Antiviraux

CES BactriologieBactriologie-Virologie

Professeur Moussa Fafa Ciss Mdecin Biologiste Facult de Mdecine de Dakar

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Introduction

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Historique
 Viroses = infections plus frquentes  Dveloppement timor dantiviraux  Peu molcules actives durant longtemps  Il y a 20 ans progrs notoires cause

cycle multiplication  Apparition du VIH  Antiviraux sont  Virostatiques inhibent multiplication  Pas virucides dtruisent pas virus
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 Connaissance

Dfis de la chimiothrapie
 Problme de la slectivit des cibles

gnrale  Peu de cibles purement virales  Signes cliniques sont tardifs  Traitement est toujours tardif  Reconstitution aire impossible  Absence traitement virus lents
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 Cytotoxicit

Trois groupes dantiviraux

 Molcules antivirales  Interfrons  Antiseptiques et dsinfectants

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05/02/2012

Antivirogramme

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Principe
 Essai in vitro

cellulaire  Virus et molcule tester  Dterminer  Concentration inhibitrice 50% (CI50)  Cytotoxicit 50% de produit

 Culture

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Tests dtermination CI50

 Rduction nombre plages de lyse  Rduction effet cytopathique

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Index thrapeutique
 Concentration cytotoxique 50% (CC50)  Concentration inhibitrice 50% (CI50)

 CC50 / CI50 Plus il est lev, plus antiviral est slectif

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Molcules antivirales

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Inhibiteurs de la fixation

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VIH
 Sulfate de dextran

sulfat  Agit in vitro sur le VIH  Inefficace in vivo non utilis

 Polyoside

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VIH
 Inhibition liaison

et gp120  Blocage de la gp120  Inhibition fusion pplos-membrane pplos Blocage de la gp41 Nombreuses molcules ltude
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 CD4/CCR/CXCR4

Inhibiteurs de la pntration

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Influenzavirus
 Molcules

(amine tricyclique)  Rimantadine (drive amantadine)  Spectre Influenzavirus A  Actives uniquement sur A  Inactives sur B et C  Indication prvention grippe A
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 Amantadine

Influenzavirus
 Protine M2 du matrix

lAmantadine  Gne de M2 est mut  Amantadine  Empche transport des ions H+  Diminution pH vacuole endocytose  Blocage fusion pplos/membrane
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 Fixe

Inhibiteurs de la dcapsidation

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Picornaviridae
 Plconaryl

loge dans sillon sommet icosadre  Rigidifie capside pas dcapsidation  Spectre in vitro  Rhinovirus  Entrovirus  Pas dAMM
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 Se

Inhibiteurs de la rplication

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Caractres gnraux

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Cibles des molcules

 ADN polymrases virales  ARN polymrases virales  Reverse transcriptase  Thymidine kinase virale

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Deux groupes de molcules

 Analogues des nuclosides

comptitifs des pol virales  Non analogues des nuclosides  Inhibiteurs non comptitifs pol virales
 Inhibiteurs

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Mcanismes daction
 Inhibiteurs nuclosidiques (IN)

normal remplac par IN  Consquences  Blocage synthse gnome viral  Synthse gnome viral anormal  Inhibiteurs non nuclosidiques (INN)  Fixation directe sur enzyme virale  Inactivation de lenzyme virale Inactivation
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 Nucloside

Analogues des nuclosides

 Anti herptiques  Anti rtroviraux (ARV)  Ribavirine

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Non analogues des nuclosides

 Anti rtroviraux (ARV)
 Nvirapine  Efavirenz  Delavirdine  Emivirine

 Anti herptique : Foscarnet

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05/02/2012

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Analogues nuclosidiques (IN)

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Anti herptiques

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Idoxuridine ou Iduviran, 1959

 Nature

: 5 iododsoxyuridine  Analogue structural de la thymidine  CH3 en 5 remplac par atome iode  Spectre  Trop toxique: intgr dans ADN aire  Collyre anti herptique
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 Nom

Trifluridine ou Virophta
 Nature

5 fluorodsoxyuridine  Analogue structural thymidine  CH3 en 5 remplac par atome fluore  Spectre  Trop toxique: intgr dans ADN aire  Collyre anti herptique
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 Nom:

Adnine arabinoside ou Vidarabine

 Nature

de la 2-dsoxyadnosine 2 Dsoxyribose remplac par arabinose  Spectre  HSV (encphalite), VZV  HBV  Assez toxique; mais voie gnrale
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 Analogue

Acycloguanosine ou Aciclovir, 1979

 Nature

de la 2-dsoxyguanosine 2 Sucre remplac par chane acyclique  Mcanisme  Tri phosphoryle par la Tkv  Puis intgr par ADNpol virale  Spectre: HSV, VZV (peu toxique)
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 Analogue

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Tkv du HSV1

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Drivs de lAciclovir
 Analogues de la 2-dsoxyguanosine 2-

ou Zelitrex  Prodrogue de lAciclovir  Famciclovir ou Oravir  Prodrogue du Penciclovir  Spectre  HSV, VZV (peu toxiques)  Biodisponibilit orale meilleure
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 Valaciclovir

Ganciclovir ou DHPG ou Cymevan

 Analogues de la 2-dsoxyguanosine 2-

remplac par chane acyclique  Phosphorylation  1re phosphotransfrase virale  2me et 3me kinases aires  Spectre  CMV  Toxicit hmatologique importante
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 Sucre

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Cidofovir ou Vistide ou Forvade

 Analogue phosphoryl

remplac par chane acyclique  Dihosphorylation kinases aires  Intgr dans ADNv  Spectre  CMV : rtinites +++  Nphrotoxicit rversible
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 Sucre

Anti rtroviraux (ARV)

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Caractres communs
 Structure

modifi en 3  Absence du groupement hydroxyle  Spectre  VIH1  VIH2  Cible : reverse transcriptase (inhibe)
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 Pentose

Azidothymine: Zidovudine, Retrovir

 Nature

de la thymidine  Pentose: OH en 3 remplac par azide  Mcanisme terminateur de chane  Tri phosphoryle kinases aires  Intgr par RT dans ADNv  Nom usuel: AZT; AMM en 1987
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 Analogue

Azidothymine: Zidovudine, Retrovir

 Affinit pour RT

>

ADNpol cellulaire

 Soppose infection nouvelles cellules  Aucune action sur le provirus  Toxicit leve: anmie, neutropnie ++

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Seconde gnration ARV

 Didanosine: ddi, Videx pancratite  Zalcitabine: ddc, Hivid neuropathies  Stavudine: d4T, Zerit neuropathies  Lamivudine: 3TC, Epivir
 Zeflix

HBV

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Troisime gnration ARV

 Abacavir: Ziagen  Emtricitabine: Coviracil

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Analogue de nuclotide

 Tenofovir

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Ribavirine ou Virazole ou Rebetol

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Caractres gnraux
 Troubles
 Neurologiques  Hmatologiques

 Analogue nuclosidique de la guanosine

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Spectre de la Ribavirine
 Virus hpatite C voie orale  Virus respiratoire syncytial arosol  Virus Lassa voie veineuse  Influenzavirus

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Inhibiteurs non nuclosidiques (INN)

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Anti rtroviraux

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Caractres gnraux
 Structure propre chaque molcule  Bonne biodisponibilit orale  Toxicit faible; demi-vie longue demi Apparition rapide mutants-R associer mutants-

IN et/ou  Anti protases  Spectre: VIH1 uniquement

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 Deux

Molcules INN
 Nvirapine ou Viramune  Efavirenz ou Sustiva  Dlavirdine ou Rescriptor  Emivirine ou Co-Actinon Co-

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Anti herptique

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Foscarnet ou PFA ou Foscavir

 Structure: analogue de pyrophosphate

phosphonoformique  Sous forme trisodique  Action sur la rplication  Inhibe ADNpol virale  Spectre: HSV, VZV, CMV  Toxicit rnale trs importante
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 Acide

Inhibiteurs de la maturation

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Cibles des molcules

 Spectre = VIH uniquement
 VIH1  VIH2

 Cible = protase virale

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Mcanismes daction
 Protines du gne pol
 Protase  Endonuclase  Intgrase

transcriptase  Gnes gag et pol protase virale  Gne env enzyme aire
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 Reverse

Principales molcules
 Indinavir: Crixivan  Nelfinavir: Viracept  Ritonavir: Norvir  Saquinavir: Invirase ou Fortovase  Amprnavir: Agenerase  Lopinavir: utilis associ au Ritonavir

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Inhibiteurs de la libration

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Cibles des molcules

 Spectre = Influenzavirus

A  Influenzavirus B  Cible = neuraminidase virale

 Influenzavirus

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Mcanisme daction
 Neuraminidase virale

rsidus dacide sialique  Libre virus fils  Facilite diffusion virus dans mucus  Molcules  Fixation au site catalytique de lenzyme  Inhibent son activit
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 Clive

Principales molcules
 Zanamivir ou Relenza

trs faible voie orale  Administre localement : inhalation  Oseltamivir ou Tamiflu  Voie orale

 Biodisponibilit

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Rsistances aux ARV

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mergence des mutants-R mutants Mutants-R Mutants-

pour tout ARV  Rsistance souvent croise entre ARV de la mme classe thrapeutique  Relation directe entre  Apparition mutants-R mutants Degr Rplication virale  Consquences : instaure une trithrapie
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 Existent

Trithrapie de base
 2 analogues nuclosidiques  Une anti protase

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Autres trithrapies
 Association

analogues nuclosidiques  Un inhibiteur non nuclosidique  Trois analogues nuclosidiques  Exemple du Trizivir compos de  Abacavir + Lamivudine + Zidovudine

2

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Interfrons

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Historique

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Isaacs et Lidemann, 1957

 Cellules membrane chorio-allantodienne chorio Infectes par virus grippe inactiv  Produisent un facteur protgeant  Cellules saines contre virus grippe vivant

National Institute Medicinal Research Londres

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 Facteur protgeant
 Proprits antivirales  Proprits anti-prolifratives anti Proprits immuno-stimulentes immuno-

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Dfinition des interfrons

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Dfinition 1
Protines dinformation cellulaire  Induites par une infection virale  Confrant aux cellules saines  Un tat de rsistance aux virus


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Dfinition 2
Cytokines triple action  Antivirale : inhibe rplication virale  Anti prolifrative: allonge cycle aire  Immuno-modulatrice: augmente Immunoactivit macrophages et NK  Produites par  Leucocytes, lymphocytes T  Fibroblastes

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Classification des interfrons

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Classification
 Type I 4 sous-types sous-

alpha : IFNE IFNE  Interfrons bta : IFNF IFNF  Interfrons [  Interfrons X  Type II 1 sous-type sous Interfrons gamma : IFNK IFNK
 Interfrons
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Cellules productrices
Lymphocytes et fibroblastes  IFN de type I  Protines de 166 acides amins  Lymphocytes T, T cytotoxiques, NK  IFN de type II  Protines de 146 acides amins  Signal de linduction de lIFN de type I est lARN bicatnaire viral

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Production des interfrons

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Production naturelle
Sources  Leucocytes  Fibroblastes  Rendements  Faibles  Cots levs  Inducteurs : ARN des Paramyxovirus

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Production industrielle
Purifier lARNm de lIFN  Rtro transcrire lARNm en ADN  Cloner lADN dans un plasmide  Exprimer le plasmide dans une bactrie


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Dclenchement de la synthse
Gne de lIFN  Est rprim dans la cellule normale  Drprim lors infection virale par  Acides nucliques viraux  Protines virales  Gne de lIFN ARNm IFN


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Biologie des interfrons

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Activit antivirale

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Caractres communs

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Caractres gnraux 1
 Premire activit reconnue

essentiellement aux IFN E et F  Provoque par la majorit des viroses  Activit indirecte  Dclenche production enzymes antivirales  Enzymes inactives au dpart  Actives aprs par constituants du virus
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 Due

Caractres gnraux 2
 Spcificit cellules productrices

aires spcifiques dIFN  tat antiviral induit dans cellules saines  Y persiste plusieurs jours  Rapparat avec une nouvelle infection  Pas de spcificit virale

 Rcepteurs

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Mcanisme activit anti virale

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05/02/2012

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Production de lIFN
 IFN produit dans une cellule infecte  IFN diffuse hors de cette cellule  Se fixe sur une cellule saine a n dun n

rcepteur cod par le chromosome 21  IFN entre alors dans la cellule saine

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2-5oligoadnylate synthtase 2 Catalyse synthse oligomres dadnine  Qui active la ribonuclase (RNAse L)  Do dgradation des ARNmv et ARNmc

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Protine kinase P
 Est une srine-thronine kinase srine Inhibe activit facteur longation EF2  Do rduction synthse protines virus

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Protine Mx = GTPase
 Inhibe multiplication virale en bloquant

nuclocapside  Synthse ARNv  Spectre de la protine Mx  Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae  Rhabdoviridae, Togaviridae  Types: MxA et MxB IFN E et F
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 Transport

Oxyde nitrique synthtase

 Catalyse oxydation arginine citrulline  Do production doxyde nitrique  Agent cytotoxique tuant lles infectes

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ARN spcifique adnosine dsaminase

 Catalyse dsamination adnosine inosine  Do modification post-transcriptionnelle post Do altration activit ARNmv et ARNmc

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Activit immuno-modulatrice immuno-

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Support = IFNK IFNK

 Il est produit par les cellules Th1  Actives par lantigne viral  Il dclenche alors immuno-stimulation immuno-

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Augmentation
 Expression

classes I et II du CMH  Sur les cellules B et les macrophages  Expression des rcepteur IL-2 IL Sur cellules T cytotoxiques

 Molcules

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Favorisation
 Activit des cellules NK  Activation macrophages et polynuclaires  Inhibition cellules Th2 renforce Th1

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Activit anti prolifrative

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Inhibition de la rplication

 Cellules NK  Cellules lymphokine activated killer  Tumor infiltrated lymphocyte

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Induction de lexpression
 Gnes suppresseurs tumeurs (IRF-1) (IRF Apoptose cellulaire

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Protine kinase

 Stimule activit suppresseur de tumeur  Induit apoptose cellulaire  Mdie stimulation plusieurs gnes

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104

05/02/2012

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Activit inflammatoire

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Inflammation = Synergie daction

 Interfron gamma  Tumor Necrosis Factor (TNF)

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Modalits de la synergie
 IFNK amplifie production de TNF par IFNK
 LPS

antignes bactriens  Synergie IFN + TNF  Synthse IL-6 dans les monocytes IL Activation gne de la NO synthtase

 Autres

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Indications des IFN

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Molcules disponibles

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Interfron E
 Larofron: IFNE-2a IFNE  Rofron-A: IFNE-2a RofronIFNE  Virafron: IFNE-2b IFNE  Introna: IFNE-2b IFNE

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111

Interfron F
 Avonex: IFNF1-a IFNF  Rebif: IFNF1-a IFNF  Betaferon: IFNF1-b IFNF

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112

Interfron K

 Imukin IFNK1-b IFNK

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113

Indications selon la pathologie

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114

Virologie
 Hpatite B chronique  Hpatite C chronique  Kratite herptique

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115

Oncologie
 Leucmie tricholeucocytes  Papillome laryng  Cancer du rein  Sarcome de Kaposi

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116

Inhibition des dfenses antivirales aires par E6 et E7

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Indications selon le type dIFN

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IFN alpha
 Hpatites B et C chroniques  Kratite herptique  Leucmies tricholeucocytes  Leucmies mylodes chroniques  Lymphome non hodgkinien  Lymphome cutan cellules T  Cancer du rein avec mtastases
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Autres IFN
 Interfron bta

volutives sclrose en plaque  Interfron gamma  Granulomatose septique chronique (dficit de la phagocytose)

 Pousses

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121

05/02/2012

122

Effets secondaires

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123

Caractres des effets

 Doses dpendantes  Temporaires  Rversibles arrt traitement

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Effets secondaires
 Syndrome pseudo grippal
 Asthnie

arthralgies  Fivre, frissons  Troubles digestifs  Nauses, vomissements  Diarrhes, douleurs abdominales
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 Cphale,

Effets secondaires
 Vertiges, hypotension  Tremblement, trouble mmoire  Dpression  Toux  Scheresse peau, alopcie  Modification acuit visuelle

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Surveillance rgulire
 Biologique
 Hmogramme

fonctions rnales  Exploration fonctions thyrodiennes  Clinique

 Exploration

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Mesure du taux dinterfron

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128

Produits pathologiques

 Sang  Liquide cphalorachidien

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Dosage biologique
 Titrage dun virus sensible IFN

cellules de la MCA  Unit = rduction 50% croissance virus  Rsultats du dosage  Seuil dtection 1-2 UI/ml 1 Valeur normale < 2 UI/ml

 Sur

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05/02/2012

131

Autres mthodes
 Dosage immunologique

RIA  Fluorimtrie  Dosage des anticorps anti IFN

 ELISA,

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132

Chimioprophylaxie antivirale

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Indications
 Prvention sur terrain affaiblis/ risque

soufrant de cancer  Traitement immunosuppresseurs  Sujets infects par le VIH  Chimioprophylaxie post exposition au virus

 Sujet

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Prvention par des molcules

 Greffes dorganes Aciclovir

c ur-poumon, rein, moelle ur Prvenir infection CMV  pidmie de grippe Amantadine  Cardiopathies  Infection respiratoire chronique  Vieillard  Ractivations HSV2 Aciclovir
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 Greffe

Prvention par des anticorps

 Hpatite A IgG polyvalentes  Varicelle IgG polyvalentes  Hpatite B chez nn IgG spcifiques  Rage IgG spcifiques

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Accident exposition au sang

 Associer ARV

analogues nuclosidiques  Une anti protase  Modalits  Dbuter dans 4 heures suivant AES  Dure: 4 semaines  Tenir compte statut patient source
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 Deux

Antiseptiques - Dsinfectants

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Groupes de molcules
 Aldhydes = dsinfectants

1%, glutaraldhyde 2%  Spectre : tout virus  Indications : matriel mdical  Alcools = antiseptiques  thanol 70, thylne glycol 70  Spectre : virus envelopps sauf HBV  Indications : peau, matriel mdical
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 Formol

Groupes de molcules
 Oxydants = dsinfectants, antiseptiques
 Produits

Javel, dakin, btadine, alcool iod  Permanganate de potassium 0,01%  Spectre : tout virus  Indications : peau, matriel mdical  Divers : savons, F propiolactone

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Groupes de molcules
 Oxydants = dsinfectants, antiseptiques
 Produits

Javel, dakin, btadine, alcool iod  Permanganate de potassium 0,01%  Spectre : tout virus  Indications : peau, matriel mdical  Divers : savons, F propiolactone

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Rsum gnral

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05/02/2012

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05/02/2012

144

05/02/2012

145

05/02/2012

146

05/02/2012

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Influenzavirus
 Fixation et libration (neuraminidase)

Zanamivir  Fusion-dcapsidation (protine M2) Fusion Amantadine, Rimantadine  Assemblage-maturation (protine M2) Assemblage Amantadine, Rimantadine  Transcription et rplication (enzymes)  Ribavirine
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 Oseltamivir,

Merci
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