RAPPORT

DE TRAVAUX
PRATIQUES DE
BIOCHIMIE

Réalisé par :
Knox Chali
Ayman El khamlichi
Hajar Arabi:
 I. ETUDE D'UNE GRAINE OLEAGINEUSE
1- Humidité et matières volatiles
L'humidité et matières volatiles sont déterminées selon la norme française "la perte
en poids pour un échantillon ayant séjourné, un temps suffisant, dans une étuve
chauffée à 100-105°C".

Méthode :

On a pesé à l’aide d’une balance analytique, une capsule de porcelaine ayant séjourner au
moins 30min dans une étuve réglée à 105°C et refroidie dans un dessiccateur :
m = 49,8927g

On a pesé, à l’aide d’une balance analytique, dans la capsule, 5g± 0,5 g d'échantillon et
répartir uniformément la substance sur tout le fond : soit m1 =5,0351g

On a mis la capsule contenant l'échantillon dans une étuve préalablement réglée à 103 
2°C.

Après 4h, on a fait sortir l'échantillon de l'étuve et mettre immédiatement dans un

dessiccateur et on a laissé refroidir Puis peser capsule + échantillon.

Remettons le tout dans l'étuve, attendre 1h et refaire la pesée. Répétons l'opération jusqu'à
ce qu’entre 2 pesées successives la différence de masse est inférieure ou égale à 5 mg.
Soit m2 la masse obtenue à la dernière pesée m2 = 52,7223 g Alors la teneur en eau et
matières volatiles en % est :

(m1 - m2)
---------------- x 100 =106,3079 g
(m1-m)

2- Cendres :

Méthode :

- Pesons exactement un creuset en porcelaine, bien propre et passé en

Flamme vive et refroidi dans un dessiccateur.
 - puis on a pesé, dans le creuset, l'échantillon à analyser (généralement
5g environ).

- calcinons, doucement l'échantillon directement sur la flamme jusqu'à

arrêt de dégagement de la fumée et poursuivons la calcination dans un
four dont la température est réglée à 550°C jusqu'à n'avoir que
des cendres.

- transférons ensuite creuset et cendres dans un dessiccateur et

laissons refroidir puis peser.
On obtient : m1 = 5,0997g m2=107,2052g m=107,0257g

- déterminons la teneur en cendres exprimée en % de masse par rapport à

la matière sèche:

la teneur en cendres exprimée en % : m2/m+m1 *100 = 95,61%

3- Matière grasse :

3.1. Teneur en matière grasse

La matière grasse est extraite par solvant.

Méthode :

10 g d'échantillon préalablement broyés sont mis dans une cartouche et placés dans le
corps de Soxhlet.

Le tout est monté sur un ballon de 250 ml préalablement taré et contenant 150 ml de N-
Hexane.

Chauffons à reflux jusqu'à 20-25 cycles.

Evaporons le solvant ou rota-vapeur et puis sèche à l'étuve.
On réalise l'essai en double.
On obtient la masse de l’huile extraite du graine : 121,9134 g
Déterminons la quantité de matière grasse exprimée en % de masse par
rapport à la matière sèche (RENDEMENT ) :
(121,913-120,443/10,6648) *100 = 13,78 g
3.2. Etude qualitative de la matière grasse :

3.2.1. Indice de saponification :

Définition :

L'indice de saponification est le nombre de mg de KOH nécessaire pour transformer en

savons les acides gras libres et sous forme d'esters contenus dans un gramme de matière
grasse.

Principe :

On réalise une saponification des acides gras et des esters de la matière grasse par une
solution alcoolique de KOH en excès, et on titre cet excès par une liqueur aqueuse
d'HCL.
Matériel :

- ballon à fond rond ou plat de 250ml

- réfrigérant.
- pipette jaugée de 25ml
- burette de 50 ml.

Réactifs :
- Solution éthanolique de KOH 0,5 N
- Solution d'HCL titrée 0,5 N
- Solution de phénolphtaléine à 1% dans l'éthanol à 95%.
Mode opératoire :
On pèse dans un ballon, au mg prés, 1 à 2 gr ( On obtient : m=1,489 g )
de matières grasses suivant l'indice présumé et on y ajoute 25 ml exactement mesurés de
la solution alcoolique de KOH. Le ballon sera connecté au réfrigérant à reflux et
l'ébullition sera maintenue pendant 1 heure. Celle-ci sera régularisée par addition de
quelques billes de verre. Après la déconection du réfrigérant, on ajoute 4 à 5 gouttes de
phénolphtaleine et on titre avec l'HCL 0,5N jusqu'à la disparition de la couleur rose. Un
essai à blanc est réalisé dans les mêmes conditions sans additions de matière grasse
Les volumes obtenus après titrage :
-ESSAI A BLANC : Veq= 16,8 ml
-HUILE : Veq= 6,9 ml

56,11 (no-n) f
Indice de saponification = ------------------ =56,11*(16,8-6,9)*0.5/1,489 = 186,59 KOH/g
P
no = nombre de millilitre d'HCL utilisés pour l'essai à blanc
n = nombre de millilitres d'HCL utilisés pour l'essai.
f = titre de la solution d'HCL
p = prise d'échantillon exprimée en gr.

3.2.3. Indice d'acide :

Définition : L'indice d'acide est le nombre de mg de potasse nécessaire pour

neutraliser l'acidité d'un g de matière grasse.

Réactifs :

* éthanol à 95° neutralisé en présence de phénolphtaleine (à neutraliser)

par NaOH N/10.
* phénophtaleine : solution à 1% dans l'éthanol.
* soude N/10.

Mode opératoire :

Dans un Erlenmeyer de 250 ml, on a pesé m= 5,095g d'huile et on a ajoute 25 ml

d'éthanol chaud préalablement neutralisé et 2 gouttes d'indicateur.

Titrons avec NaOH N/10 en agitant énergiquement jusqu'à coloration rose persistante 30
secondes , le volume obtenu a l’equilibre est Veq = 1,1 ml .

Indice de Peroxyde
Détermination de l'indice de peroxyde d’après
la Norme NFT 60 220
I - Principe
Traitement du corps gras en solution dans de l'acide acétique et du chloroforme par une
solution d'iodure de potassium. Titrage de l'iode libérée par une solution titrée de
thiosulfate de sodium

II - Définition
On entend par indice de peroxyde d'un corps gras le nombre de milliéquivalents
d'oxygène contenus dans un kilogramme de produit et oxydant l'iodure de potassium avec
libération d'iode.

III - Réactifs
Tous les réactifs doivent être exempts d'oxygène.
- Mélange de 10 ml de chloroforme et de 15 ml d'acide acétique privé d'oxygène par
barbotage d'azote.
- Solution aqueuse saturée d'iodure de potassium récemment préparée.
- Solution aqueuse N/100 de thiosulfate de sodium. Cette solution doit être refaite tous les
deux jours.
Indicateur d'iode (rem. 28610 187 Prolabo)

IV - Mode opératoire

Dans un erlenmeyer de 250 ml faire passer de l'azote pur et sec pendant environ 10
secondes.
Fermer l'erlenmeyer immédiatement.
On a pese m = 2,0405 g de corps gras et ajouter 25 ml du mélange 3.1. Dissoudre en
agitant.
Ajouter 1 ml d'iodure de potassium. Agiter.
Abandonner au placard pendant 5 mn.
Ajouter rapidement environ 75 ml d'eau pour arrêter la réaction.
Ajouter l'indicateur d'iode. Si une couleur violacée apparaît après agitation énergique, il y
a présence de peroxyde.
Titrer immédiatement avec le thiosulfate de sodium jusqu'à disparition de la coloration
violette.
Effectuer dans les mêmes conditions un essai à blanc.
Resultat :
INDICE DE PEROXYDE :
LES VOLUMES OBTENUS APRES TITRAGE PAR
THIOSULFATE:
-Huile: Veq=10,2 ml
-Essai a blanc : Veq = 1,8 ml

II- METHODES D'ANALYSE SUR DES SOLUTIONS PURES

1- Dosage des sucres réducteurs par la méthode de BERTRAND

• Mode Opératoire :
 Précipitation et lavage de l’oxyde cuivreux.
 Réoxydation de l’oxyde cuivreux par le sulfate ferrique.
  Dosage du sulfate ferreux formé par
permanganate de potassium.

• Schéma :
Solution titrée : permanganate de potassium
Solution titrante : sulfate ferreux formé

• Réactions :

• Tableau des volumes :

V1 (ml) V2 (ml) VT
15,7 13,9 14,8
 Détermination de la teneur en glucose en g /I dons la solution inconnue
en utilisant les tables de Bertrand :

D’après la table V=14,8 ml correspond à49,16 g/I de glucose.

2-DOSAGE DES SUCRES REDUCTEURS : METHODE VOLUMETRIQUE DE
LUFF-SCHOORL
• Mode Opératoire :
On met dons un erlenmeyer 200mI. 25ml de réactif de Luff
:
10ml deLa solution sucrée et 20ml d’eau. Ensuite port »
rapidement ò ébullition sous réfrigérant ò reflux pendant
l0min : après refroidissement sous un courant d’eau froid.
On ajoute 10 ml de la solution KI et 25 ml H2SO4. Puis on
titre par le thiosulfate de sodium en présence d'emploi
d'amidon
On fait les mêmes étapes pour préparer I ’essai ô blanc
mais sons la solution
Sucrée.
• Schéma :
Espèce chimique : 10ml de la solution sucrée + 25 ml de la solution de LUFF-
SCHOORL

Réactions :
• Tableau des volumes :

N (ml) n (ml) N-n (ml)

25 10 15

Le poids en (mg) de sucre réducteur :

D’après le tableau le poids de sucre réducteur est 38,5 mg

CINETIQUE ENZYMATIQUE

• Mode Opératoire :

On met dons 6 tubes ô essai un volume de saccharose et l’eau et L'extrait de levure

est introduit dons chaque tube ò 1 minute d’intervalle.
Au bout de 20 minutes, On plonge le 1er tube dons un bain Marie bouillant. Une
Minute après on ajoute le 2^ e tube .... Et ainsi de suite.
Trois minutes après l’introduction du dernier tube dons le bain Marie, On retire les
tubes.
On transvase le contenu de chaque tube dans un erlenmeyer.
-On ajoute dons chacun des erlenmeyers contenant les différents
hydrolysats, exactement 10 ml de solution Ode 0,1/10.
-On verse ensuite goutte ò goutte ò l’aide d’une burette, lentement et en
agitant bien, I5mI de NaOH 0, I /10 (la durée de l’opération doit être de 2
minutes|.
On laisse les erlenmeyers ò l’obscurité pendant 15 minutes.
-Au bout de ce temps, On acidifier Légèrement avec 2 ml d’acide sulfurique
(H2SO4) N environ afin d’éviter une oxydation ultérieure de L’acide
monocarboxylique formé.
-On titre l’iode en excès par I ‘hyposulfite de sodium 1/20 en présence
d’empois d'amidon en fin de titrage. II y a décoloration progressive.
• Schéma :

• Réactions :

• Tableau des volumes :

V1 (ml) V2 (ml) V3 (ml) V4 (ml) V5 (ml) V6 (ml)

10 9,9 8,3 7,5 7,2 17