Compte rendu du TP :

Chromatographie à CCM

INTRODUCTION:

La chromatographie est une méthode d’analyse qualitative et quantitative permettant de

séparer les différents constituants d’un mélange liquide ou gazeux.
On dispose d'un grand nombre de modes de chromatographie. Certains ont un champ
d'application très large, d'autres au contraire correspondent à des applications très
spécialisées ( CPL , CPG , HPLC… )

OBJECTIF :

Séparation et identification des constituants d’un mélange homogène par CCM.

PRINCIPE :

La chromatographie sur couche mince (CCM) repose principalement sur des

phénomènes d'adsorption ,elle nécessite un support comme une plaque à chromatographie
et une phase liquide appelée éluant, ce dernier est un solvant pur ou mélange de solvants
qui entraîne les espèces à analyser par capillarité, alors que la phase fixe (matériau de la
plaque : gel de silice) les retient. Les corps purs migrent plus ou moins vite, ce qui permet
leur séparation.

PROTOCOLE EXPÉRIMENTALE :

Matériel utilisé:

Bécher fermé par Verre de montre.

Plaque d'aluminium avec une couche de Silice.
Lampe à UV.
Pipette de Pasteur.
Eluant ( 70% d’acétate d'éthyle et 30 % Hexane ) .
Crayon et règle .
Mode opératoire:

● Préparation de la cuve :

La cuve à élution est un bécher haut contenant un liquide appelé « éluant » sur une hauteur
d’environ 0,5 cm. Elle doit être fermée pour empêcher l’évaporation d’éluant.

● Préparation de la plaque:

Tracer au crayon gris, à environ 1cm du bord inférieur de la plaque, un trait qui
constitue la ligne de dépôt.
Placer sur cette ligne des marques, régulièrement espacées, dont le nombre est égal à
celui des échantillons à déposer.

● Dépôt des échantillons:

Déposer les échantillons avec une pipette pasteur (inutile d’en mettre trop).
Éventuellement sécher les dépôts .

● Élution :

Introduire la plaque verticalement dans la cuve : la ligne de dépôt doit être au-dessus du
niveau du solvant.
Boucher la cuve.
Le solvant contenu dans la cuve monte le long de la plaque : c'est l'étape d'élution.
Attendre que l'éluant arrive à environ 1 cm du haut de la plaque, puis retirer la plaque et
repérer par un trait la hauteur maximale atteinte par l’éluant (c'est la ligne de front).

Utilisation d’une lampe UV pour visualiser les tâches .

Résultat d’expérience :

la distance parcourue entre la ligne et le centre de la tâche est caractéristique de

chaque l'espèce chimique :
Caféine : a migré avec une distance de 0,7 cm
Benzophénone : a migré avec une distance de 3 cm
Mélange : sa migration résulte deux tâches a deux distances différentes .

On passe au calcul du rapport frontal (noté Rf ) , pour chaque tâche observée:

 Rf = h/ H
Pour cafeine : Rf = 0,7/0,33 = 0,21
Pour benzophénone : Rf = 3/0,33 = 0,9

Les tâches du mélange ont migré à des hauteurs identiques à ceux des échantillons de
référence.

Exploitation des résultats :

D'après les résultats obtenus , on remarque que les deux taches obtenues ont
les mêmes hauteurs que celles du caféine et benzophénone ce qui implique que
le mélange est composé de ces deux substances .
On constate que la caféine a une faible distance de migration , dûe à sa forte
affinité avec la phase stationnaire ,plus l’affinité du caféine pour la phase
stationnaire est forte, plus sa distance de migration sera faible et son rapport
frontal sera proche de 0.
En effet, l’affinité d’ un composé pour la phase stationnaire correspond à la forme
des interactions entre le caféine et le silice . Ces interactions retardent la
migration du caféine sur la plaque .
On constate que le benzophénone a une grande distance de migration , due à sa
forte affinité avec l'éluant , plus l’affinité du benzophenone pour la phase mobile
est forte plus sa distance de migration sera grande et son rapport frontal sera
proche de 1.
En effet, cette affinité pour l'éluant correspond à la force des interactions entre le
composé et l'éluant. Ces interactions favorisent la migration du composé sur la
plaque .

Conclusion:

La chromatographie est une technique de séparation puissante qui est utilisée

dans de nombreux domaines . Elle est simple, rapide et peu coûteuse, ce qui en
fait une technique idéale pour de nombreuses applications.