Streptocoques

GELOSE COLUMBIA AU SANG FRAIS + A.N.C

Milieu disolement slectif enrichi, adapt aux exigences des Streptocoques.
COMPOSITION : (pour 1L)
Peptone
Hydrolysat de protines
Amidon de mas
Chlorure de sodium
Sang frais de mouton
Acide nalidixique et colimycine (A.N.C)
Agar
LECTURE :
Observation Interprtation Conclusion

Colonie entoure dun
halo dclaircissement
total bord net


La bactrie dgrade,
entirement, de
lhmoglobine

Hmolyse


Colonie entoure dun
halo dclaircissement
partiel verdtre bord
flou


La bactrie dgrade,
partiellement, de
lhmoglobine

Hmolyse


Couleur rouge inchang
autour des colonies


La bactrie na pas
dgrade de
lhmoglobine

Hmolyse


INTERET :
Le mlange A.N.C inhibe la plupart des bactries Gram et certains Gram +
(Bacillus).
Streptocoques

GELOSE BILE ESCULINE AZIDE (BEA)
Milieu disolement slectif des Streptococcus D et Entrococcus.
COMPOSITION : (pour 1L)
Peptone
Extrait de levure
Bile de buf
Chlorure de sodium
Citrate de sodium
Esculine
Citrate de fer
Azide de sodium
Agar
LECTURE :
Prsence ou absence de culture (colonies)
Prsence : prsomption des bactries du genre Streptococcus
appartenant au groupe D et les bactries du genre Entrococcus
(uniquement prsomption car les milieux ne sont pas slectifs
100%).

Absence : les bactries tudies ne sont pas des bactries du genre
Streptococcus appartenant au groupe D et les bactries du genre
Entrococcus.

Couleur des colonies
Observation Interprtation Conclusion
Colonies entoures dun
halo noir
Hydrolyse de lesculine
par les bactries.
Esculinase +
Absence de halo noir Les bactries ne sont pas
capables dhydrolyser
lesculine
Esculinase -


Streptocoques

TEST DE LYSE PAR LA BILE : IDENTIFICATION DES
PNEUMOCOQUES
Streptococcus pneumoniae (pneumocoque) est le seul Streptocoque tre lys
par la bile ou les sels biliaires (test de Neufeld).
Ralisation du test
En milieu solide :
Dposer sur les colonies tester, obtenues sur glose au sang + sels biliaires
10%. Placer la bote 37C pendant 30min. Sil sagit dun Pneumocoque, les
colonies disparaissent. Seul le halo dhmolyse reste visible.
En milieu liquide :
Faire une suspension forte du germe tester en bouillon Todd Hewitt. La
partager dans 2 tubes hmolyse.
Dans un des tubes, ajouter 2 3 gouttes de sels biliaires.
Lautre tube sert de tmoin.
Mettre les tubes 37C pendant 30min.
Sil sagit du Pneumocoque, on note un claircissement de la suspension
additionne de sels biliaires, lautre tube reste trouble.

Coques gram +, ovalaires, groups par
2, catalase , hmolytiques, sensibles
loptochine, lyss par la bile
Forte suspicion de
STREPTOCOCCUS
PNEUMONIAE
Streptocoques

RECHERCHE DE LA SENSIBILITE A LA BACITRACINE ET A
LOPTOCHINE
TECHNIQUE :
Etaler un inoculum abondant de la souche tudier, en effectuant des stries
serres.
Puis dposer sur les premires stries, un disque imprgn dantibiotique.
Incuber 37C.
Aprs 24h, observer la prsence ou labsence de culture autour du disque.

LECTURE ET INTERPRETATION :
Culture
Zone dinhibition
Diamtre critique
Disque imprgn
dATB
Culture
Zone dinhibition
Diamtre critique
Disque imprgn
dATB
Diamtre dinhibition 12mm
La souche est sensible lATB test
Diamtre dinhibition < 12mm
La souche est rsistance lATB test

CONCLUSION :
Sensibilit la Bacitracine :
Si la souche tudie est un coque gram +, catalase -, -hmolytique, sensible
la Bacitracine, alors cest un Streptocoque du groupe A. On soriente vers
lespce Streptococcus pyogenes.
Sensibilit lOptochine :
Si la souche tudie est un coque gram + capsul, catalase -, -hmolytique,
sensible lOptochine, alors on suspecte fortement lespce Streptococcus
pneumoniae.
Streptocoques

GROUPAGE DES STREPTOCOQUES
TECHNIQUE :
Deux mthodes sont possibles
Mthode chimique Mthode enzymatique
2 gouttes nitrite de sodium
2 gouttes acide actique

Culture pure sur glose au sang du Streptocoque

Suspension paisse Suspension lgre dans
dans 1mL de bouillon 0,5mL de solution
Todd Hewitt enzymatique (pronase)
1h 20C 15min 37C

Le surnageant constitue lextrait antignique
REACTION ANTIGENIQUE :
Bien agiter les suspensions de latex (Ac)
Mettre 1 goutte de chaque suspension sur lame
Dposer 1 goutte dextrait (Ag) sur chaque goutte de
suspensions
Agiter
Lagglutination doit apparatre en moins de 2min.
REMARQUE :
Le groupage est surtout intressant pour les groupes A, B, C, F et G.
Le groupe D ne donne pas toujours des rsultats interprtables.
Streptococcus pneumoniae nest pas concern par ce groupage
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