalisation :
 Préparation et ajustement de l’inoculum
 Ensemencement sur milieu de culture
 Choix et disposition des disques d’ATB
 Incubation
 Lecture
16
 Préparation et ajustement de l’inoculum :

- Prélever à l’aide d’un inoculateur , des colonies bien isolées et identiques , à
partir d’une culture jeune
- Transférer dans un tube avec 1,5ml d’eau physiologique
- Agiter au vortex
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 Préparation et ajustement de l’inoculum :
- Ajuster la densité de l’inoculum :
 A l'aide d'un densitomètre : D.O. de 0,08 à 0,10
 Comparaison à l’œil nu de la turbidité de la

suspension bactérienne à celle de l’étalon 0,5 de la
gamme de Mc Farland .
18
 Ensemencement :
• Inoculum bactérien ensemencé dans les 15 min après la préparation
• Maximum dans les 60 min qui suivent .
• 2 téchniques :
 Par écouvillonnage
 Par inondation (n’est plus recommandée )
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 Ensemencement :
 Technique par écouvillonnage :
- Tremper un écouvillon stérile sec dans l’inoculum
- Ensemencer sur totalité de la surface de la gélose dans 3

directions
- Passer enfin l’écouvillon sur le bord de la gélose.
- Laisser sécher la boite fermée pendant quelques mn.

20
 Choix et disposition des disques d’antibiotiques :
• Le choix du disque se fait selon :
- L’identification du germe
- La connaissance des résistances naturelles
- Indications cliniques / types d’infection
21
 Choix et disposition des disques d’antibiotiques :

• La disposition des disques :
- Déposer les disques à la surface de la gélose via une pince stérile ou un distributeur de disques
- Délai de 15min , en évitant de toucher la gélose avec la pince
- Ne pas déplacer les disques après application
- Respecter 25-30mm entre les disques :
- BP de 90 mm  6 disques
- BP de 150 mm 12-16 disques
- BP carrée de 120mm  16 disques 22

23
 Incubations :
- Retourner les boîtes après dépôt (couvercle en bas ) .
- Incuber dans les 15 min suivant le dépôt (max 30mn).
- 37°C pdt 18-24h en atmosphère normale: pour la plupart des bactéries.
- 48h + 5% CO2 : pour Streptocoques , Haemophilus et Neisseria .
- 48h + absence d’02 : pour anaérobies strictes .
- 72h +micro-aérophilie : pour H.pylori .
24
Lecture :
- Mesurer par une règle ou un pied à coulisse
et noter le diamètre de chaque zone
d’inhibition en mm .
- Comparer avec les diamètres de référence
figurant dans les tableaux d’interprétations .
- Catégoriser les bactéries vis-à-vis de chaque
antibiotique testé: S-I-R. 25
 Lecture :
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- Comparaison du diamètre d’inhibition
mesuré aux diamètres critiques :
d(CCsup) et D(Ccinf)
 Concentration critique supérieure :
dose maximale d'antibiotique qui fait effet
sur la souche bactérienne
 Concentration critique inférieure: dose
minimale d'antibiotique qui fait effet sur
la souche bactérienne
27
28
III. Contrôle de qualité
29
• Permet de valider la qualité du milieu et celle des disques utilisés pour
l'antibiogramme.
• Principe: Utilisation souches de contrôle pour apprécier la performance globale du

test .
• Recommandation : utiliser des souches sensibles, mais egalement des souches

résistantes pour confirmer que la méthode détecte un mécanisme de résistance
connu.
• Achat des souches soit dans les collections soit dans le commerce
30
 préparation
• Conserver les souches dans des conditions qui maintiennent à la fois
leur viabilité́ et leurs caractéristiques.
• Une méthode pratique consiste à les conserver en cryotubes à billes.
Deux tubes de chaque souche de contrôle doivent être conservés :
- tube « en cours » (en service)
- le tube « archivé » pour fournir ultérieurement un nouveau tube en cours si
besoin.
31
 Réalisation
• Une fois par semaine, décongeler une bille du tube en cours, l’ensemencer sur un milieu non sélectif et
vérifier sa pureté.
• De manière à disposer tous les jours d’une subculture fraîche, préparer chaque jour de la semaine un
repiquage de la souche :
 pour les bactéries à croissance rapide, prélever les colonies à partir de la primoculture (celle obtenue
après décongélation de la souche) ;
 pour les bactéries à croissance lente, le repiquage quotidien de la souche doit être effectué à partir de la
subculture préparée la veille.
• Lorsque le tube « en cours » est vide, repiquer une bille du tube « archivé » pour préparer de nouveaux tubes
« en cours » à partir de la subculture obtenue.
• Lors des étapes de subculture, utiliser plusieurs colonies pour effectuer les repiquages
utiliser une subculture fraîche de la souche de contrôle qualité et réaliser l’antibiogramme en suivant les mêmes
instructions que celles qui s’appliquent pour les souches à tester en routine.
32
Quelques souches de référence

 S. aureus ATCC 25923
 P. aeruginosa ATCC 27853
 E. coli ATCC 25922
 H. influenzae ATCC 49766
 S. pneumoniae ATCC 49619
 K. pneumoniae ATCC 70060
33
IV. Interprétation
de l’antibiogramme
34
1. Antibiogramme et staphylocoques
35
a. Resistance aux b lactamines
Inactivation enzymatique : Modification de la cible :
Mécanisme Pénicillinase PLP additionnelle de moindre affinité pour les BL PLP2a ou PLP2c
(gène mecA ou mecC, porté par cassette chromosomique SCCmec)
Mise en Péni G 6µg  Oxacilline
évidence : Diamètre < 26mm ou présence de Diamètre > 20mm sans colonie dans la zone d’inhibition: souche
grosses colonies (squatters) Méti-S
Diamètre < 20mm ou si présence de colonies (même minuscules )
dans la zone d’inhibition: souche Méti-R
 Céfoxitine
Diamètre >27 mm : souche Méti-S
Diamètre < 27 mm : souche Méti-R
Conséquence Inactive péni G, A, carboxy- et Souche Méti-R  résistance à toutes péni (+/- IBL), aux
uréido-pénicillines céphalosporines et aux carbapénèmes, même s’il existe une sensibilité
apparente in vitro
36
a. Resistance aux b lactamines
 Phénotypes
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b. Resistance aux aminosides
Mécanisme: inactivation enzymatique
Mise en évidence par des disques de kanamycine, tobramycine et gentamicine
Phénotype Enzymes Kanamycine Tobramycine Gentamicine

Amikacine
Sauvage S S S
K Amino Phospho transférase APH R S S
KT Amino Nucleotidyl Transférase ANT R R S
KTG Amino Phospho transférase-Amino
R R R
Acétyl transférase APH-AAC
1. Les souches résistantes à la gentamicine sont résistantes à̀ tous les aminosides.

2. Les souches résistantes à la tobramycine sont résistantes à la kanamycine et à l’amikacine.
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b. Resistance aux Fluoroquinolones
 Mécanisme : Modification de la cible
Modification de l'ADN gyrase (topoisomérases II) (gènes gyr A et gyr B ) ou les

topoisomérases IV (gènes par C et par E). Ces enzymes sont directement impliquées
dans les mécanismes de désenroulement et de superenroulement de l'ADN
 Mise en evidence
• Norfloxacine 10 μg
• Resistance si diamètre < 17mm
39
c. Resistance aux Macrolides-Lincosamides-Streptogramines
 Erythromycine 15μg : résistance si diamètre inférieur à 21mm Souche de S. aureus sensible
 Clindamycine 2μg : résistance si diamètre inférieur 22mm
 Quinupristine - dalfopristine 15μg : résistance si diamètre inférieur 21mm
 Phénotypes Souche de S. aureus

MLSB inductible
Interprétation
Erythromycine Lincosamides Pristinamycine Conséquence
(Phénotype)
R érythromycine,
R S S MLSb inductible
clarythromycine, azythromycine
R toutes les macrolides, Souche de S. aureus
R R S MLSb constitutif MLSB constitutive
lincomycine, clindamycine
S R S R isolée à la lincomycine L
R S S R isolée à l’érythromycine ERM
Résistance par efflux
40
d. Resistance aux autres antibiotiques
 Cyclines :
 Tétracycline 30μg
 Resistance si diamètre < 22 mm
 Phénicolés :
 Chloramphénicol 30μg
 Resistance si diamètre < 18mm
 Sulfamides et associés :
 Cotrimoxazole = Triméthoprime 1,25μg - sulfaméthoxazole 23,75μg
 Resistance si diamètre < 14mm
41
2. Antibiogramme, streptocoques et entérocoques
a. Résistances naturelles
Streptococcus (dont S. Pneumoniae) Enterocoques spp

Quinolones de 1ère génération et fluoroquinolone Aminosides (bas niveau): gentamicine,
(effet modérée) streptomycine, kanamycine
Acide fusidique Quinolones de 1ère génération et fluoroquinolone
(effet modérée)
Aminosides (bas niveau): gentamicine, Céphalosporines (toute génération)

streptomycine, kanamycine
Oxacilline
Sulfamides
E. gallinarum et E. flavescens possèdent résistance
naturelle à Vancomycine
42
b. Antibiotiques à tester:
 Streptococus spp.
Liste standard Liste complémentaire

Clindamycine Dalbavancine ou oritavancine Rifampicine
Érythromycine Daptomycine Streptomycine
Gentamicine Doxycycline Tédizolide
Pénicilline G Fluoroquinolones Téicoplanine
Tétracycline (dépistage) Linézolide Tigécycline
Minocycline Triméthoprime
Nitrofurantoïne Norfloxacine Triméthoprime-sulfaméthoxazole
(dépistage) Pristinamycine Vancomycine
43
 Streptococus pneumoniae

Ampicilline ou Oxacilline (dépistage) Autres β-lactamines Linézolide Minocycline
amoxicilline Céfotaxime Pénicilline G Chloramphénicol Rifampicine
ou ceftriaxone Pristinamycine Doxycycline Triméthoprime-
Clindamycine Tétracycline (dépistage) Gentamicine Léfamuline sulfaméthoxazole
Érythromycine Vancomycine ou
Fluoroquinolones téicoplanine
Norfloxacine (dépistage)
44
 Enterococcus spp.
Ampicilline ou amoxicilline Chloramphénicol Norfloxacine (dépistage)

Gentamicine Daptomycine Quinupristine-dalfopristine ou
Nitrofurantoïne Éravacycline E pristinamycine
Téicoplanine ́ rythromycine Rifampicine
Vancomycine Imipénème Streptomycine
Léfamuline Tigécycline
Lévofloxacine ou moxifloxacine Triméthoprime
Linézolide Triméthoprime-sulfaméthoxazole
45
c. Resistance aux B lactamines
Streptococcus Pneumoniae Streptococcus spp. Enterococcus spp
Mise en évidence Oxacilline 1 μg Pénicilline G1 1 UI Ampicilline 2 μg
interprétation Resistance si le diamètre est Resistance si le diamètre est Resistance si le diamètre est
inférieur à 20mm inférieur à 18mm (19mm en cas inférieur à 8mm
de méningite)
Conséquence R aux Pénicillines, R aux Pénicillines, aux aminopénicillines
Céphalosporines et Céphalosporines et uréidopénicillines et aux
Carbapénèmes Carbapénèmes carbapénèmes
Remarques Le méropénème est le seul La résistance aux β-lactamines Toutes les espèces
carbapénème recommandé dans est exceptionnelle chez les d’Enterococcus sont
le traitement des méningites streptocoques du groupe B naturellement résistantes aux
lexception de la pénicilline V céphalosporines, à l’exception du
pour les streptocoques du groupe ceftobiprole vis-à-vis de E.
B faecalis.
46
d. Resistance aux fluoroquinolones
Streptococcus Pneumoniae Streptococcus spp. Enterococcus
Mise en évidence norfloxacine 10 µg norfloxacine 10 µg norfloxacine 10 µg
interprétation • Diamètre ≥ 10 mm : souche • Diamètre ≥ 12 mm : souche • Diamètre ≥ 12 mm : souche

sensible (S) aux fluoroquinolones sensible (S) aux sensible (S) aux
• diamètre < 10 mm : souche fluoroquinolones fluoroquinolones
sensible forte dose avec risque • Diamètre < 12 mm : souche • Diamètre < 12 mm : souche
élevé de sélection in vivo de sensible forte dose avec risque sensible forte dose avec
mutant résistant en cas d’échec élevé de sélection in vivo de risque élevé de sélection in
thérapeutique mutant résistant en cas d’échec vivo de mutant résistant en
thérapeutique cas d’échec thérapeutique
Remarques Si le test de dépistage est négatif Si le test de dépistage est négatif Si le test de dépistage est négatif
(diamètre ≥ 10 mm), les souches (diamètre ≥ 12 mm), les souches (diamètre ≥ 12 mm), les souches
peuvent être catégorisées « sensibles » peuvent être catégorisées « peuvent être catégorisées «
à la moxifloxacine et « sensibles à sensibles » à la moxifloxacine et à sensibles » à la lévofloxacine. Si
forte posologie » à la lévofloxacine. Si la délafloxacine, et « sensibles à le test de dépistage est positif, la
le test de dépistage est positif, les forte posologie » à la lévofloxacine. lévofloxacine doit être testée
autres fluoroquinolones doivent être Si le test de dépistage est positif, les individuellement
testées individuellemen autres fluoroquinolones doivent être
testées individuellement
47
e. Resistance aux aminosides
Mise en évidence • Gentamycine 500 µg • Gentamycine 30 µg
interprétation • Diamètre ≥ 17 mm : Souche sauvage (bas niveau de • Diamètre ≥ 8 mm : Souche sauvage (bas niveau de
résistance) et synergie possible avec Bêtalactamines résistance) et synergie possible avec Bêtalactamines et
et Glycopeptides (si sensible) Glycopeptides (si sensible)
• Diamètre < 17 mm: Souche avec haut niveau de • Diamètre < 8 mm: Souche avec haut niveau de
résistance et synergie impossible. résistance et synergie impossible.
Remarques Les streptocoques présentent une résistance naturelle de Les entérocoques présentent une résistance de bas niveau
bas niveau (BNR) à tous les aminosides qui n’empêche aux aminosides. Cependant, l'association avec des
pas d’obtenir un effet synergique bactéricide entre un inhibiteurs de la paroi bactérienne (pénicillines,
aminoside et une pénicilline (ou un glycopeptide). glycopeptides) est synergique et bactéricide vis-à-vis des
L’acquisition d’une résistance de haut niveau (HNR) souches sensibles à ces antibiotiques et ne présentant pas
abolit cet effet synergique bactéricide. une résistance de haut niveau aux aminosides. L'espèce E.
faecium produit deux enzymes chromosomiques, AAC(6')-li
et EfmM, abolissant la synergie entre
pénicillines/glycopeptides et aminosides (sauf gentamicine
et streptomycine).
48
f. Resistance aux glycopeptides
Mise en évidence Vancomycine 5 μg Vancomycine 5 μg Vancomycine 5 μg

• Diamètre ≥ 16 mm : Souche • Diamètre ≥ 13 mm : Souche • Diamètre ≥ 12 mm : Souche
Sensible (bord zone Sensible (bord zone d’inhibition Sensible (bord zone d’inhibition
d’inhibition nets) nets) nets)
• Diamètre < 16 mm: Souche • Diamètre < 13 mm: Souche • Diamètre < 12 mm: Souche
Résistante Résistante Résistante
Remarques Les souches résistantes aux Les souches « sensibles » à la Les souches ne doivent pas être
glycopeptides n’ont pas encore été vancomycine peuvent être rendues « répondues « sensibles » avant 24 h
rapportées. Vérifier le résultat ainsi sensibles » à la dalbavancine et à d’incubation.
que l’identification l’oritavancine.
La détection de la résistance de bas
niveau à la vancomycine (VanB) peut
nécessiter une incubation prolongée à
44 ± 4 h
Les souches d'entérocoques sensibles
à la vancomycine présentent des
zones d'inhibition avec une bordure
nette, sans colonie dans la zone
49
f. Resistance aux macrolides – lincosamides - streptogramines
Macrolides Streptococcus Pneumoniae Streptococcus spp. Enterococcus
Mise en évidence Érythromycine 15ug Érythromycine 15ug Érythromycine 15ug
interprétation Resistance aux macrolides si le Resistance aux macrolides si le Resistance aux macrolides si le
diamètre est inférieur à 22mm diamètre est inférieur à 21mm diamètre est inférieur à 23mm
Streptogramines Streptococcus Pneumoniae Streptococcus spp. Enterococcus
Mise en évidence Pristinamycine 15μg Pristinamycine 15μg quinupristine-dalfopristine 15μg

interprétation Resistance si le diamètre est Resistance si le diamètre est Resistance si le diamètre est
inférieur à 19mm inférieur à 22mm inférieur à 22mm
Remarques Les souches résistantes aux streptogramines sont rares. Vérifier le La catégorisation de la
résultat ainsi que l’identification en cas de resultat positive pristinamycine peut être déduite de
-- celle de la quinupristine-
dalfopristine. Ne pas rendre la
quinupristine-
dalfopristine sur le compte rendu,
rendre à la place la catégorisation
de la pristinamycine.
50
f. Resistance aux macrolides – lincosamides - streptogramines
lincosamides Streptococcus Pneumoniae Streptococcus spp.
Mise en évidence Clindamycine 2μg Clindamycine 2μg
interprétation Resistance si le diamètre est inférieur à Resistance si le diamètre est inférieur à 17mm
19mm
Remarques Pour les souches sensibles à la clindamycine, une
résistance inductible peut être mise en évidence par une
image d’antagonisme (D-test) entre la clindamycine et
l’érythromycine
Si une résistance inductible est détectée, les souches
doivent être rendues «résistantes» à la clindamycine (et à la
spiramycine). En l’absence de résistance inductible, les
souches peuvent être rendues «sensibles» à la clindamycine
(et à la spiramycine).
51
f. Resistance aux tétracyclines
Streptococcus Pneumoniae Streptococcus spp.
Mise en évidence Tétracycline 30μg Tétracycline 30μg
Interprétation Resistance si le diamètre est Resistance si le diamètre est

inférieur à 25mm inférieur à 23mm
Remarques si le test de dépistage est négatif , les souches peuvent être

catégorisées « sensibles » à la doxycycline et à la minocycline. Si
le test de dépistage est positif les autres tétracyclines doivent être
testées individuellement.
52
3. Antibiogramme et entérobactéries
• Imperméabilité du Lipopolysaccharide (LPS):
• Résistance naturelle aux β-lactamines hydrophobes et/ou aux antibiotiques de haut poids
moléculaire
- Pénicilline G, V et M
- MLS
- Glycopeptides
- Rifampicine
- Acide fucidique
- Oxazolidinones
- Lipopeptides
- Tétracyclines
53
54
7 grands phénotypes de résistance naturelle aux β-lactamines chez les entérobactéries
55
56
a. Résistances acquises
• Résistances acquises non enzymatiques
- Modification de la cible
Mutation des PLP, résistance aux bétalactamines
Diminution de la PLP 1A, résistance à l’imipénème et au mecilinam chez P.
mirabilis
- Diminution de la perméabilité
Modification ou perte des porines, résistance aux céphalosporines
- Hyperproduction de système d’efflux
Résistance aux bétalactamines
57
a. Résistances acquises
• Résistances acquises par production de bétalactamases
 Pénicillinase chez une bactérie dépourvue naturellement = de bas niveau
 Pénicillinase produite en grande quantité = de haut niveau
 Pénicillinase résistante aux IßL (TRI)
 Pénicillinase à spectre élargi (BLSE)
 Céphalosporinase produite en grande quantité = de haut niveau
 Carbapénèmase
58
59
BLSE au laboratoire:
Synergie IBL avec C3G et/ou C4G
Images en bouchon de champagne
60
Groupe 1: Entérobactéries naturellement sensibles à toutes les β- lactamines
Antibiotiques P.sauvage PNB PHN Case TRI BLSE CHN

Aminopénicillines S R R R R R R
aminopénicillines + I
S S I/R R R R R
BL
Carboxypénicillines S R R S R R R
Uréidopénicillines S I/R I/R S R R R
C1 G S I I/R R S R R
C2 G S S S/R S S R R
C3 G S S S S S R R
C3 G+ IBL S S S S S S R
C4 G S S S S S R S
Céphamycines S S S S/R S S R
Carbapénèmes S S S S S S S
61
Groupe 2: Entérobactéries naturellement résistantes aux pénicillines A et carboxypénicillines par production
d’une pénicillinase à bas niveau
P.Sauvage =
Antibiotiques PHN BLSE
PBN
Aminopénicillines R R R
aminopénicillines + IBL S R R
Carboxypénicillines R R R
Uréidopénicillines I R R
C1 G S R R
C2 G S I/R R
C3 G S S R
C3 G + I BL S S S
C4 G S S R
Céphamycines S S S
Carbapénèmes S S S
62
Groupe 3: Entérobactéries naturellement résistantes aux pénicillines A associées ou non
aux IBL, aux C1G par production d’une céphalosporinase inductible.
P.sauvage = Case
Antibiotiques PHN BLSE CHN
inductible
Aminopénicillines R R R R
aminopénicillines + I BL R R R R
Carboxypénicillines S R R R
Uréidopénicillines S R R R
C1 G R R R R
C2 G S/R R R R
C3 G S S R R
C3 G+ I BL S S S R
C4 G S S R S/I
Céphamycines S/R S/R S/R R
Carbapénèmes S S S S
63
Groupe 4: Entérobactéries naturellement résistantes aux pénicillines A associées ou non aux IBL, aux
carboxypénicillines, aux C1G par production pénicillinase+céphalosporinase
Antibiotiques P.sauvage BLSE

Aminopénicillines R R
aminopénicillines + I BL R R
Carboxypénicillines R R
Uréidopénicillines I/R R
C1 G R R
C2 G S R
C3 G S R
C3 G+ I BL S S
C4 G S R
Céphamycines S S
Carbapénèmes S S
64
Groupe 5: Entérobactéries naturellement résistantes aux pénicillines A, aux carboxypénicillines, aux C1G, C2G par production d’une céfuroximase
Pase
Antibiotiques P.sauvage BLSE
chromosomique
Aminopénicillines R R R
aminopénicillines + IBL S R R
Carboxypénicillines R R R
Uréidopénicillines S R R
C1 G I/R R R
C2 G I/R R R
C3 G (CRO, CTX) S R R
C3 G (CAZ) S S R
C3 G ( ATM) S R R
Céphamycines S S S
Carbapénèmes S S S
65
• Classification des carbapénèmases (Ambler)
- Classe A (sérine protéases): NmcA, SME, IMI, SFC, GES, KPC (Klebsiella
pneumoniae carbapénémase) ...
- Classe B (métallo-β-lactamases): IMP, VIM, GIM, KHM, NDM (NDM-1: Inde,
Pakistan, GB) ...
- Classe D (oxacillinases, sérine protéases): OXA 48 (transposon) , OXA-23,
OXA-48 like...
66
Spectre d’hydrolyse des principales carbapénémases produites par les
Entérobactéries
Classe A Classe B Classe D
IMP/
Antibiotiques KPC GES
NDM/VIM
OXA-48
Pénicilline + + + +
Aztréonam + - - -
Céphalosporines de 1ère et de 2ème + + + +
génération
Céphalosporines de 3ème génération + + + -
Imipenème + +/- + +/-
Méropénème + +/- + +/-
Ertapénème + +/- + +/-
67
Test de Hodge modifié
68
4. Antibiogramme et Pseudomonas
a. Résistances naturelles:
Posssède naturellement
- Céphalosporinase
- Oxacillinase
- Systèmes d’efflux
- Imperméabilité
Résistance
69
b. Résistances acquises
70
c. Résistances acquises aux Bétalactamines
- Hyperproduction céphalosporinase chromosomique (céfépime souvent I/R)
- Mutants de AmpC (ESAC)
- Pénicillinase
- BLSE
- Carbapénémase : VIM, IMP, ...
- Surexpression pompe d’efflux
- Modification PLP
- Perte de porine OprD2
71
72
73
74
75
V. Limites et causes d’erreurs
de l’ABG standard
76
V. Limites et causes d’erreurs de l’ABG
standard
• Liées aux milieux de culture:
- Défectueux
- Préparation inadéquate
- Souillé
• Liées aux disques ATB:
- Mauvaise diffusion dans la gélose: polymixine,
glycopeptides
- Qualité de conservation
- Date de péremption
77
standard
• Liées à la bactérie
- Nécessité d’une culture pure et identifiée
- Bactéries exigeantes (Haemophilus, Brucella, Pasteurella,
Campylobacter…)
- Bactéries à croissance lente
- Germes intracellulaire
• Associées à l’inoculum
- Contamination: mauvaise interprétation
- Non standardisé selon CASFM
78
standard
• Conditions d’incubation
- Durée trop courte ou longue
- Température trop basse
- Atmosphère inappropriée en O2 ou CO2
• Liées à la lecture interprétative
- Lecture prématuré
- Erreurs de mesure
- Mauvaise interprétation
79
Conclusion
80
Conclusion
• Etape clé dans le diagnostic bactériologique

• Aide au diagnostic pour le clinicien
• Guider le choix thérapeutique
• Identification des résistances acquises
• Surveillance de l’antibiorésistance +++
81
Références
• Lecture et Interprétation de l ’antibiogramme : Jocelyne Caillon
Bactériologie Nantes 07.10.2005 Hôpital de Nantes
• CASFM / EUCAST : Société Française de Microbiologie.
Recommandations 2023. V.1.0 Juin
• L’antibiogramme et son interprétation phénotypique, revue
francophone des laboratoires
• François D. Marie Cécile P. et al. Bactériologie médicale. Techniques
usuelles. 3e édition. Novembre 2016.
• https://www.memobio.fr/html/bact/ba_an_saup.html
82
Références
• Microbiologiemedicale.fr/gelose-mueller-hinton
• Résistance aux antibiotiques : P.Nordmann, Hôpital de Bicetre,
université Paris Sud XI
• J.L Mainardi. Mécanisme d’action et de résistance aux
antibiotiques/session interactive autour de l’antibiogramme. Service
de microbiologie de l’hôpital Georges Pompidou. Faculté et Université
Paris René Descartes.
• Protocole de test de sensibilité à la diffusion du disque Kirby Bauer ,
23 février 2023 .
83

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ANTIBIOGRAMME

II. Réalisation de l’antibiogramme

III. Contrôle qualité

IV. Interprétation de l’antibiogramme

V. Limites et causes d’erreurs

- Etude in vitro de l’action d’un ATB sur une souche bactérienne,

- Consiste à étudier la croissance bactérienne face à un gradient de

- Epidémiologique : Surveillance des résistances bactériennes aux

2. Résistance bactérienne aux antibiotiques :

- Croissance d’une bactérie , en présence d’une concentration

- Deux types de résistances : Naturelle et Acquise .

2. Résistance bactérienne aux antibiotiques :

- - Support : chromosome , extra-chromosome

• Méthode de Kirby-Bauer (recommandée par l’OMS)

• Méthode de diffusion sur gélose

• Permet de mesurer les diamètres d’inhibition de la croissance d’une

- Des disques imprégnés d’antibiotiques sont déposés à la surface d’un milieu de

- Le diamètre de la zone d’inhibition est proportionnel à la sensibilité de la

- Catégorisation clinique (résistant, intermédiaire, sensible)

- Gélose Mueller-Hinton (MH) : Milieu standardisé de 4 mm d’épaisseur.

- Additionné de 5 % de sang de cheval ou de mouton pour les bactéries

- pH neutre : entre 7,2 et 7,4

- Teneur en (Ca2+, Mg2+) contrôlée

- Au sec et à l’abris de la lumière .

- Le diamètre des disques est de 6,35 mm.

- Abréviation ou sigle de 1-3 lettres .

AMC Amoxicilline + acide Aminopénicilline

ATM Aztréonam Monobactame

AZM Aziththromycine Macrolides

Exemples d’abréviation de quelques antibiotiques. 15

 Ensemencement sur milieu de culture

 Choix et disposition des disques d’ATB

 Préparation et ajustement de l’inoculum :

partir d’une culture jeune

- Transférer dans un tube avec 1,5ml d’eau physiologique

 A l'aide d'un densitomètre : D.O. de 0,08 à 0,10

 Comparaison à l’œil nu de la turbidité de la

• Maximum dans les 60 min qui suivent .

 Par inondation (n’est plus recommandée )

 Technique par écouvillonnage :

- Tremper un écouvillon stérile sec dans l’inoculum

- Ensemencer sur totalité de la surface de la gélose dans 3

- Passer enfin l’écouvillon sur le bord de la gélose.

- Laisser sécher la boite fermée pendant quelques mn.

 Choix et disposition des disques d’antibiotiques :

• Le choix du disque se fait selon :

- La connaissance des résistances naturelles

- Indications cliniques / types d’infection

 Choix et disposition des disques d’antibiotiques :

- Délai de 15min , en évitant de toucher la gélose avec la pince

- Ne pas déplacer les disques après application

- Respecter 25-30mm entre les disques :

- BP de 150 mm 12-16 disques

- BP carrée de 120mm  16 disques 22

- 37°C pdt 18-24h en atmosphère normale: pour la plupart des bactéries.

- 48h + 5% CO2 : pour Streptocoques , Haemophilus et Neisseria .

- 48h + absence d’02 : pour anaérobies strictes .

- 72h +micro-aérophilie : pour H.pylori .

• Principe: Utilisation souches de contrôle pour apprécier la performance globale du

• Recommandation : utiliser des souches sensibles, mais egalement des souches

Quelques souches de référence

Phénotype Enzymes Kanamycine Tobramycine Gentamicine

1. Les souches résistantes à la gentamicine sont résistantes à̀ tous les aminosides.