les parasites

sanguicoles
réalisé par :bouazzi islemm
encadrée par: Mme charfeddine selma
plan:

1-paludisme
+prélèvement
a définition
+tech biologiques: FM,GE,TDR
b-mode de transmission
e-lecture et identification
c-tableau clinique et dépistage
f-estimation de la parasitémie :
d-diagnostic biologique:

+questionnaire
1- paludisme
a-définition:

Le paludisme (ou malaria) est une maladie causée par un parasite du genre Plasmodium,
essentiellement transmis à l'humain par la piqûre d'un moustique, l'anophèle femelle:

• 1ère endémie parasitaire mondiale.

• Urgence diagnostique et thérapeutique.

• Maladie à déclaration obligatoire

• c'est la première endémie parasitaire mondiale,

+Agent pathogène:

• protozoaire unicellulaire

• genre Plasmodium

• cinq espèces :pathogène à l’ homme

Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale,

Plasmodium malaria , Plasmodium knowlesi

Les cinq espèces diffèrent par des :

-critères biologiques

-critères cliniques,

-répartition géographique

-capacité à développer des résistances aux antipaludiques.

b-mode de transmission:

+Vecteur:

• moustiques du genre Anopheles de piqûre indolore

• Ordre: Diptères

• cycle : 4 stades successifs: oeuf –larve –nymphe

+don de sang

+don d'organe

+voie congénitale.

+par seringue(toxicomanie intraveineuse)

c-cycle de transmission:
Le cycle de P. falciparum fait intervenir deux hôtes : un moustique anophèle femelle et un être
humain. Avant un repas de sang, le moustique femelle injecte à l’être humain de la salive qui
empêche la coagulation du sang. Ce faisant, le moustique peut également, s’il est infecté, injecter
des sporozoïtes. D’abord présents dans le derme, ces parasites rejoignent le sang puis le foie et
pénètrent à l’intérieur des hépatocytes. S’ensuit alors un processus de reproduction asexuée par
schizogonie. Le noyau subit de nombreuses divisions, sans qu’il y ait accroissement de la taille de la
cellule. La forme multinucléée qui en résulte subit alors une division du cytoplasme. Cela aboutit à la
formation de mérozoïtes uninucléées à l’intérieur de l’hépatocyte. La structure résultante est
appelée schizonte.
 1-paludisme
d-tableau clinique et dépistage:

-les symptômes · des frissons ; · des maux de tête ; · de la fatigue et des douleurs musculaires ; · des nausées et de vomissements..

+clinique:

-incubation(phase hépatocytaires) : Accès palustre:

totalement asymptomatique. Accès rythmés: débute classiquement le soir
-7 à 12 jours pour P. falciparum et dure une dizaine d’heures.

-12 à 20 jours pour P. vivax, associant successivement 3 stades :

-15 jours pour P. ovale • stade de frissons
-15 à 21 jour p.malariae
• stade de chaleur

• stade de sueurs
• Le rythme des accès est en fonction de l’espèce :

-fièvre tierce : à J1, J3, J5 ... schizogonie de 48 heures.

régulière ,bénigne P. vivax ou P. ovale

irrégulière maligne P. falciparum

-fièvre quarte : J1, J4, J7 ... : schizogonie de 72 heures :P. malariae.

+dépistage:se fait:

-après les signes clinique

-après d'un don de sang .

-après don d'organe.

-avant embauche.

e-diagnostic biologique:
+questionnaire:
-fièvre?
-ttt?
-origine du malade?
+prélèvement : Il est effectué sur un tube EDTA (pour conserver la forme des
hématies ) au niveau du pli de coude , au lobe de l’oreille et pour les bébés au bout des
talons

-avant tout traitement antipaludique,

-À répéter, éventuellement si elle a été négative, quelques heures après un accès
fébrile.
• Sang veineux:
– Tube EDTA (capuchon violet)
– Tubes à héparine; à citrate: moins bons résultats
– Inconvénients:
• Souvent mauvaises Goutte Épaisse (GE)
• Mauvaise adhérence: GE se décolle
• Mauvaise déshémoglobinisation (hémolyse)
• Sang capillaire:
– Recommandé++
– Piqûre par lancette stérile
– Adulte et enfant >1 an:4ème doigt main gauche
< 1 an: Gros orteil
– Avantages:
-la goutte épaisse adhère mieux
- déshémoglobinisation complète,
-une bonne coloration
- un coloration immédiate
 +techniques biologiques
• Recherche directe du parasite:
par Frottis mince et Goutte épaisse:

• Recherche d’Ag: antigénémie

• frottis mince:
-étapes de confection :Déposer une goutte de sang (1-2 µL)
• A l’extrémité de la lame propre, dégraissée et étiquetée
• Tenir la lame de la main gauche.
• De l’autre, poser le bord d’une lame rodée juste en avant de la goutte de sang
● Faire glisser la lame rodée jusqu’à ce qu’elle touche à goutte de sang.
● Laisser le sang se répartir tout le long du bord de la lame rodée.

• Pousser la lame rodée jusqu’au bout de la lame d’étalement, d’un mouvement

doux et régulier,
• Tout le sang doit être réparti avant que l’on atteigne le bout de la lame.
 caractéristique d'un bon frottis:
• De bonne taille: ½ à ¾ de la lame
• De bonne densité: goutte étalée en entier
• Distant des bords de la lame: accessible en tout point à l’observation
microscopique
• Sans lignes, ni trous
-coloration d'un frotti mince:

• May-Grunwald-Giemsa (MGG)

– May-Grünwald: éosine (colorant acide) + bleu de

méthylène (colorant basique du cytoplasme)
– Giemsa: l'éosine + azur de méthylène (colorant basique)
le MGG est un fixateur et colorant
1-MGG:
1) Couvrir les lames avec 1 ml de May-Grün-Wald. 1 mn

2) Ajouter le même volume d'eau tamponnée. 1 mn

3) Jeter le colorant

4) Ajouter le Giemsa dilué au 1/10 par l'eau tamponné : 15 mn

5) Rincer à l'eau de robinet

 – Goutte épaisse:
-étapes d confection:
• Dépôt d’une goutte de sang (3-5µL)
• Au centre de la lame propre, dégraissée et étiquetée
• Étalement épais
• En tournant avec le coin d’une lame propre
• Mouvements circulaires pendant 1-2 min
• Laisser sécher pendant 24H à température
• ambiante ou bien 2H dans l'étuve à 37 C°
• Ne jamais fixer, ni à la chaleur, ni à l’alcool
-coloration du goutte épaisse:

1. Déshémoglobinisation (hémolyse):
• Lavage prudent: eau de robinet, eau distillée tamponnée(3-10min).
• Laisser agir jusqu’à ce que la GE devienne blanchâtre, transparente
• Sur portoir (GE vers le haut)
• Sur portoir dans une boîte de pétri( GE vers le haut)
• Dans un cristallisoir (lame verticale).
2. Coloration Giemsa:
• Solution Giemsa à 1/10
• Pendant 20-30 min (Lente)
• Lavage prudent avec l’eau de robinet
• Laisser sécher
TESTS DU DIAGNOSTIC RAPIDE
(TDR):
• Cassette de TDR
1-ajouter 20 µl de sang dans le puit 1

2-ajouter 3 goutte de tampon dans le

puit 2

3-après 5 min ajouter une grosse goutte

de tampon dans le puits 1

4-lecture après 20 min

remarque : si le trait de contrôle n'apparaît

pas il faut refaire un autre test

e-lecture et identification :

lecture de lame:

• Mise au point: x10 à la recherche de la zone idéale pour la lecture

(couche monocellulaire pour FM)
• Puis x100 (immersion à l'huile)

dg espèce parasitémie volume surface

FM + ++ % GR 1 µL 3-4 cm2
parasités

GE + difficile Parasites/le 3-5 µL 1-1,5 cm2

ucocytes
identification:

Identification de l’espèce basée sur:

• Morphologie GR: taille, forme, coloration, Granulations
• Morphologie du parasite
-PLASMODIUM FALCIPARUM :
• GR taille normale
• Polyparasitisme: 2-7/GR
• Trophozoïtes jeunes: Forme de bague à chaton, bracelet arabe ou
en Formes marginales (spécifique de P. falciparum)
• frottis monomorphe.
rmq:on n'observe pas des
schizontes ou rosaces ssi le
patient est agonisant.
-si la forme gamétocytes et
trophozoïte se présentent
chez le même malade donc il

est sous ttt antipaludique.

p.falciparum:
• Trophozoïtes âgés:
– Granulations: taches de Maurer
– Pigment malarique
p.falciparum

• Gamétocytes: ±
– En banane, croissant.
PLASMODIUM FALCIPARUM:
• Trophozoïtes jeunes:
p.falciparum

• Trophozoïtes âgés:
p.falciparum
gamétocytes:
p.falciparum

• Trophozoïtes sur GE:

 p.falciparum
• Trophozoïtes et gamétocytes sur GE:
plasmodium vivax:
• GR augmentés de taille ++
• Granulations de Schüffner plus grand que chez p.ovale
• frottis polymorphe.
• Trophozoïtes jeunes: grande taille, cytoplasme épais
• Trophozoïtes âgés: corps amiboïdes.
p.vivax:
• Schizontes:
– Jeunes: plusieurs noyaux, cytoplasme sans vacuole
– Âgés (rosaces): 16-18 jusqu’à 24 mérozoïtes
– Pigment malarique au centre
p.vivax:

• Gamétocytes:
– Arrondis, ovalaires
– Massifs
– Noyau excentré
p.vivax:

• Trophozoïtes jeunes sur FM

p.vivax:

• Trophozoïtes jeunes sur GE

p.vivax:

• Trophozoïtes âgés sur FM:

p.vivax:

• Schizontes sur FM:

p.vivax:

• Schizontes sur GE:

p.vivax

• Gamétocytes sur FM:

plasmodium ovale:
• Hématies:
– Granulations de Schüffner
– forme Ovales
– Extrémités pointues, frangées
• Trophozoïtes jeunes:
– Taille intermédiaire
– Noyau plus grand
– Polyparasitisme possible
– Granulations précoces
p.ovale

• Trophozoïtes âgés:
– Pas de corps amiboïdes
– Cytoplasme compact
– Gros noyau
– Pigment malarique
p.ovale:

• Trophozoïtes :
p.ovale
• Schizontes:
– Jeunes: 2-4 noyaux, compacts

-Âgés: souvent 8 noyaux (max 12)

p.ovale:

• Schizontes sur FM:

p.ovale:

• Schizontes sur GE:

p.ovale:

• Gamétocytes:
– Ronds, ovalaires
– Assez petite taille (< P. vivax)
p.ovale:

• Gamétocytes:
plasmodium malariae

• frottis polymorphe
• Hématies:
– Âgées: de petite taille
– Granulations: pointillé de Ziemann, difficile à voir avec
MGG
• Trophozoïtes jeunes:
p.malariae:
• Trophozoïtes jeunes:
• Assez grand.
• Présence d’un grain de pigment noir.
p.malariae

• Trophozoïtes âgés:
• Aspect en bande équatoriale
• caractéristique : cytoplasme, noyau et pigment sont
• allongés transversalement
PIGMENT Gros grains brun foncé très abondants
p.malariae
• Trophozoïtes âgés:
p.malariae
• Schizontes:
– Rosace: petite, gros amas de pigment au centre
– 6-8 mérozoïtes, max 8
– Corps en marguerite
p.malariae

• Schizontes sur FM:

p.malariae

• Schizontes sur GE:

p.malariae

• Gamétocytes
– Arrondis, ovalaires
– Pigment très abondant
p.malariae

• Gamétocytes
f-estimation de la parasitémie :
• Parasitémie= nombre de parasites (trophozoites ++) / µL de sang.
Intérêt:
– Pronostic : l’accès palustre à P. falciparum est considéré grave quand
nombre de GR parasités > 4%

– Thérapeutique: suivre parasitémie sous traitement pour évaluer l’efficacité

du traitement et chercher une résistance pour P. falciparum++
• Contrôles recommandés: J3, J7 et J30

Estimée sur le frottis mince ou sur la goutte épaisse.

• Frottis mince:
– Si nombre de parasites assez élevé.
– Compter le nombre d’hématies parasitées / nombre
d’hématies saines
– Lire 100 champs:
• Compter Hématies saines
• Compter Hématies parasitées
Calcul du % GR parasités:
Nombre GR parasités
Parasitémie = % GR parasités = X100
Nombre GR sains
▪Exemple:
–On compte 16 hématies parasitées dans 5 champs de ≈ 300
hématies chacun
Parasitémie = 16/1500 X 100= 1,06%
• Goutte épaisse:
– Si le nombre de parasites est faible
• Compter le nombre de parasites/leucocytes
• On estime que nombre moyen leucocytes = 8000/µL de sang
• Formules à utiliser:
8000 x nombre parasites comptés
Nombre parasites/µl=
nombre leucocytes comptés

▪Exemple:
–On compte 358 parasites et 205 leucocytes.

Nombre parasites/µL = (8000 x 358) / 205 = 13 971 parasites/µL

plan
2-leishmaniose:
2-1 intro
2-2-caractéristique de l'agent pathogène
2-3-mode de transmission
2-4 les leishmanioses
2-5-diagnostic biologique
2-leishmaniose
-intro:

Les leishmanioses sont des parasitoses du système monocytes-macrophages dont

l’agent pathogène est un protozoaire flagellé du genre Leishmania. Il s’agit d’une
zoonose, transmise de vertébré à vertébré par une insecte hématophage, le
phlébotome. Les leishmanioses incluent des formes viscérales (LV), des formes
cutanées localisées (LCL) et des formes cutanéomuqueuses (LCM).
2-agent pathogène:

Le parasite est un protozoaire flagellé tissulaire qui présente au cours de son cycle
deux stades évolutifs distincts :

● le stade amastigote, sans flagelle extériorisé, est intramacrophagique et retrouvé

chez les hôtes vertébrés dont l’homme
● le stade promastigote, libre et mobile grâce à son flagelle, est retrouvé dans
l’intestin du phlébotome et dans les milieux de culture( NNN)
+amastigote:

Les formes amastigotes sont ovoïdes, mesurent 2 µm à 6 µm et présentent en

microscopie optique, après coloration au May-Grünwald-Giemsa, deux inclusions
pourpres caractéristiques : le noyau, arrondi, et le kinétoplaste (origine du
flagelle) en bâtonnet plus sombre .
+ promastigotes: sont allongées, mesurant 10 µm à 25 µm de longueur .. Le
noyau est central, le kinétoplaste est en position antérieure et le flagelle libre s’
échappe à l’extrémité antérieure.

: Rosette de promastigotes
procycliques en culture

En culture à 27°C, sur milieu NNN (Novy, Neal, Nicolle), les amastigotes se
transforment en promastigotes comme dans l’intestin du vecteur.
3-mode de transmission:

-vectorielle(phlébotome femelle hématophage)

-toxicomanie

-voie congénitale

-par transfusion
4-les leishmanioses
a-Leishmaniose viscérale :
+agent pathogène: Leishmania donovani(hôte humain) ou Leishmania
infantum(l'hôte principal:chien)
+clinique:
fièvre irrégulière dans la journée et d’un jour à l’autre
splénomégalie
hépatomégalie
adénopathie
L’incubation est d’environ 1 à 4 mois L’infection peut rester asymptomatique dans
de nombreux cas.
b-Leishmanioses Cutanées :
période d'incubation 1 à 4 mois.
n'est pas douloureuse et guérit spontanément.
+agent pathogène:
 Leishmaniose cutanée
’ulcération cratériforme et Leishmaniose
croûteuse cutanée

Leishmanioses Leishmaniose cutanée

Cutanéo-Muqueuses diffuse
5-diagnostic biologique:
le dg repose sur la recherche de leishmania dans le liquide biologique
-questionnaire:
identité?,ttt,,région?,date d'apparition et nombre des lésion , loisirs ?(orientation)
a-Dans la leishmaniose cutanée et cutanéo muqueuse:
+Prélèvement:
• Avant traitement.
• Sur la lésion la plus récente.
• À l’aide d’une pince soulever la croûte et prélever à partir du tissu spongieux.
• Gratter les bords internes.
•prélever le suc dermique.
+Examen microscopique
• Frottis le plus mince possible
• 3 lames
• Fixation et coloration MGG
Recherche de la forme amastigote:
• intracellulaire également en extra cellulaires
• forme: Ovale 2-5 μm
• Noyau:coloré en rouge pourpre
• Kinétoplaste:violet
• Cytoplasme: bleu pâle
+Culture
• Intérêt de la culture:
Récupérer les faux négatif
Isoler la souche :typage enzymatique et étude de la sensibilité.
se fait sur Milieu NNN: Gélose salée fondue constitué de:
+sang de lapin frais décomplémenté
+quelques gouttes de PéniG/ Genta/ Amp
+quelques gouttes d’antifongique: 5FC
étapes de culture:
1-Primoculture:inoculation du suc dermique

2- Ajouter :• quelques gouttes d’eau physiologique stérile

• urine stérile (pour les souches difficiles à cultiver)

3- Incubation 27°C pendant 4 semaines

les amastigotes de tissu sont convertis en promastigotes mobiles puis se multiplient in vitro.

4-il faut Examiner de la culture + repiquage tous les 7 jours (pour le maintien des souches)

5- Lecture: observation d’une goutte de la phase liquide; Entre lame/ lamelle

rmq: 4 semaines avant de rendre un résultat négatif

•la culture est indispensable pour typage enzymatique de la souche

• Inconvénients de la culture:

– Longue, fastidieuse

– Contaminations bactériennes et fongiques

• Conditions d'asepsie

• Addition de Penicilline, Streptomycine et 5-flucytosine

+pcr:
Particulièrement utiles pour les faibles charges
parasitaires
• Spécificité de 100%
• Sensibilité+++
La PCR est un excellent outil de:
• diagnostic
• suivi
• d’identification d’espèce
b-leishmaniose viscérale:
+orientation clinique:
– Enfant en bas âge + (≤5 ans)
– Splénomégalie, Hépatomégalie, – Fièvre, pâleur, asthénie, amaigrissement
– NFS: pancytopénie des 3 lignées .
+prélèvement:MO, ponction splénique,hepatique, sang périphérique
3 tubes :
tube sec → sérologie

tube EDTA(Ethylenediamine tetraacetic acid) → PCR et frottis

+Culture:
leishmaniose viscérale est uncultivable .

+frottis+coloration MGG

+sérologie
ELISA: (réaction ag-ac) on utilise des microplaques qui contient
l'antigène fixé
 IFI:
•on utilise des lames sur lesquelles ilya des AG promastigotes fixé

Western-blot:
• La plus sensible
• Test de confirmation
 PCR classique /PCR en temps réel:

• Prélèvement:

couche leucocytaire du sang périphérique (tube EDTA)