ANNEE ACADEMIQUE 2018-2019

UNIVERSITE DE LOME

FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE

RAPPORT DU TP DE BIOCHIMIE

BCH 211 : TP de biochimie structurale

TITRE DE MANIPULATION : ETUDE DES GLUCIDES SIMPLES

LES NOMS DES PARTICIPANTS

NOMS ET PRENOMS PARCOURS N° DE CARTE

KPABLE Estèle Lamoussa BPA 368031

KPATCHA Mezesso BPA 426799

KPESSILO Kévine BPA 428982

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 PLAN DU TRAVAIL

Introduction

I - Analyse qualitative des sucres

1 – matériels

A – Réaction de miroir d’argent

a – Protocole expérimentale

b – Résultats et interprétation

B – Réaction de liqueur de Fehling

a – Protocole expérimentale

b – Résultats et interprétation

C – Méthode basé sur la réduction de l’acide picrique

a – Protocole expérimentale

b – Résultats et interprétation

D – Réaction de MOLISCH

a – Protocole expérimentale

b – Résultats et interprétation

II - Etude quantitative : microdosage du glucose par l’acide dinitrosalicylique

A – principe

1 – Matériels et méthodes

2 – Résultats et interprétation

Conclusion

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INTRODUCTION

I. ANALYSE QUALITATIVE

Principe

Cette analyse est basée sur le pouvoir réducteur des sucres qui est une propriété caractéristique des
fonctions hémiacétaliques libres.

1. Matériels
 Des tubes
 Solution de glucose 2g/l
 Solution de l’ammoniaque 50%
 Solution de nitrate d’argent à 5%
 Solution de sulfate cuivrique à 2,5%
 Solution de tartrate sodico-potassique à 10%
 Solution de soude à 5%
 Solution alcaline de picrate de Na
 Solution saturée de carbonate de Na
 Solution alcoolique d’alpha- naphtol
 Solution d’acide sulfurique pur

A. REACTION DE MIROIR D’ARGENT

a) Protocole expérimentale

Nous avons préparé un tube dans lequel on a mis 5 ml de solution de nitrate d’argent à 5% et de
l’ammoniaque à 50%. Il y a eu apparition d’un précipité sur lequel nous avons continué à ajouter de
l’ammoniaque jusqu’à la redissolution complète du précipité. Nous avons ensuite ajouté 3ml de
solution de glucose à 0,2% et chauffé le tube pendant quelques minutes (environ 5 min).

b) Résultats et interprétation

Il se dépose sur la paroi du tube une couche d’argent métallique.

Ce dépôt de couche d’argent métallique provient de la réduction de l’ion Ag+ du nitrate en métal
d’argent Ag par le glucose qui s’oxyde en acide gluconique selon la réaction suivante :

B. REACTION DE LIQUEUR DE FEHLING

a. Protocole expérimentale

Nous avons mis dans un tube 2ml de solution de sulfate cuivrique à 2,5% puis ajouté 2ml de solution à
10% de tartrate sodico-potassique, ensuite 5ml de solution de soude à 5% et enfin 5ml de solution de
glucose à 0,2% puis porté l’ensemble à l’ébullition.

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 b. Résultats et interprétation

Il y a eu apparition d’un précipité jaune rougeâtre qui est devenu rouge par la suite.

Au cours de la réaction entre la liqueur de Fehling et le glucose, les ions cuivrique II oxyde le glucose
pour donner le gluconate libérant ainsi des électrons qui sont captés par le cuivre qui se réduit en
cuivre I. ce dernier se combine à l’oxygène ionisé pour donner un précipité insoluble d’oxyde de
cuivre I (Cu2O) de couleur rouge brique selon l’équation :

Glucose + 3OH Gluconate + 2H2O + 2e- I

2Cu2+ +2OH- + 2e- Cu2O + H2O II

Glucose + 2Cu2+ + 5OH- Gluconate + Cu2O + 3H2O

Précipité rouge brique

C. METHODE BASE SUR LA REDUCTION DE L’ACIDE PICRIQUE

a Protocole expérimentale

Nous avons introduit dans un tube 2ml de solution de glucose à 0,2% puis 2ml de solution alcaline de
picrate de Na et 0,5ml de solution saturée de carbonate de Na. On a mis ensuite l’ensemble dans un
bain-marie bouillant pendant 5 à 10 min.

b Résultats et interprétation

Nous avons obtenu une coloration rouge brune intense

Le glucose en solution alcaline et sous l’effet de la chaleur s’oxyde en gluconate libérant ainsi les
protons et les électrons. Ces électrons sont ensuite captés par l’acide picrique qui est réduit en acide
picramique qui donne à la solution une couleur rouge brune selon l’équation suivante :

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 D. REACTION DE COLORATION CARACTERISTIQUE : REACTION DE
MOLISCH
a. Protocole expérimentale

Nous avons ajouté à 5ml de solution de glucose à 0,2% 1ml de solution alcoolique d’ α-naphtol à 1%.
On a versé ensuite cette solution (glucose + s. alcoolique d’α-naphtol) dans un tube contenant 2ml
d’acide sulfurique pur lentement.

b. Résultats et interprétation

On a obtenu à la surface des deux liquides un anneau pourpre.

La réaction entre l’acide sulfurique et l’eau est une réaction exothermique. En milieu acide concentré
et à chaud, le glucose se transforme en dérivé hydroxyméthylfurfural par cyclisation et déshydratation.
Ce dérivé se condense avec deux molécules d’α-naphtol pour donner un anneau de pourpre de couleur
violette qui apparait à l’interface des deux liquides.

 Réactions

II. ETUDE QUANTITATIVE : MICRODOSAGE DU GLUCOSE PAR LE REACTIF

DE DNS

PRINCIPE

Après la défécation, on met à profil le pouvoir réducteur du glucose pour former un complexe coloré.
En milieu alcalin et à chaud, le glucose réduit le DNS qui joue le rôle d’oxydant et le glucose,
réducteur.

1) Matériels et protocole expérimentale

a) Réactifs et Matériels
 Les réactifs
 Solution de glucose
 De l’eau distillée
 Solution de jus de coco
 Deux solutions inconnues X1 et X2
 Le réactif de DNS

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  Le matériel
 Des tubes à essai
 Des pipettes graduées
 Un bécher
 Une vase pour le chauffage des tubes

b) Protocole expérimentale

A partir d’une solution de glucose à 0,2%, nous préparons une gamme de 6 solutions dont la solution
témoin dans des tubes à essai selon le tableau ci-dessous :

Tubes Témoin 1/5 1/10 1/20 1/25 1/50

Glucose (ml) 0 0,2 0,1 0,05 0,04 0,02

Eau distillée (ml) 1 0,8 0,9 0,95 0,96 0,98

Volume total (ml) 1 1 1 1 1 1

Concentration (g/l) 0 0,4 0,2 0,1 0,08 0,04

CiVi = CfVf Cf = exemple : Cf1/5 = = 0,4 g/l

Après avoir préparé la gamme d’étalonnage, nous avons reçu 3 solutions dont une solution de jus de
coco et deux solutions inconnues X1 et X2. Nous avons ajouté 1 ml du réactif de DNS à chaque tubes
ensuite on a agité tous ces tubes puis porté à l’ébullition à 100°C pendant 5min. Nous plaçons ensuite
le tout dans un bain d’eau glacée afin d’arrêter la réaction. Nous ajoutons 10 ml d’eau distillée dans
chaque tube puis agiter en les renversant. Après 20 min nous sommes passés à la lecture des densités
optiques.

Exceptionnellement pour la solution de jus de coco à cause de sa concentration très élevée, nous avons
prélevés 1 ml que nous avons dilué avec 9 ml d’eau distillée pour un volume total de 10 ml juste avant
la lecture des D.O.

c) Résultats et interprétation

Les résultats sont consignés dans le tableau ci-dessous :

TUBES 1/50 1/25 1/20 1/10 1/5 X1 X2 J/10

D.O 0,01 0,02 0,02 0,02 0,12 0,06 0,11 0,04

A partir de ces résultats, nous avons pu tracer la courbe d’étalonnage à base duquel nous allons
déterminer graphiquement les concentrations des solutions inconnues X2 et X2 ainsi que la solution de
jus de coco J/10.

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GRAPHIQUEMENT : X1 = 0,22 g/l X1 = 0,38 g/l J/10 = 0,15 g/l

 CALCUL DES CONCENTRATION INITIALES DU GLUCOSE DANS LES TUBE X 1

X2 et J

 Pour X1

Cf = 0,22 g/l vi = 1 ml vf = 12ml [ ]

 Pour X2

Cf = 0,38 g/l vi = 1ml vf = 12 ml [ ]

 Pour J/10

Cf = 0,15 g/l vi = 1ml vf = 10 ml [ ]

 Pour J

Cf = 1,5g/l vf = 12ml vi = 1 ml [ ]

Dans chaque tube, l’acide 3,5-dinitrosalycilique est réduit par le glucose en acide 3-amino-5-
nitrosalicylique ; composé de couleur rouge orangé selon l’équation suivante :

La coloration du composé est proportionnelle à la concentration du sucre réducteur présent dans la

solution. L’acide 3-amino-5-nitrosalicylique absorbe la lumière à la longueur d’onde de 540nm. Ainsi,
le DO augmente avec l’intensité de la coloration et du coup avec la concentration en sucre. Ainsi il a
fallu diluer le jus de coco fortement concentré (18 g/l) avec une coloration intense au 1/10 afin
d’obtenir un DO qui ne dépasse pas 1.

CONCLUSION