L'examen parasitologique des selles

Les échantillons de selles doivent être fraichement recueillis, portés le plus rapidement au
laboratoire surtout si la présence de protozoaires est suspectée car la viabilité des formes
végétatives avec leur mobilité est une critère d'identification très fragile.
Il faudra renouveler l'analyse à plusieurs reprises car l'élimination des parasites n'est pas continue.
Dans certains cas bien particuliers comme la suspicion d'oxyurose, la recherche d'oeufs au niveau
des selles est très souvent négative. Le test de Graham (ou scotch test) est de préférence pratiqué.
Il consiste à recueillir au lever à l'aide d'un ruban adhésif les oeufs pondus sur les marges anales
par la femelle durant la nuit. Le ruban est ensuite collé sur une lame de verre qui sera observée au
microscope.

1 - L'examen macroscopique
L'analyse commence par cette étape qui note :

 la quantité (entre 100 et 150 g)

 la couleur : normalement brune (transformation de la birirubine en sterchobiline), pouvant
être pathologiquement décolorée, jaune, verte, noir (sang digéré), rouge (hémorragie basse
ou aliments comme betterave)
 la consistance des selles : normalement souple et moulée (gardant le moule de l'intestin),
pouvant être moulée dure, pâteuse, molle, très molle, liquide
 la présence éventuelle de glaires (mucus), de sang ou de parasites adultes comme
des Ascaris adultes ou des anneaux de Taenia

2 - L'examen microscopique
Il est réalisé à partir de plusieurs préparations, comme par exemple :

 état frais
 concentrations
 extraction
 colorations

L'état frais

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Le but est d'obtenir une préparation suffisamment chargée pour être significative mais aussi
suffisamment claire pour y lire au travers des lettres d'imprimerie. L'intégralité de la préparation
sera observée au microscope à faible grossissement (x 100) puis à un grossissement plus fort en
se déplaçant en diagonale et en étant attentif aux éventuels mouvements, signe d'une forme
végétative ou d'une larve vivante.
1 - Déposer une goutte d'eau physiologique sur une lame.
2 - Prélever avec un agitateur à différents endroits de la selle.
3 - Dissocier les matières fécales dans la goutte.
4 - Recouvrir d'une lamelle en appuyant légèrement.
Les concentrations

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Le but est d'obtenir, sous un faible volume, les éventuels parasites présents dans une portion de
selles. Elles sont nombreuses tant au niveau de leur principe que des solutions utilisées. Elles ont
donc chacune leurs avantages et leurs inconvénients. Il faut donc les choisir en fonction du
contexte et des parasites recherchés.
Au niveau des principes se distinguent les techniques purement physiques (flottation ou
sédimentation en fonction de la densité du liquide de dilution) des techniques physicochimiques
ou diphasiques.
Ces dernières sont les plus utilisées en recherche courante. Elles permettent de séparer les
éléments indésirables : hydrosolubles, non solubles et liposolubles des formes parasitaires qui se
retrouvent en majorité dans le culot de centrifugation.
1 - Déposer une noix de selles prélevée à différents endroits dans un verre à pied.
2 - Diluer progressivement au 1/10 ième (selle moulée) par le liquide de la phase aqueuse en
triturant à l'aide d'un agitateur.
3 - Attendre environ 5 minutes le dépôt des débris lourds avant de filtrer le surnageant sur un
tamis type chinois dans un autre verre à pied pour éliminer les débris volumineux.
4 - Remplir aux 2/3 un tube conique à usage unique et compléter sous sorbonne avec 1/3 d'éther.
Boucher hermétiquement le tube.
5 - Agiter durant une minute le tube d'un mouvement vif et horizontal.
6 - Centrifuger ce tube durant 3 minutes à 1500 tours par minute.
7 - Observer l'aspect du tube à la sortie de la centrifugeuse montrant quatre phases : les trois
supérieures (phase aqueuse, débris insolubles, phase éthérée) qu'il faut éliminer et le culot.
8 - Vider le tube débouché par retournement au dessus du conteneur pour déchets chimiques.
9 - Essuyer, sans retourner le tube, les parois à l'aide d'un papier ou coton tenu par une pince.
10 - Retourner le tube et diluer au 1/2 le culot en eau physiologique. Laisser monter le contenu
du culot par capillarité dans l'effilure d'une pipette.
11 - Réaliser des montages entre lame et lamelle jusqu'à ce que la totalité du culot soit épuisé ...
12 - Observer au microscope l'ensemble au grossissement x100 puis x400.
L'extraction

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Le but est de d'attirer les larves d'helminthes hors des selles vers un volume d'eau chaude en se
basant sur leur hydro-thermo-tropisme positif.
1 - Préparer le montage suivant : sur un support, positionner un entonnoir muni d'un robinet dans
lequel peut se placer un tamis métallique.
2 - Envelopper une grosse noix de selles dans plusieurs épaisseurs de gaze.
3 - Placer le paquet obtenu dans un tamis type chinois.
4 - Verser un volume d'eau chaude dans l'entonnoir, le robinet en position fermée de telle façon
que l'eau affleure le bas du tamis placé dans l'entonnoir.
5 - Attendre une demi-heure.
6 - Soutirer le volume d'eau dans un tube.
7 - Centrifuger ce tube durant 3 minutes à 1500 tours par minute.
8 - Observer le culot de centrifugation au microscope au grossissement X100. Les larves doivent
y bouger énergiquement. Si cet examen est négatif, renouveler l'eau chaude et procéder à une
autre extraction.