Nom : Prénom: n°groupe:

TP : Séparation des constituants d'un mélange par

chromatographie
Consignes de sécurité de base:
Porter une blouse en coton, pas de nu-pieds
Porter des lunettes, des gants (en fonction des espèces chimiques manipulées)
Pas de lentilles de contact
S’attacher les cheveux
En cas de doute sur la manière de procéder en manipulant une espèce chimique, demander
au professuer ou se reporter au ''Classeur du laboratoire''.
Commentaires : Compétence Compte rendu: Bilan:
expérimentale:

1)Rappels sur la chromatographie

1.1)La plaque pour chromatographie est constituée d'une feuille d'aluminium sur laquelle est
déposée une couche mince de silice poreuse. Cette mince couche constitue la phase stationnaire.
La partie inférieure de cette plaque est plongée dans un solvant liquide ou un mélange de solvants
appelé éluant. Le solvant s'élève par capillarité le long de la couche mince : il constitue la phase
mobile. La chromatographie est basée sur la différence d'adsorption des constituants du mélange
sur la phase fixe balayée par l'éluant. Une substance, soluble dans l'éluant, est entraînée le long
de la couche mince, ce phénomène est appelé élution. Plus la solubilité de la substance dans
l'éluant est grande, plus la distance parcourue par elle le long de la couche mince est grande. On
définit pour une espèce chimique donnée, le rapport frontal (Rf) par le rapport de la distance
parcourue par l'espèce chimique (milieu de la tache) sur celle parcourue par l'éluant (front).

La chromatographie sur papier est une

chromatographie de partage basée sur la
différence de solubilité des espèces à séparer.
La phase stationnaire et formée par l'eau liée au
molécules de cellulose du papier.

La chromatographie sur couche mince et la

chromatographie sur colonne sont des
chromatographies d'adsorption ; elles sont
basées sur la différence d'adsorption sur la
phase stationnaire, des espèces à séparer
entraînées par l'éluant.
1.2)La vitesse de déplacement d'une substance éluée :
Une liaison entre deux atomes est polarisée si ces deux atomes sont
différents.
Une molécule est polaire si les barycentres de charges positives et
négatives ne sont pas confondus. Ainsi la molécule d'eau est polaire et
la molécule de tétrachlorométhane ne l'est pas.
La vitesse de déplacement d'une substance dépend de ses affinités
électrostatiques avec les molécules qui constituent l'éluant. Ainsi une
molécule ayant une forte affinité avec l'éluant se déplacera plus vite
qu'une molécule ayant peu d'affinités.
1.3)Le rapport frontal

Le rapport frontal Rf est une caractéristique d'une espèce

chimique, dans un éluant donné et sur un support donné.
Il est défini par :

distance parcourue par l ' espèce chimique 

Rf = = x/y
 distance parcourue par l e front de l ' éluant 

2)Application :

Quelles sont les grandes étapes d'un

protocole que vous proposeriez afin de
vérifier que les colorants présents dans
un sirop de menthe sont bien ceux
indiqués sur l'étiquette ci-contre ?

3)Manipulation
3.1)Préparation du matériel
A partir de la lecture du protocole proposé ci-dessous, cocher sur la liste suivante le matériel
nécessaire.
becher de 25 mL, 50 mL, 100 mL, pique apéritif,
ampoule à décanter, papier filtre,
verre à pied, sèche cheveux.
pipette et poire à pipeter, sirop de menthe,
pince métallique, solution de chlorure de sodium
burettes de 25 mL, 50 mL, colorants alimentaires jaune, vert et bleu patenté,
cuve à chromatographie, acide éthanoïque pur,
éprouvettes graduées de 50 mL, 250 mL, fioles jaugées de 50 mL, 100 mL, 500 mL,
erlenmeyer de 100 mL, solution d'ammoniac concentrée,
plaque de silice prédécoupée, éthanol,
solution de chlorure de sodium 30 gL-1.
 3.2) Extraction du ou des colorants :

Il faut séparer les colorants des autres espèces chimiques qui composent le sirop. Dans un
premier temps on utilise une propriété des molécules qui constituent la laine ; celles-ci fixent les
molécules de certains colorants.
Ensuite il faudra séparer les colorants de la laine avant de concentrer la solution en
évaporant l'eau.
1)Fixation des colorants.
Dans un becher verser 25 mL de sirop et ajouter sous la hotte, 3 gouttes d'acide éthanoïque
pur. (voir fichier "utilisation d'une pipette"). Ajouter les brins de laine et faire bouillir 10 minutes.
(puissance de la plaque aux 2/3 max) Sortir la laine du becher à l'aide de pinces métalliques et
rincer à l'eau chaude.
2)Extraction des colorants.
Il faut faire dégorger les colorants qui se sont fixés sur la laine. Mettre la laine dans un
becher contenant une solution d'ammoniac (20 mL d'eau et deux gouttes de solution concentrée
d'ammoniac).
Faire bouillir très doucement jusqu'à ce que la solution se colore (ajouter si nécessaire
quelques gouttes de solution d'ammoniac). Retirer la laine à l'aide de pinces et concentrer la
solution par évaporation d'eau sans amener à sec.

3.3)Caractérisation des colorants

1)Préparation de la cuve à chromatographie.

L'éluant à utiliser sera constitué d'un mélange de 5 volumes d'éthanol et de

1 volume d'une solution de chlorure de sodium à 30 g.L-1. Placer l'éluant
dans la cuve (1/2 cm en hauteur) et fermer celle-ci à l'aide de son
couvercle afin de saturer la cuve en vapeurs d'éluant.

2)Préparation de la plaque à chromatographie.

Attention, en manipulant la plaque, ne pas mettre les doigts sur la silice,

tenir la plaque par la tranche. Tracer un trait au crayon à 1 cm du bas et
repérer par des lettres les points de dépôt. (Ne pas appuyer trop fort avec
le crayon, pour ne pas enlever la silice). Le trait doit également être
suffisement haut pour ne pas que les composés chimiques que l'on veut
tester soient immergés dans l'éluant.

Déposer sur la plaque, à l'aide d'un pique apéritif, les colorants à tester.
Déposer les colorants du sirop à trois reprises ; pour les autres, un seul
dépôt suffit, ils sont plus concentrés.

Placer délicatement la plaque, presque verticale, dans l'éluant et remettre

le couvercle.

3)Etude du chromatogramme.
Quand l'éluant est à environ 1 cm du haut, retirer la plaque et refermer la cuve. Repérer
immédiatement avec un trait de crayon la position atteinte par le front de l'éluant. Sécher la plaque
en l'agitant à l'air ou avec un sèche cheveux .
4)Analyse des résultats expérimentaux
4.1)Vérification des informations de l'étiquette.
Calculerez les rapports frontaux des différentes expèces que vous venez de tester.
Les informations de l'étiquette collée sur la bouteille de sirop sont-elles exactes ? Justifiez vos
réponses.

4.2)Informations complémentaires sur les colorants utilisés dans l'alimentation.

Liste des colorants à usage alimentaire déterminée par une circulaire européenne du 13 décembre 1973.
1. matières colorantes pour la coloration dans la masse et en surface.
couleur numéro Dénomination usuelle couleur numéro Dénomination usuelle
Jaune E 100 curcumine bleu E 130 Bleu antraquinonique
Jaune E 101 Lactoflavine bleu E 131 Bleu patenté V
Jaune E 102 Tartrazine bleu E 132 Indigotine
Jaune E 103 Chrysoïne S vert E 140 Chlorophylles
Jaune E 104 Jaune de quinoléine vert E 141 Complexes cuivriques des
chlorophylles
Jaune E 105 Jaune solide vert E 142 Vert acide brillant BS
Orange E 110 Jaune orange S Brun noir E 150 Caramel
Orange E 111 Orange GGN Brun noir E 151 Noir brillant BN
Rouge E 120 Cochenille, acide carminique Brun noir E 152 Noir 7984
Rouge E 121 Orseille orcéine Brun noir E 153 Carbo medicinalis vegetalis
Rouge E 122 Azorubine
Rouge E 123 Amarante divers E 160 Caroténoïdes
Rouge E 124 Rouge cochenille A divers E 161 Xantophylles
Rouge E 125 Écarlate GN divers E 162 Rouge de betterave
Rouge E 126 Rouge ponceau GR divers E 163 anthocyanes
Rouge E 127 érythrosine

2. matières colorantes pour la coloration de surface uniquement.

numéro Dénomination usuelle numéro Dénomination usuelle

E 170 Carbonate de calcium E 173 aluminium
E 171 Dioxyde de titane E 174 argent
E 172 Oxydes et hydroxydes de fer E 175 or

3. matières colorantes pour usage limité.

numéro Dénomination usuelle

E 180 Pigment rubis (litho-rubine BK) pour la coloration des croûtes de fromages
E 181 Terre d'ombre brûlée pour la coloration des croûtes de fromages

4.3)Lien intéressant à visiter

Historique et informations sur les colorants :
http://www.ac-nantes.fr:8080/peda/disc/scphy/dochtml/seconde/pigments/html/intro.html