Le Diagnostic

en Bactériologie (Suite)

Pr. A. Iyane SOW

Bactériologie – Virologie
4. Etapes du diagnostic direct
4.1. Examen macroscopique :
- Examen à l’œil nu
- Caractéristiques du produit pathologique
4.2. Examen microscopique :
- Examen à l’état frais
/ Préparation de bactéries vivantes
/ Entre lame et lamelles
/ Morphologie, mobilité
- Examen après coloration
/ Colorations simples (Bleu de méthylène)
/ Colorations différentielles (Gram, Ziehl Neelsen)
/ Colorations spéciales
Coloration de Gram :
- Frottis : sécher, fixer
- Coloration : violet de Gentiane (1 mn)
Renforcer avec le Lugol (1mn)

- Décoloration : eau + alcool

-Recoloration : Fuschine (30 sec.)

-Lavage : eau
-Sécher : papier buvard
-Observer : microscope (objectif 100
+ huile à immersion)
Morphologie, mode de groupement prédominant,
Gram positif (violet) ou négatif (rose)
Coloration de Ziehl Neelsen :
- Frottis : séché et fixé
- Coloration : fuschine + chauffage (3 fois en 10 mn)
- Décoloration : Bain d’acide (4 mn), Bain d’alcool (4 mn)
- Contre coloration : Bleu de méthylène (1 mn)
- Lavage, séchage
- Observation au microscope (objectif 100)
Acido – alcoolo – résistance
(conservation coloration rose)
4.3 Culture (ensemencement) :
- Isolement des bactéries en colonies
- Etude du type respiratoire
- Etude biochimique : exigences, sucres …
4.4. Etude antigénique :
/ Produit pathologique (antigènes
solubles)
/ Colonie (agglutination:
sérogroupe, sérotype)
4.5. Test de sensibilité : antibiogramme
4.6. Autres moyens de Diagnostic direct
* Diagnostic immunologique direct :
- Par test d’agglutination sur le
produit pathologique
- Par test immuno-enzymatique :
immunofluorescence directe (IFD) ou
méthode ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
* Diagnostic moléculaire : détection acide nucléique
- Par amplification génique (PCR : polymerase
chain reaction)
- Par Séquençage de gène
 5. Diagnostic sérologique
 Principe :
Basé sur la formation de
complexe antigène-anticorps
 Techniques :
. Immuno-enzymologie :
- ELISA - IFD
. Séroneutralisation
 Exemples
. Sérologie des
Streptococcies :
ASLO, ASDOR-B
. Sérologie syphilitique :
RPR, TPHA
. Sérodiagnostic de Widal
et Félix (salmonelloses)
. Sérologie de Chlamydia
 Produit pathologique

Macroscopie
- Consistance Microscopie Culture
- Odeur, couleur

Isolement
État frais Colorations Identification
- Mobilité - Gram, Giemsa Antibiogramme
- Morphologie - Ziehl-Neelsen
- Autres

Conservation
Diagnostic rapide
- Test au latex
- ELISA, IFD, IFI Sérologie
- PRC, Hybridation
MERCI