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INTRODUCTION

Dans le cadre du cours de pharmacognosie définie comme étant la science ayant

pour objet l’étude de la connaissance des substances naturelles à usage thérapeutique et
identification de drogues végétales.

Les plantes médicinales utilisées en médecine traditionnelles sont douées des

propriétés thérapeutiques, nutraceutiques ainsi que toxiques.

Ces différentes activités sont étroitement liées à la présence des métabolites

primaires et/ou secondaires présents dans ces espèces. Aussi, ces métabolites constituent une
source non négligeable tant comme modèle pour la synthèse chimique ou comme matière
première pour l’hémisynthèse des produits pharmaceutiques dite médicaments.

En dehors de cours théorique il était nécessaire de passer au séance pratique afin

de concilier les théories appris ainsi cette manipulation était la pratique de ceux que nous
avons eu à observer dans la manipulation précédente (Du Premier cycle) toujours dans le
cadre du même cours.

Il était question de faire la microscopique dans le but d’identifier des

métabolismes primaires des drogues végétales, de faire les analyses chromatographiques de
drogue enfin

Ce présent rapport de manipulation reprendre en dehors de l’introduction,

explication des différents phénomènes observés exploités, présentation des résultats, l’analyse
des résultats trouvés et en fin la conclusion.
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I. EXPLICATION DES DIFFERENTS PHENOMENES

OBSERVES EXPLOITES

I.1 EXPLICATION DES PHENOMENES OBSERVERS ET EXLOITES AU COUR DE

L’ESSAI MICROSCOPIQUE.
L’ess ai microscopique étant un examen pouvant nous permettre d’identifier les
éléments cellulaires en utilisant la poudre pulvérisée prélever d’une partie de la plante ou de
la plante entière.
Comme nous l’avons dit ci-haut il était question d’identifier les métabolites primaires
(éléments cellulaire) inclus dans la drogue a l’aide de notre protocole de la manipulation.
 La plante utiliser pour l’analyse est Muccuna progget
Comme pour toutes identisation des éléments cellulaire nous avons toujours besoin
des réactifs pouvant nous permettre à aboutir à l’identification les uns des autres, alors dans
le cas d’identification des métaboliste primaire de notre drogue.
Nous avons utilisé comme réactif :
 Eau
 Hydrate de chloral 50%
Tout en suivant notre mode opératoire qui était de :
 Prélever un poigné de la poudre de drogue
 Etaler sur la lame porte-objet jusqu’à avoir une couche mince
 Ajouter une goutte d’hydrate de chloral 50%.
 Couvris la préparation avec la lamelle
 Passer à la lecture au microscope à l’objet 10X et 40X

I.2 EXPLICATION DE DIFFERENTS PHENOMENES OBSERVE EXPLOITES AU

COUR DE L’ANALYSE CHROMATOGRAPHIQUE
La chromatographie utiliser pour notre analyser était la chromatographie sur couche
mince (CCM) permettant d’identifier le constituants d’un mélange et ces constituants d’un
mélange homogène qui sont séparés par un entrainement moyen d’un solvant appeler Eluant
ou phase mobile sur un support appeler Phase fixe ou stationnaire.
Voici les étapes :
 Une petite quantité du mélange à séparer est déposée sur le support (la
Plaque de chromatographie).
 Le support est ensuite placé au contact de l’éluant.
 L’éluant migre de bas en haut, par capillarité, le long du support.
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 L’éluant entraine ainsi les constituants du mélange vers le haut du support.

C’est le phénomène d’élution.
 Chaque constituant migre d’une certaine hauteur, caractéristique de la
Substance. C’est la migration différentielle.
 Il suffit alors de comparer la migration de ces constituants avec des espèces
Chimiques de référence ou témoins. C’est l’analyse comparative.

Le but de cette analyse au cours de notre manipulation était d’identifier la présence des
flavonoïdes toute en les séparant ainsi nous avons comme :
 Phase mobile : Solvant qui est de l’eau
 Phase stationnaire : Silice
Nous avons utilisé comme échantillons : Piliostigma thonningii ( kifumbe dans la langue
Lemba)
Les réactifs utiliser sont :
 L’eau
 Acide formique
 Acide acétique glaciale
 Acide acétyle
 Neu : ALCI3 éthanolique a 1% et NH3
Les matériels utiliser :
 Cuve chromatographie avec couvercle
 Plaque de chromatographie
Le témoin utiliser est :
 La kératine
La proportion était de :
 Acétate d’éthyle : 100 parties(6,7ml)
 Acide formique : 11 Parties(90,9ml)
 Acide acétique glaciale : 11 parties(90,9ml)
 L’eau : 27 parties(37,04ml)
Après nous avons sponter sur la plaque et laisser sécher et puis aller la placer dans la
cuve verticalement et nous avons laissé l’éluant migrer vers la zone frontale en entrainant les
différents constituants qui était marques par les taches. Les résultats vous serez présenté dans
le point suivant.
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I.3 EXPLICATION DES DIFFERENTS PHENOMENE OBSERVES EXPLOITE AU

COURS DE L’IDENTIFICATION DE METHABOLITE PRIMAIRE
Au cours de cette identification de métabolite primaire nous avons recherché
plusieurs métabolites commençant par l’identification de Glucide
Par rapport à l’identification de glucide qui se réalise par une réaction colorée avec
des caractéristiques dichotomiques dans un mélange dont on ignore sa composition en termes
de sucre.
Les tests réaliser au cours de cette partie de la manipulation sont :
1. Test de Tollens
Qui est un réactif de nitrate d’argent ammoniacal, qui est un agent oxydant et lui-
même réduit en métal argenté et forme un Miroir d’argent lorsqu’il agit avec des aldéhydes
pour former des acides carboxyliques.
Ce réactif est préparé dans une éprouvette en mettant : 1ml d’AgNO3 5% dans l’eau ;
0,5ml de NaOH 10% et ajouter goutte à goutte environ 0.25 ml d’NH4OH (jusqu’à
dissolution du précipité gris). En utilisant le témoin positif qui est le glucide aldéhydique.
A l’aide de notre mode opératoire nous avons abouti au résultat

2. Test a ioduré
Ce test à l’iode permet d’identifier l’amidon en se fixe sur les chaines polysaccharidiques
pour donner des complexes qui sera colorés.
La solution de Lugol : 1 g I2 + 2 g KI dans 100 ml d’eau distillée.
Dans Un extrait aqueux (1g dans 10 mL) obtenu par décoction, filtré et 2 mL est
Mélangé avec 1 ml d’Hcl 1N, suivi de la solution de Lugol. L’apparition de la couleur
Bleue ou bleu-noir montre la présence de glucide (polysaccharidiques complexes).
Nous avons utilisé un témoin positif qui est glucide complexe.

II.PRESENTATION DES RESULTATS ET ANALYSE

II.1 les résultats de l’essai microscopique
La plante utiliser est Muccuna poggei
Par rapport a cette plante nous avons identifié :
 Le Parenchyme
 Poil tecteur
II.2 Les résultats du criblage phytochimique
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Le criblage phytochimique nous a révélé la présence des flavonoïdes nous les avons
observés à la lampe UV-Visible a une longueur d’onde de 350nm. L’observation se fait après
avoir pomper sur la plaque le réactif de Neu.
La plante utiliser pour l’analyse est : Piliostigma thonningii ( kifumbe dans la langue
Lemba)

II.2.1. Quelques autres tests, Test de Bial , Barfoed et de Selivanoff

Pour :
1. Test de BIAL
Ce test nous permet de détecter des pentoses.

2. Test de BARFOED
Il nous permet d’identifier la présence d’oses monomères de sucre comme le glucose,
Fructose.

3. Test de SELIVANOFF
Il nous permet de faire la différence entre les aldoses des pentoses.
II.3. Le résultat de TOLLENS
Apres infusion de feuilles de la plante Paullinia pinnata le résultat était positif
prouver par la formation d’un miroir d’argent au fond du tube dans le quelle contenait l’extrait
de la plante et le réactif de Tollens. Ainsi nous pouvons affirmer la présence d’un groupe
d’aldéhydique.
Le test de Tollens était positif pour le témoin positif qui était le saccharose parce
qu’il ya eu l’apparition du miroir d’argent dans le tube ou contenait une solution aqueuse de
saccharose et le réactif de Tollens.
Le test de Tollens était négatif lorsque le témoin était négatif qui était l’eau distillée
car elle ne contient pas du sucre.
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II.4. Résultats du test au LUGOL

Le test de Lugol de l’infusé de Paullinia pinnata s’était révélé négatif donc il ya pas
eu l’apparition d’une coloration bleu noir dans le tube contenant l’infusé de paullinia pinnata
et l’iode iodure cela veut dire qu’il n’ya pas présence de Polysaccharides complexe.
Le test de Lugol était positif pour le témoin positif qui était l’amidon nous avons remarquer
l’apparition de la couleur Bleu qui tendait vers la couleur noire qui prouver la présence de
polysaccharides complexe.
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CONCLUSION
Pour clore cette manipulation était d’une grande importance dans notre formation entant
que future pharmacien car nous avons eu à accomplir les objectifs de cette travaux pratique
qui était de :
- Faire l’essai microscopique pour l’identification des métabolites primaire
- Identifier de flavonoïde par analyse chromatographique
- Réaliser l’identification des métabolites primaire.
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ANNEXE
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