Faculté de pharmacie

LA promo 2023-2024

MICROSCOPIE
ÉLECTRONIQUE
À TRANSMISSION
éxposé réalisé par :
CHERIFI MORDJANE AMINA
CHILI RIHEB
DAHMANI ASMA
DARBEIDA LINA
DIF HAFSA
 Objectifs
pédagogiques
1- Décrire le microscope électronique à
transmission (MET)
2-Expliquer le principe de fonctionnement du
MET.
3- Citer les domaines de son utilisation.
4- Lister les différents procédés de contraste
électronique
5- Indiquer l’apport de chaque procédé dans
l’analyse morphologique d’un
échantillon ( illustrer avec des micrographies).
 1- Décrire le microscope
électronique à transmission (MET)
Le microscope électronique à transmission
(MET) est une technique d'observation
avancée qui utilise un faisceau d'électrons
transmis à travers un échantillon extrêmement
mince. Grâce à une résolution impressionnante
d'environ 0.2 nm, le MET permet une
exploration détaillée de l'ultrastructure des
cellules après des traitements appropriés.
Avec des niveaux de grossissement s'étendant
de 20 000× à 1 000 000×, le MET offre une
capacité exceptionnelle pour étudier les
moindres détails des échantillons biologiques à
l'échelle nanométrique
 Émet les électrons

Focalisent le faisceau d'électrons

Permet la transmission à travers l'échantillon

la visualisation l'image résultante

2-Expliquer le principe de
fonctionnement du MET.
 -Mode de fonctionnement : le faisceau d’électrons
traverse l’échantillon ultramince pour donner une image qui
sera observé sur
un écran de visualisation ou film photographique

-Le microscope électronique en transmission

utilise un faisceau d'électrons émis par un canon à
électrons. Les lentilles magnétiques focalisent ce
faisceau. En traversant l'échantillon, le faisceau
d'électrons génère différents rayonnements, et
seuls les électrons transmis sont analysés par le
détecteur. Ce dernier traduit le signal en une
image contrastée. Enfin, les lentilles projecteurs
agrandissent l'image formée et la projettent sur le
détecteur, qui peut être un écran fluorescent, une
plaque photo, ou plus couramment, un
scintillateur couplé à une caméra.
3- Citer les domaines de son
utilisation
 01 02 03
Explorer
Etudier les
l'ultrastructure L’aspect
surfaces des
cellulaire révèle, de morphologique
structures
manière précise, la de cellulaires isolées
présence macromolécules, ou de
d'organites tels que microorganismes macromolécules
le noyau, les
(bactéries..) ,de des virus ou de
mitochondries, , les
virus isolés,, suite bactéries par
vésicules, l'appareil
à la coloration ombrage
de Golgi, etc., suite à
métallique
l'application d'une négative
coloration positive
4- Lister les différents procédés de
contraste électronique
 Il existe de nombreuses technique de coloration adoptées par les
chercheurs qui peuvent être entreprises pour une observation spécifique en
microscope électronique

le contraste négatif

le contraste positif

ombrage métallique
A - Le contraste
(coloration ) positif:
1-Effectuer les étapes de la technique des coupes
minces.
2-Obtenir des coupes ultrafines (300 à 600 Å) à l’aide
d'un ultramicrotome.
3-Étaler les coupes obtenues sur une grille métallique.
4-Utiliser comme contrastants des sels de métaux lourds
opaques aux électrons( l'acétate d'uranyle (sels
d’uranium), le citrate de plomb (sels de plomb) et le
nitrate d'argent (AgNO3))
5-Les structures sont colorées à différents degrés en
fonction de leur affinité au contraste utilisé
B- le contraste négatif :
-Les échantillons sont isolés soit par
ultracentrifugation différentielle (UCD) soit par
ultracentrifugation à gradient de densité (UGD).
-Ils sont ensuite suspendus dans de l'acide
phosphotungstique.
-Une goutte de cette suspension est extraite et
déposée sur une grille placée sous une hotte,
également appelée chambre aspirante.
-Pendant le processus de séchage, au cours duq
l'eau s'évapore, l'acide phosphotungstique se
dépose autour de l'objet et pénètre entre ses
macromolécules de surface.
-L'échantillon est alors observé clair sur un fond
sombre
C-ombrage Principe de l'ombrage métallique :
L'approche implique de placer
métallique : l'objet d'étude sur un support,
puis de l'exposer à des vapeurs
métalliques générées par la
vaporisation sous vide d'une
électrode métallique. Ce
processus est effectué sous une
incidence particulière afin de
créer une ombre distincte.
L'ombrage ainsi obtenu accentue
les reliefs, facilitant ainsi l'étude
détaillée des surfaces.
Indiquer l’apport de chaque procédé dans
l’analyse morphologique d’un
échantillon
contraste
positive
Permettre de distinguer
plus clairement ou
finement les structures
intracellulaires donc
réalise une étude
ultrastructurale
 contraste négative
Description morphologique :
La morphologie externe des
macromolécules, organites tels que bactériophage
les ribosomes, virus et bactéries est
examinée après leur isolement,
permettant ainsi une description
détaillée de leurs caractéristiques
structurelles.
Architecture moléculaire :
La structure moléculaire des
composants du cytosquelette tels
que les microtubules et les
microfilaments d'actine, de la particules de
chromatine et des pores nucléaires rotavirus
après leur isolement.
 paroi de la
mosaique du
tabac
l’ombrage
métallique:

obtenir un effet
d’ombre donc pouvoir
étudier les surface des
structures cellulaires

paroi cellulaire
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