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par Rmi Moreda daprs ldition janvier 2010 du comit de lantibiogramme de la socit franaise de microbiologie.
Suspension en eau physiologique de trouble quivalent au standard 8 Mc Farland 0,5 (10 UFC/mL).
Il est possible de partir dun bouillon, par exemple pour les bacilles Gram ngatif, Staphylococcus et Enterococcus : culture en bouillon Mueller - Hinton incub 3 5 h sous agitation et ajust ensuite 0,5 de Mc Farland.
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- couvillonnage : diluer au 1/10 (10 UFC/mL) (10 goutte de pipette Pasteur dans 5 mL deau physiologique strile) - inondation : diluer au 1/100 (106 UFC/mL) (1 goutte de pipette Pasteur de suspension dans 5 mL deau physiologique strile)
* pour Staphylococcus aureus et la recherche de SARM, dposer un disque FOX ou raliser en plus un petit Mueller-Hinton 30C ou Mueller-Hinton hypersal 37C, 24 48h avec inoculum charg et disque oxacilline. Streptococcus utiliser directement la suspension 0,5McF pour l couvillonnage. Pour la technique par inondation diluer au 1/10 (1 mL dans 9 mL) Milieu : Mueller-Hinton + 5% sang de mouton 37C sous atmosphre enrichie en CO2 18-24h.
Aujourdhui dconseille car risque d aux arosols. Elle est nanmoins encore utilise en milieu professionnel.
Ensemencement
A laide dun couvillon essor, ensemencer toute la surface du milieu (3 passages orientation dcale de 60 pour la bote et lcouvillon)
Aspirer le surplus
1/3 de tour
60 (1/3 de tour)
Dpt
Dpt des disques dantibiotique selon schma de disposition (maximun 6 disques sur grande bote de ptri) Incubation 18-24 heures 37C en arobiose sauf cas cits plus haut.
Diamtre dinhibition en mm Pour chaque antibiotique, mesurer le diamtre de la zone dinhibition. Grce aux abaques 1d 0 1D 8 (exemple droite) dterminer la catgorie clinique de la bactrie vis vis de chaque Sensible Intermdiaire Rsistant antibiotique test (sensible, intermdiaire, CCS 5 1 10 CCI rsistant) et estimer la CMI. C c Concentration en antibiotique en g/cm3 ou mg/L
Diamtre dinhibition
}} }}
0 20
Lecture
Sensible
Intermdiaire Rsistant
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Disque AB
Abaque de lecture CCI = c = concentration critique infrieure (CCS = C = suprieure) D = diamtre critique suprieur (d = infrieur) Rmi Moreda - Lyce Docteur Lacroix - Narbonne
Dans cet exemple la bactrie est intermdiaire vis vis de lantibiotique. Estimation de la CMI : 4 mg/L < CMI < 16 mg/L