République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

ECOLE NATIONALE SUPERIEURE DE BOITECHNOLOGIE

Compte rendu du TP n°2 de Biochimie structurale

Caractérisation des fonctions cétone et aldéhyde par identification des

groupements carbonyles

NOM :BELGACEM

PRENOM :RAYANE

SECTION :A

GROUPE :2

NOM DE L’ENSEIGNANT :

2016/2017
1-But du TP :
Le but de ce TP c’est l’identification et la mise en évidence des
groupements fonctionnels des sucres (fonctions aldéhyde et cétone). Et
donc de comprendre la spécificité de chaque teste en vue de
l’identification de substance glucidiques inconnues.

2-Principe :
Durant ce TP différentes méthodes de caractérisation biochimique ont
été employées. Parmi les méthodes utilisées, le teste de Molisch, le test
de Fehling et le test de Bial partageaient le même mode de
fonctionnement. En effet, ce sont des réactions de deshydratation des
sucres (de plus de 4 carbones) en présence d’un acide fort, qui conduit à
la formation d’un furfural ou un hydroxyméthylfurfural. Ces derniers
composés peuvent se condenser par la suite avec l’α-naphtol, le
résorcinol ou l’orcinol pour donner un composé coloré, caractéristique
de chaque test.
En milieu acide et à cahud les oses (5C et +) sont déshydratés
en furfural et dérivés de furfuralSe condensent avec les
phénols et donnent:Produits colorés caractéristiques des oses

2-1-Principe de teste de Molisch :

Il s’agit d’un test général qui permet de mettre en évidence la nature

glucidique d’une substance. En présence d’acide fort, les oses de 5
carbones et plus subissent une déshydratation et se transforment en des
dérivés furfuraliques. Ces derniers, se condensent avec l’α-naphtol pour
donner un composé coloré. La réaction est dite positive lorsqu’un anneau
violacé apparait dans le tube à essai.
2-2-Principe de teste de Bial :

Test caractéristique des pentoses. En milieu fortement acides, les

pentoses subissent une déshydratation et se transforment en composés
furfuraliques. Ces derniers réagissent avec l’orcinol et le fer pour donner
une couleur bleuâtre.

2-3-Principe de test de Seliwanoff :

Ce test permet de distinguer les cétoses dans un milieu donné, car en

milieu acides les sucres possédant une fonction cétone se déshydratent
plus rapidement que ceux ayant une fonction aldéhyde.
Les réactifs utilisés dans ce test sont l’acide chlorhydrique et le
résorcinol. Dans ce milieu, les oligosaccharides et les polysaccharides
subissent une hydrolyse acide qui donne des sucres simples et des
composés furfuraliques comme le furfural qui réagit avec le résorcinol et
donne une couleur rouge foncé après condensation.

Les autres tests qui ont été réalisés sont le test de Tollens et le test de
Fefling. Ce sont des réactions d’oxydoréduction qui auront lieu en
présence d’un aldéhyde (Tollens) ou d’un sucre réducteur (Fehling).

2-4-Principe de test de Tollens :

l’argent ammoniacal présent dans le réactif subit une réduction par la

fonction aldéhyde du sucre. Cette réduction conduit à la libération de
l’argent métallique qui viendra se déposer sur la surface interne du tube
à essai.

R-CHO + 2 [Ag(NH3)2]+ + 3 OH- → 2 Ag + R-COO- + 4 NH3 + 2 H2O

Test positif avec les aldéhydes (miroir d'argent).
Test négatif avec les cétones (pas de miroir).

2-5-Principe de test de fehling :

en présence d’un sucre réducteur, le cuivre présent dans la liqueur de
Fehling subit une réduction en oxyde cuivreux de couleur rouge brique.

3-MATERIEL ET MODE OPERATOIRE :

3-1- pour le test de molisch :

3-1-1-Matériel :

- Solution de glucose, fructose, galactose, lactose.

- Liqueur de Molisch.
- Pipettes jaugées de 1 et 2ml, micropipette 1000 μl.
- Tubes à essai avec portoir.
- Bain-marie.
3-1-2-MODE OPERATOIRE :

2 ml de chaque solution de sucre (Glucose, Fructose, Galactose et

Lactose) de concentration connue de 2% ont été prélevés à l’aide d’une
micropipette et mis dans un tube à essai. Trois gouttes du réactif ont été
ensuite rajoutées dans chaque tube. Après avoir secoué manuellement
les tubes, 2 ml d’une solution pur d’H2SO4 a été rajoutée délicatement.
L’observation s’effectue quelques secondes après.

3-2-pour le test de fehling :

3-2-1-Matériel :
- Solution de glucose, fructose, galactose, lactose.
- Liqueur de Fehling (A+B).
- Pipettes jaugées de 1 et 2ml, micropipette 1000 μl.
- Tubes à essai avec portoir.
- Bain-marie
3-2-2-MODE OPERATOIRE :

quatre tubes à essai ont été rempli avec 2 ml d’un mélange

équivolumique de liqueur de Fehling A et B. Un millilitre de chaque
solution de sucre 2% a été rajouté. L’observation a été effectuée après
incubation des tubes dans un bain-marie à 85 °C pendant 3 min.

3-3-pour le test de Tollens :

3-3-1-Matériel :

- Solution de glucose, fructose, galactose, lactose.

- Réactif de Tollens.
- Pipettes jaugées de 1 et 2ml, micropipette 1000 μl.
- Tubes à essai avec portoir.

3-3-2-MODE OPERATOIRE :

Le test de Tollens a été effectué en introduisant délicatement 2 ml de

chaque solution de sucre 2% dans des tubes à essai pré-rempli avec 2 ml
du réactif de Tollens. Durant ce test, deux observations ont été
effectuée, une après 8 min et la deuxième après 15 min d’incubation à
température ambiante.

3-4- pour le test de Seliwanoff :

3-4-1-Matériel :

- Solution de glucose, fructose, galactose, lactose.

- Réactif de Seliwanoff.
- Pipettes jaugées de 1 et 2ml.
- Tubes à essai avec portoir.
- Bain-marie.

3-4-2-MODE OPERATOIRE :
Le test de Seliwanoff a été réalisé en mettant 2 ml du réactif dans
chaque tube à essai. Deux millilitres de chaque solution de sucre 2% ont
été ensuite rajoutés. L’observation a été effectuée après 3 min
d’incubation dans un bain-marie à 85 °C.

3-5- pour le test de Bial :

3-5-1-Matériel :

- Solution de glucose, fructose, galactose, lactose.

- Réactif de Bial.
- Pipettes jaugées de 1 et 2ml, micropipette 1000 μl.
- Tubes à essai avec portoir.
- Bain-marie.

3-5-1-MODE OPERATOIRE :

- Mettre 2ml de réactif de Bial dans des tubes à essai différents.

- Rajouter 2 ml de sucre dans chaque tube
- Chauffer dans un bain- marie bouillant
- Faites votre observation après refroidissement

3-6- pour la solution X :

En se basant sur les expériences précédentes et sur vos acquis, identifiez

le diholoside contenu dans la solution X en suivant une démarche
scientifique bien réfléchis.
- Détaillez votre démarche.
- Notez les observations/résultats obtenus à chaque étape.
- Discutez vos résultats.
- Est-il possible d’identifier le diholoside ? Si oui, donnez son nom, si
non expliquez pourquoi il n’est pas possible de l’identifier.
N.B : Mettre également vos observations sous forme de tableau
4-Résultats :

4-1-Test de Molisch :
Un anneau violacé (ou couleur foncée) indiquant une réaction positive a
été obtenu avec l’ensemble des sucres testés.

sucres glucose fructose galactose lactose

TEST + + + +

Tableau 1 : Résultats du test de Molisch avec les sucres étudiés.

4-2-Test de Fehling :

Après incubation à 85 °C pendant 3 min, on a observé un précipité rouge

brique avec l’ensemble des sucres.

sucres glucose fructose galactose lactose

TEST + + + +

Tableau 2 : Résultats du test de Fehling avec les sucres étudiés.

4-3-Test de Tollens :

Dans ce test, deux observations ont été réalisées, une première après 8
min et une deuxième après 15 min d’incubation à température
ambiante. Après 8 min seuls le Glucose et le Galactose présentaient un
miroir d’argent. Après 15 min d’incubation nous avons observé que le
Fructose a donné également un résultat positif avec ce test.

sucres glucose fructose galactose lactose

8 min + - + -

15 min + + + -

Tableau 3 : Résultats du test de Tollens avec les sucres étudiés.

4-3-Test de Seliwanoff :
Seulement le fructose a donné une réaction positive avec ce test
(couleur rouge).

sucres glucose fructose galactose lactose

test - + - -

Tableau 4 : Résultats du test de Seliwanoff avec les sucres étudiés.

4-5-Le test de Bial :

Dans ce test .une observation à été réalisée.toutes les réactions sont négatives.

sucres glucose fructose galactose lactose

TEST - - - -

Tableau 5 : Résultats du test de Bial avec les sucres étudiés.

4-6-Identification de la solution X :

il nous a été demandé de mettre en place une série d’expériences afin

d’identifier le diholoside contenu dans la solution X. Notre démarche a
été la suivante :
1- il a été déjà mentionné que la solution X contient un sucre, nous
avons commencé avec le test de Molisch . Le résultat de ce test était
positif avec la solution X.
2- nous avons décidé de faire un test à la liqueur de Fehling afin de
vérifier s’il s’agit d’un diholoside réducteur ou non. Le résultat avec le
test de Fehling était négatif.
3- Nous avons voulus par la suite vérifier la nature des sucres qui
composent notre diholoside inconnu. Alors on a fait un test de Tollens
pour vérifier la présence d’aldoses. Le résultat de ce test était négatif.
4- Afin de vérifier si notre diholoside contient un ou plusieurs cétoses,
on a réalisé un test de Seliwanoff .Le test a donné une réaction positive
avec la solution X.
5- Finalement, un test de Bial a été effectué afin de vérifier la présence
de pesntoses. Le résultat était négatif avec ce test.
6- L’ensemble des résultats est représenté dans le tableau 6.
Test Molisch Fehling Tollens Seliwanoff Bial

Résultat + - - + -

Tableau 6 : Résultats des avec la solution X

5-Interprétation des résultats :

Dans ce TP nous avons réalisé plusieurs expériences pour identifier des
sucres ou plus exactement les fonctions aldéhyde et cétone. nous avons
obtenu un résultat positif avec le test de Molisch pour l’ensemble des
sucres a cause de la nature des sucres testés qui contient un nombre de
carbones supérieur à 4. Grace au test de Fehling nous avons montrer le
caractère réducteur de l’ensemble des sucres testés, c soit pour des
sucres simples (Glucose, Fructose, Galactose) ou un diholoside (Lactose).
Nous avons aussi mettre en évidence la fonction aldéhyde avec le test de
Tollens. Parmi les sucres testés, seuls le Glucose et le Galactose ont
donnés un miroir d’argent au bout de 8 min d’incubation. Nous avons
observé également après 15 min le même résultat avec le Fructose. Ceci
s’explique par la nature du réactif de Tollens qui représente un milieu
alcalin. Il est connu qu’en milieu alcalin le fructose subit une
isomérisation en glucose, une réaction qui est encore plus rapide avec la
chaleur. Ceci explique le retard d’apparition du miroir d’argent avec le
fructose car l’incubation a été réalisée à température ambiante. Bien
que le Lactose (composé de galactose et glucose) présente un carbone
anomérique libre, Finalement, le test de Seliwanoff nous a permis de
mettre en évidence la fonction cétone du seul cétose testé, le fructose,
le reste des sucres sont des aldoses donc pas de réaction.
Concernant la solution X, nous avons confirmer la nature glucidique de
cette solution par le test de Molisch. De plus, il que le diholoside inconnu
ne présente pas un pouvoir réducteur, ce qui implique que les deux
sucres qui le composent engagent, tous les deux, leurs carbones
anomériques dans la liaison osidique. A partir de cette dernière
observation, il a était tout à fait normal d’obtenir un résultat négatif
avec le test de Tollens, vu l’absence de carbones anomériques libres.
Contrairement au réactif de Tollens (basique), le réactif de seliwanoff est
composé de 33% d’HCL pur, ce qui permet une hydrolyse efficace de
notre diholoside à chaud. Ceci explique l’obtention d’un résultat positif
avec ce test.aussi la réaction avec le réactid de bial a montré que notre
diholoside n’est pas un pentose.
A partir des résultats obtenus, nous pouvons conclure que notre
diholoside, n’est pas réducteur, il est composé de deux sucres qui
engagent, tous les deux, leur carbone anomérique. Le diholoside
contient au moins un cétose, la vérification de la présence d’un aldose
n’étant pas possible avec le réactif de Tollens (même en essayant de
faire une hydrolyse acide avant de faire ce test, le résultat est
inexploitable car les ions chlorures du HCl vont précipiter l’argent
présent dans le réactif). De plus, l’ensemble des tests utilisés sont des
tests qui permettent de mettre en évidence une fonction (aldéhyde ou
cétone) ou un caractère (réducteur par exemple), aucun des tests n’est
spécifique d’un sucre en particulier.
La solution X c’ést un diholoside qui contient au moin un fructose.

6-Conclusion :

Durant ce TP différentes méthodes de caractérisation biochimique ont

été employées dans le but de l’identification et la mise en évidence des
groupements fonctionnels des sucres (fonctions aldéhyde et cétone). Et
donc comprendre la spécificité de chaque teste en vue de l’identification
de substance glucidiques inconnues. Alors on peut connaitre la nature ,
les propriétés les caractéristiques de chaque sucre en appliquant
plusieurs testes spécifiques.