Université Abou Bekr Belkaïd Année universitaire 2019-2020

Faculté SNV-STU
Département de Biologie
1 ère Année Master Biochimie

TP 1 : Dosage colorimétrique de la glycémie, cholestérolémie et triglycéridémie par

méthode enzymatique

1. Objectif
 Détermination de la glycémie, cholestérolémie et triglycéridémie d’un patient par un dosage
enzymatique ;
 Calcul de la glycémie, la cholestérolémie et triglycéridémie du patient et interprétation des résultats.
2. Matériel et réactifs
 Centrifugeuse ;
 Vortex ;
 Spectrophotomètre et colorimètre ;
 Becher 50 ml, fiole jaugé 500 ml, éprouvette 500 ml ;
 Tubes à hémolyses ;
 Micropipettes 10-50 µl, 50-200 µl et 100-1000 µl ;
 Microcuves en plastiques ;
 Cônes blancs, bleus et jaunes ;
 Kit de dosage de glucose ;
 Kit de dosage de cholestérol ;
 Kit de dosage des triglycérides.
3. Méthodologie
3.1. Dosage de la glycémie
La détermination du glucose dans le sang se fait par des dosages enzymatiques selon la méthode de Trinder,
1969.
Le kit de dosage comprend les réactifs suivants :
 Réactif 1 : Tampon pH 7.4 + solution phénolique ;
 Réactif 2 : Enzymes GOD et POD + 4-AF ;
 Réactif 3 : Etalon de glucose à 100 mg/dl.
3.1.1. Solution de travail
 Dissoudre le contenu du réactif 2 dans le flacon du réactif 1.
La solution de travail est stable pendant un mois au réfrigérateur ou 7 jours à température ambiante.
3.1.2. Méthode de dosage

Blanc Étalon Échantillon

Solution de travail 1 ml 1 ml 1 ml

Étalon 10 µl

Sérum 10 µl

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  Vortexer les tubes et incuber pendant 10 min à 37°C ou 20 min à température ambiante.
 Lire la densité optique de dosage DOD et la densité optique de l’étalon DOE contre le blanc à 505 nm.
3.1.3. Calcul :
Taux de glucose = (DOD/DOE) × 100 mg/dl
3.2. Dosage de la cholestérolémie
La détermination du cholestérol dans le sang se fait par des dosages enzymatiques selon la méthode de Fasce,
1982.
Le kit de dosage comprend les réactifs suivants :
 Réactif 1 : Tampon pH 6.9 ;
 Réactif 2 : Enzymes (CHE, CHOD et POD) ;
 Réactif 3 : Etalon de cholestérol (200 mg/dl).
3.2.1. Solution de travail
 Dissoudre le contenu du réactif 2 dans le flacon du réactif 1.
La solution est stable pendant un mois au réfrigérateur ou 7 jours à température ambiante.
3.2.2. Méthode de dosage

Blanc Étalon Échantillon

Solution de travail 1 ml 1 ml 1 ml

Étalon 10 µl

Sérum 10 µl

 Vortexer les tubes et incuber 5 min à 37°C ou 10 min à température ambiante.

 Lire la densité optique de dosage DOD et la densité optique de l’étalon DOE contre le blanc à
505 nm.
3.2.3. Calcul
Taux de cholestérol = (DOD/DOE) × 200 mg/dl
3.3. Dosage de la triglycéridémie
La détermination de la triglycéridémie dans le sang se fait par des dosages enzymatiques selon la méthode de
Bucolo et David, 1973 ; Fossati et Prencipe, 1982.
Le kit de dosage comprend les réactifs suivants :
 Réactif 1 : tampon pH 7.5 et p-chlorophénol ;
 Réactif 2 : enzymes (LPL, GK, GPO, POD) et 4-AP et ATP ;
 Réactif 3 : Etalon de triglycéride (200 mg/dl).
3.3.1. Solution de travail
 Dissoudre le contenu du réactif 2 dans le flacon du réactif 1.
La solution est stable pendant 1 mois au réfrigérateur ou 7 jours à température ambiante.

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 Méthode de dosage

Blanc Étalon Échantillon

Solution de travail 1 ml 1 ml 1 ml

Étalon 10 µl

Sérum 10 µl

 Vortexer les tubes et incuber 5 min à 37°C ou 10 min à température ambiante.

 Lire la densité optique de dosage DOD et la densité optique de l’étalon DOE contre le blanc
à 505 nm.
 Calcul :
Taux de triglycérides = (DOD/DOE) × 200 mg/dl