TP2:

HAMDI Aicha
Chromatographie sur couche mince /10/2023
LASSIDI Ranim
(CCM) et sur colonne

Objectifs:

1) Identifier les constituants d’un mélange homogéne par chromatographie sur couche mince.

2) Vérifier si le colorant alimentaire est pur ou non ( un mélange de 2 colorants ou il contient d’autres
composants).

Partie théorique:

LA CHROMATOGRAPHIE :
La chromatographie est une technique qui permet de séparer les différents composés d’un mélange
homogéne et de les identifier.
Elle permet également de verifier la pureté d’une substance.
Le mélange homogène, véhiculé par un solvant inerte appelé éluant, compose la phase mobile qui
progresse par migration dans un milieu poreux inerte constituant la phase fixe.
Selon la plus ou moins grande affinité entre les solutés et la phase stationnaire ou mobile, les constituants
du mélange migrent à des vitesses différentes et sont ainsi séparés.
Les facteurs qui interviennent dans le partage des molécules à séparer entre les phases fixe et mobile
sont:
• la solubilité dans un solvant liquide
• la taille (la forme)
• la polarité
• la charge électrique
• la présence de groupements d'atomes formant des sites particuliers

LA CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM):

Cette technique repose principalement sur des phénomènes d'adsorption :

> la phase mobile est un solvant ou un mélange de solvants qui progresse le long
d'une phase stationnaire fixée sur une plaque de verre ou une feuille semi-rigide
de matière plastique ou aluminium .
Si l’échantillon a été deposé sur la phase stationnaire,les substances migrent à une
vitesse qui depend de leurs natures et de celle du solvant .

Adsorption: une substance est retenue à la surface d’une autre substance (sans pénétration).
Partie expérimentale:

Préparation de la cuve chromatographique (cuve à élution):

On place l’éluant dans la cuve à élution .
La hauteur de l’éluant doit etre inferieur à 1 cm.
On couvre la cuve d’un verre de montre afin de saturer l’intérieur en vapeur d’éluant.
On applique un papier filtre (plongeant dans l’éluant) verticalement contre la paroi.
Ce papier contribute à saturer l’atmosphére de la cuve en vapeur d’éluant.
L’éluant utilisé dans cette manipulation est une solution formée par le mélange d’1L d’eau,
500 ml d’éthanol et 100g de chlorure de sodium.

Préparation de la plaque de chromatographie:

La phase stationnaire (en CCM):
> Est une fine couche (d’environ 0.25 mm) de gel de silice ou d’alumine qui est répartie
uniformément sur une plaque de support (plaque de verre ou d’aluminium) à l’aide d’un
liant comme le sulfate de calcium hydrate (platre de paris) ,l’amidon ou un polymére
organique.

On prend une plaque aux dimensions 4 cm * 10 cm et on trace un léger trait de crayon à 1cm du bord
inférieur (ligne de depots) puis un autre à 1cm du bord supérieur (ligne d’arrivée du front de
l’éluant).

Partie 1:

L'échantillon est mis en solution (2 à 5%) dans un solvant volatile

(qui n'est pas forcément le même que l'éluant).

On dépose à l'aide d'une pipette Pasteur en des points de la plaque situé à environ 1 cm de la partie
inférieure 3 gouttes de colorants alimentaires jaune , bleu et vert (mélange de bleu et jaune).

> Il est important que le diamètre de la tache produite au moment du dépôt soit faible
(inférieur à 3 mm).
Ce sont généralement les dépôts les moins étalées qui permettent les meilleures
séparations.

> Pour augmenter la quantité déposée, il est toujours préférable d'effectuer plusieurs
dépôts au même point, en séchant rapidement entre chaque application
L’élution:
On place la plaque dans la cuve à elution le plus verticalement possible et on la couvre.
On retire la plaque de la cuve lorsque le front du solvant (jaune) sera à 1 cm du bord supérieur de la
plaque.
On séche la plaque a l’air.
La révélation:
On peut observer la séparation des composants de l’échantillon (colorés) sur la plaque.

> Plus la substance à analyser est soluble dans l’éluant ,plus sa migration est plus vite.
(phénoméne de capillarité)

Réponses aux questions:

Partie 2:

On dépose sur la plaque une tache d’huile essentielle de clou de girofle (extrait lors du tp1) et une tache
d’Eugénol commercial (E).
On plonge la plaque dans la cuve .
Lorsque le front de l’éluant arrive à 1cm du bord supérieur ,on retire la plaque et la révéle par reaction
chimique.
Si ils ne sont pas colorés, on doit révéler le chromatogramme.
Les méthodes usuelles de révélation sont:
• La radiation UV
• La fluorescence
• L’atomisation
• Le diiode
• Le permanganate de potassium

Dans cette manipulation, on révéle les taches à l’aide du permanganate de potassium.

on plonge la plaque dans une solution de permanganate de potassium et on la retire
rapidement.
On séche la plaque.
Les substances oxydées par le permanganate apparaissent sous forme de taches jaunes ou
blanches sur fond rose.
on marque les positions des taches dés leur apparition.
> Plus, la substance à analyser est soluble dans l’éluant, plus sa migration est plus vite.
(phénoméne de capillarité)
Réponses aux questions: