TP : la chromatographie

I. Manipulation1 : Réaliser une chromatographie sur couche mince (C.C.M)

 Généralités :
La chromatographie est une technique d’analyse chimique utilisée pour séparer et d’identifier les substances
chimiques présentes dans un mélange. Elle nécessite un support solide fixe comme du papier ou une plaque à
chromatographie appelé phase stationnaire et une phase liquide appelée éluant (phase mobile).

L'éluant est un solvant pur ou mélange de solvants qui entraîne les espèces à analyser par capillarité, alors que la
phase fixe (matériau de la plaque : cellulose ou gel de silice) les retient. Les corps purs migrent plus ou moins vite, ce
qui permet leur séparation.

 Principe:
La CCM est une technique d’identification ; elle permet de séparer les constituants d’un mélange. Une phase mobile
appelée éluant (solvant(s)) progresse par capillarité le long d’une phase stationnaire (silice).

→ Plus une substance est soluble dans l’éluant, plus elle est facilement entrainée.

→ Une substance est plus ou moins retenue par la phase stationnaire.

 But du TP :
 Connaître et comprendre le principe de la C.C.M
 Réaliser et interpréter une chromatographie sur couche mince (CCM). Pour savoir vérifier la présence de
paracétamol dans trois mélanges A,B, et C.
 Mode opératoire :
1. Préparation de la plaque :
 La plaque utilisée est une plaque de silice, elle est très fragile. Alors on évite de la toucher avec les doigts.
 Sur notre plaque pour chromatographie (environ 10 cm x 5 cm ), on trace délicatement au crayon un
trait léger à 1 cm du bas de la feuille qui constitue la ligne de dépôt.
 On placer sur cette ligne 4 marques, régulièrement espacées, dont le nombre est égal à celui des échantillons à
déposer (A, B ,C, et R) :
2. Préparation de la cuve :
On prépare d’abord le mélange de solvants qui constituera l’éluant :

 Les solvants que nous avant utiliser sont : hexane, acide acétate

 dans un bécher de 100 ml, on verse 25 ml d’hexane mesuré à l’aide d’une éprouvette graduée et 25 ml
d’acide acétate de telle sorte d’obtenir 50% , 50%.

Puis on verse cette éluant dans la cuve à chromatographie afin d'obtenir une hauteur de liquide d'environ 1 cm.
(Boucher la cuve afin d'éviter l'évaporation des solvants.

Remarque : L’éluant ne doit pas réagir avec les constituants à analyser. Il est choisi en fonction de son
attitude à dissoudre différemment les constituants du mélange à analyser

3. Dépôt des échantillons :

On va dépôt trois produits organiques différentes en solution A, B, C, et une de référence de
paracétamol pure R :
 À l'aide d'une pipette pasteur, on dépose les échantillons sur leurs marques respectives ; on dépose d’abord
une toute petite goutte de l’échantillon. Laisser sécher la plaque quelques instants en la secouant.
Après déposer à nouveau un peu d’échantillon sur le même point, puis laisser sécher. Renouveler cette
opération 3 ou 4 fois pour chacune des 4 échantillons.
 La tâche de dépôt ne doit pas être trop large pour ne pas se mélanger avec la tâche à côté, et il faut changer de
pipette pasteur pour chaque échantillon.
 Placer la plaque dans la cuve (la ligne de dépôt doit être au-dessus du niveau du solvant).
 Boucher la cuve.
 Laisser monter l’éluant par capillarité jusqu’à environ 1 cm du bord supérieur.
 Puis on retire la plaque et on repère par un trait la hauteur maximale atteinte par l’éluant (c'est la ligne de
front).
 On fin on sécher la plaque (à l'aide d'un sèche-cheveux).
4. Révélation du chromatogramme :

Pour notre cas les composés sont incolores, il est nécessaire donc de faire apparaître les taches : c'est l'étape de
révélation. On peut pour cela utiliser :

Des vapeurs de diode ou une lampe à ultraviolet

5. Exploitation de la C.C.M :
 L'éluant entraîne le déplacement de A, R , et C et pas de B
 La distance parcourue entre la ligne de dépôt et le centre de la tâche est caractéristique de l'espèce chimique
 D'autre part, on remarque que la tache A à migrer avec même niveau du R (paracétamol pure), donc le
paracétamol il se situe dans la solution A (Pour identifier une espèce d'un mélange, on peut donc comparer la
distance parcourue pour une tache d'un mélange avec celle obtenue pour l'espèce chimique pure. Les espèces
qui ont migré à des hauteurs identiques sont les mêmes)
 Calculer le rapport frontal Rf pour chaque constituant :
On a : Rf = d / D
d: est la distance entre la ligne de dépôt et le centre de la tache ; c’est la distance parcourue par l’espèce chimique

D: est la distance parcourue par l'éluant dans le même temps; c’est la distance entre la ligne de dépôt et le front du
solvant.

Pour le produit contenu dans la solution A : Rf = 1,1 / 9 =0,12

Pour paracétamol pure : Rf = 1,1 / 9 =0,12

Rf (A) = Rf(paracétamol pure )= 0,12

II. Manipulation2: Chromatographie Sur Colonne :

 Généralités :
La chromatographie sur colonne est une chromatographie d'adsorption La phase stationnaire est un solide, le plus
souvent silice ou alumine remplissant une colonne. L'échantillon est déposé en haut de la colonne.

La séparation des espèces chimiques est obtenue par l'écoulement continu d'une phase mobile, ou éluant, à travers
la colonne.

La séparation est basée sur les différences de vitesses d'entraînement, vers le bas de la colonne, des substances
contenant l'échantillon. Ces vitesses dépendent de la capacité d'adsorption de l'espèce par la phase stationnaire, et
de la solubilité de cette espèce dans l'éluant.

 Principe:
 L’échantillon est déposé en haut de la colonne.
 La phase stationnaire est de la silice, l’éluant s’écoule du haut vers le bas de la colonne.
 La séparation est basée sur la différence des vitesses d’entraînement des substances contenues dans
l’échantillon.
 L’éluant migre grâce à la gravité et non par capillarité.
 But du TP :
 Connaître et comprendre le principe de La chromatographie sur colonne.
 Séparer paracétamol d’un mélange A.

 Mode opératoire :

Préparation de la colonne :
 On place tout d'abord un morceau de coton au fond de la colonne, afin que la phase stationnaire ne puisse pas
s'échapper de la colonne.
 On remplit la colonne avec la phase stationnaire en réalisant une suspension de silice dans le premier éluant qui
est hexane plus acide acétate. Le gel ainsi formé est introduit dans la colonne et on le laisse s'écouler.
 On remarque que l’éluant se déposer alors on l’élimine.
 Lorsque le niveau d’éluant arrive à la limite supérieure de la silice, on dépose à l’aide d’une pipette pasteur
quelques gouttes de mélange A.
 On laisse le mélange A pénétrer dans la silice. Puis on ajouter ensuite l’éluant et on attend que la séparation
commence.
 On des petites tubes on recueillit les échantillons 5ml par 5ml.