Travaux dirigés

Pharmacologie des récepteurs

(Dr. Mohamed Bejaoui)

Exercice 1

Figure 1 : Affinité (vert, première barre) et efficacité (mauve, deuxième barre) de

différentes molécules pour les récepteurs de l’histamine H2.

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1- Définir : affinité et efficacité

2- Donner la nature des composés suivants vis à vis des récepteurs H2 en justifiant
votre réponse: Histamine, N-guanylhistamine et cimétidine. Dessiner les courbes log-
dose réponse de ces trois composés (sur le même graphique)

3- Le récepteur H2 est un récepteur membranaire couplé à la protéine Gs.

Décrire à l’aide d’un schéma bien détaillé l’effet de la liaison de l’histamine à son
récepteur H2

Exercice 2

Figure 2 : Comparaison des relations log-concentration-réponse de l’isoprénaline (•) et le

prénalterol (◦) médiées par les récepteurs β-adrénergiques sur trois tissus. L'ordonnée
montre la réponse sous forme de fraction de la réponse maximale à l'isoprénaline
(Adaptée de Kenakin, T. P., and Beek, D., J. Pharmacol. Exp. Ther., 213, 406–413,
1980).

1- Qu’elle est la nature du ligand isoprénaline?

2- Qu’elle est la nature du ligand prénatrol? Expliquer l’allure de la courbe dans le

digitorum longus.

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Exercice 3

Figure 3 : Interaction entre l'histamine et l'impromidine sur des récepteurs H2 de

tissus ventriculaires isolés du myocarde humain. La courbe concentration-réponse
sur la gauche est pour l'histamine seule, et celles de droite montrent la réponse à
l'impromidine agissant soit seule (en carrés) soit en présence d'une concentration
constante (100 μM) d'histamine.

1- Commenter l’allure de la courbe histamine + impromidine

2- Dessiner la courbe concentration-réponse de l’histamine en présence d’une

concentration fixe d’impromidine (10 µM)

Exercice 4

Utilisez l'équation ci-dessous pour répondre aux questions :

1- Quelle concentration de ligand serait nécessaire pour un agoniste complet avec un

KD de 8 nM pour obtenir une réponse de 0,75?

2- Quelle réponse serait générée par un agoniste partiel avec Emax de 0,70 et un KD de
100 nM à une concentration de 250 nM?

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Exercice 5

Le KD d’un substrat naturel pour son récepteur membranaire est de 2 µM. Quatre
groupes de recherche étudient les inhibiteurs de ce récepteur. Tous déclarent leurs
données sous forme de valeurs IC50. Le meilleur inhibiteur de chaque groupe de
recherche est indiqué dans le tableau ci-dessous :

Num lab IC50 (nM) [S] testée

(µM)
1 30 500
2 100 100
3 25 10
4 50 1,000

Quel groupe de chercheur a développé l'inhibiteur le plus puissant sur la base de la

valeur de Ki?

Exercice 6

Pour déterminer la constante d’équilibre (K D) d’un ligand pouvant être directement

radiomarqué, on utilise une méthode dite « par saturation ». Pour cela, on prépare 2
séries de plusieurs tubes :

 Série S1 : récepteur concentration constante + radioligand en concentration

croissante
 Série S2 : récepteur concentration constante + radioligand en concentration
croissante + large excès de ligand froid

Après incubation pour atteindre l’état d’équilibre, le contenu de chaque tube est filtré
et la radioactivité retenue sur le filtre est mesurée à l’aide d’un détecteur à
scintillation. On détermine ainsi la liaison totale et la liaison non spécifique, puis on
déduit la liaison spécifique du radioligand. Connaissant la liaison spécifique L*R pour
chaque concentration en L*, on obtient la courbe de saturation suivante :

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1- Est-il nécessaire de vérifier que le ligand froid et le radioligand ont la même affinité
pour le récepteur avant d’utiliser la méthode par saturation ? Répondre par oui/non.

2- Quelle est la série de tube permettant de déterminer la liaison totale ? La liaison

non spécifique ? Justifier

3- Déterminer graphiquement le KD du ligand

4- Donner le nom de l’autre représentation graphique utilisée dans la méthode de

saturation pour déterminer avec plus de précision le KD du ligand. Expliciter sur un
schéma les points remarquables de cette représentation graphique. (on ne demande
pas de tracer la courbe avec les vraies valeurs mais juste un schéma à mains levé)

Exercice 7

L’adipocyte, unité fonctionnelle de tissu adipeux, permet d’étudier le rôle de diverses

molécules dans le stockage ou la mobilisation des lipides. La synthèse et le stockage
des triglycérides sont contrôlés notamment par l’insuline alors que la lipolyse
(hydrolyse des triglycérides) dépend des catécholamines.

Des études de liaison de 3H clonidine, un agoniste α2-adrénergique, ont été réalisées

sur des fractions membranaires d’adipocytes humains (figure ci-dessous) :

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1- Déterminer graphiquement, à partir de la figure, l’ordre de grandeur de la constante
de dissociation et du nombre maximal de sites de fixation de la clonidine tritiée vis-à-
vis de ses récepteurs membranaires au niveau des adipocytes humains.

Le résultat d’études d’inhibition compétitive de la liaison 3H clonidine, utilisée à la

concentration de 10nM sur des fractions membranaires d’adipocytes humains, par
plusieurs ligands adrénergiques, est présenté sous la forme de leur CI 50 (concentration
de molécule qui inhibe 50% de la liaison spécifique 3H clonidine).

Les agonistes α2-adrénergiques inhibent la lipolyse sur les adipocytes intacts en

culture. La CE50 est la concentration de ligand adrénergique pour laquelle on observe
une inhibition de 50% de l’activité lipolytique induite par la théophylline.

Le tableau ci-dessous présente les résultats des CI50 et des CE50 obtenus.

2- A l’aide des résultats présentés dans le tableau ci-dessus, comparer et commenter

les affinités et les activités α2-adrénergiques et lipolytiques des différentes molécules.

3- Quel est le second messager impliqué dans la transduction du signal consécutif à la

liaison d’un agoniste sur les récepteurs α2-adrénergiques des adipocytes ?

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Exercice 8

Des expériences de saturation des récepteurs µ (mu) cérébraux de rat avec un agoniste
opiacé, le 3H-DAGO sont réalisées. Le volume de chaque essai est de 2 mL. La
concentration en protéines de la préparation membranaire est de 0,33 mg/essai.
L’activité spécifique du radioligand est de 157 404 dpm/mole.

Les résultats de l’expérience sont analysés à l’aide de la représentation de Scatchard

(Fig.1)

Des expériences de compétition sont effectuées en déplaçant le 3H-DAGO par des

concentrations croissantes de naloxone ou de tramadol. La concentration de 3H-DAGO
utilisée pour les expériences de compétition est de 1,05 nmol.L-1.

Les courbes de compétition obtenues sont représentées sur les figures 2 et 3. Pour
l’échelle des abscisses de ces deux figures 1e-06 correspond à 1 micromole, 1e-05 à 10
micromoles…

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1- A l’aide de la représentation de Scatchard, déterminer les deux paramètres
(concentration en sites récepteur rapportée à la quantité de protéines de la
préparation membranaire et KD) permettant de caractériser la liaison du 3H-DAGO aux
récepteurs mu opiacés.

2- A l’aide des courbes de compétition, déterminer les valeurs de CI50 et de Ki pour

chaque compétiteur.

Quelles conclusions en tirez-vous quant à l’affinité de ces différents composés pour les
récepteurs µ (mu) ?

3- Ces deux médicaments possèdent-ils les mêmes propriétés pharmacodynamiques?

Commenter brièvement votre réponse.