Lantibiogramme

1- Le but de lantibiogramme
Le choix de lantibiotique est ralis de manire trs empirique dans la plupart des infections banales dbutantes : le mdecin prescrit, en fonction de lexamen clinique, la molcule dont lefficacit lui parat la plus probable (antibiothrapie dite probabiliste). Ce nest que dans les infections graves, rcidivantes ou les checs thrapeutiques que lon fait appel au laboratoire qui ralisera une culture et un antibiogramme. Un antibiogramme permet de tester sur milieu de culture, laction de molcules antibiotiques sur une souche bactrienne. Il donnera donc des indications sur lefficacit IN VITRO de ces antibiotiques.

2- Quelques dfinitions
Deux notions sont connatre avant de faire un antibiogramme : La CMI ou Concentration Minimale Inhibitrice. Il sagit de la concentration de lantibiotique la plus faible pour laquelle la croissance bactrienne est inhibe (pas de croissance de la population ; 100% de survivants) La CMB ou Concentration Minimale Bactricide. Cest la concentration de lantibiotique la plus faible permettant de dtruire 99.99% des bactries prsentes au dpart (soit une bactrie survivante sur 10000). Si CMB < 5 CMI lantibiotique est trs efficace. Au contraire si CMB > 10 CMI, on le considre peu efficace.

La mesure de la CMI permet de dterminer si une souche est sensible ou rsistante lantibiotique test. Pour chaque antibiotique, on a pu mesurer les concentrations sriques obtenues chez le patient (humain) dans le cadre dune posologie normale. on distingue alors : la souche est dite RESISTANTE : la CMI ne peut tre atteinte par un traitement ralis laide de cet antibiotique sans tre toxique pour lanimal. la souche est dite SENSIBLE : la CMI peut tre atteinte par un traitement usuel ralis laide de cet antibiotique . La souche est dite INTERMEDIARE : la CMI ne peut tre atteinte quen augmentant les doses.

Remarque : Dans le cas dune souche intermdiaire, augmenter la posologie nest ralisable en pratique que dans les cas o lantibiotique est peu ou pas toxique, de traitement local (plaie, otite) ou dexcrtion sous forme active dans lorgane infect (par exemple pour soigner une infection du tractus urinaire si excrtion rnale)

3- Interaction entre antibiotiques

Outre le fait que certaines molcules inhibent ou au contraire exacerbent leffet des antibiotiques (acide, sucre, thymine, etc), les diffrents antibiotiques peuvent interagir entre eux. Trois grands types dinteractions peuvent tre dfinis : La synergie : chaque antibiotique voit son action augmente par lautre. Lantagonisme : les effets des deux antibiotiques se contrarient Lindiffrence : que lon utilise chaque antibiotique sparment ou en association, le rsultat est le mme.

4- Dtermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)

Afin de pouvoir conclure sur la sensibilit dune souche un antibiotique donn, il faut dterminer sa CMI vis vis de cette molcule. Plusieurs mthodes sont la disposition du laboratoire. On diffrencie : les techniques en milieu liquide (en tube, en microplaque) la technique en milieu solide glos (Etest)

A les mthodes en milieu liquide Une solution mre dantibiotique est dilue de 2 en 2. Le diluant est le bouillon de Mueller-Hinton. Linoculum est prpar partir dune culture de 24 heures en milieu liquide A-1 Macromthode Reporter dans une srie de tubes striles 1 mL de chaque dilution de lantibiotique. Ajouter dans tous les tubes le mme volume dinnoculum. Incuber 24 heures la temprature optimale de la souche tester. Observer les tubes aprs incubation : la CMI sera la concentration en antibiotique la plus faible pour laquelle il ny a pas de croissance visible. En fait, elle est comprise entre le tube correspondant cette dfinition et le premier tube dans lequel une croissance est observe. A-2 Micromthode Des microplaques fond en U (plaque microtitration) sont utilisables pour la dtermination des CMI. Une plaque 96 puits permet la dtermination de la CMI de 8 antibiotiques vis-vis de la mme souche. Dans les cupules dune mme ligne, les dilution de lantibiotique et la souche sont introduit laide dune pipette automatique. Incuber 24 h la temprature optimale de la souche. Observer la plaque est une ventuelle pousse dans chaque cupule (ou un dpt au fond de la cupule). La CMI correspond a la concentration de la cupule ne prsentant pas de croissance.

B La mthode en milieu glos Cest la mthode la plus prcise car donnant une valeur vraie de la CMI et non un encadrement de celle-ci. Elle est connue sous le nom commercial de Etest. Elle est cependant rarement utilise en routine cause de son cot lev. Une bandelette est imprgne de quantits croissantes dantibiotiques. Elle est place sur une glose pour Contrle Dilutions antibiogramme ensemence classiquement ; lantibiotique diffuse en formant un gradient important : la zone dinhibition la forme dune ellipse et la lecture est alors directe sur la bandelette l o celle-ci rencontre la zone dinhibition.

Cependant connatre prcisment la CMI dune souche vis--vis des antibiotiques nest pas essentiel pour le praticien. En effet, il lui suffit de situer cette valeur par rapport aux deux concentrations critiques. On ralise pour cela lantibiogramme qui permet de positionner la CMI par rapport CC et Cc.

5- Lantibiogramme
5-1 Lantibiogramme standard en milieu glos : mthode des disques 5-1-1 Principe gnral Pour raliser lantibiogramme par le mthode des disques, la culture bactrienne est ensemence la surface dune glose spcialement tudie, la glose de Mueller-Hinton, ventuellement additionne de sang. Des disques pr-imprgns dune dose connue dantibiotique sont dposs la surface de la glose. Lantibiotique diffuse partir du disque en crant un gradient de concentration. La dtermination du diamtre de la zone dinhibition permet une estimation de la concentration minimale inhibitrice. Les caractres de sensibilit ou de rsistance de la souche bactrienne en seront dduits. 5-1-2 Technique En pratique, on ralise partir de lisolement (souche pure) un ensemencement en tapis sur le milieu.On dispose ensuite les disques dantibiotiques et on place lincubateur. Au bout de 24 h, on lit les diffrents diamtres dinhibition et on peut conclure en comparant ceux-ci aux abaques de lecture.

5-1-3 Interprtation Les abaques de lecture se prsentent sous forme de bandes prsentant deux donnes qui dlimite les zones SENSIBLE, INTERMEDIAIRE et RESISTANTE. Un report du diamtre mesur sur la bote permet de conclure rapidement.

Exemple : 3 souches bactriennes sont testes vis a vis de lampicilline. On mesure les diamtres dinhibition suivants : souche A 8 mm, souche B 25 mm et souche C 15 mm B 25 mm C 15mm A 8 mm

Sensible

Int.

Resistante

La souche A est donc RESISTANTE, la souche B SENSIBLE et la souche C est dclare INTERMEDIAIRE. 5.2 Antibiogramme en milieu liquide Comme il existe des galeries didentifications miniatures, il existe une galerie antibiogramme. Chaque antibiotique est test deux concentrations diffrentes (dlimitant les zones sensible et rsistant ) en milieu liquide. 5.3 Transposition pour le praticien En se souvenant que les concentrations utilises pour lire lantibiogramme sont les concentrations sriques obtenues chez lhumain en bonne sant aprs injection parentrale de la dose approprie , les messages dcoulant des rsultats de lantibiogramme pour le praticien sont : souche rsistante : la probabilit dobtenir une concentration suffisamment leve in vivo pour contrer la bactrie est nulle ; souche sensible : la probabilit dobtenir une concentration suffisamment lev in vivo pour contrer la bactrie est excellente (cela ne signifie pas que lanimal gurira doffice, car un ensemble dautres paramtres interviennent) ; souche intermdiaire : la probabilit dobtenir une concentration suffisamment leve pour contrer la bactrie est faible si on ne peut augmenter de manire significative la dose administre.