THEME 3: METHODE

CHROMATOGRAPHIQUE SUR
COUCHE MINCE
MEMBRES DU GROUPE 3
BAYEKORO MA-HAWA
DIABATE ARIDIETA
DIPAMA KADIATOU RACHIDA
HIEN M ANGELIQUE
PORGO AZETA
SAVADOGO AWA
SOME K HUGUES CLOVIS
TRAORE OUO CAROLINE
 PLAN
INTRODUCTION
I. DÉFINITION ET APPAREILLAGE
1. DÉFINITION
2. APPAREILLAGE
II. PRINCIPE ET ETAPES
1. PRINCIPE
2. ETAPES
III. AVANTAGES ET LIMITES
1. AVANTAGES
2. LIMITES
IV. APPLICATIONS
 INTRODUCTION

La chromatographie est une méthode physique de séparation basée sur les différences
d’affinités des substances a analyser à l’égard de deux phases : l’une stationnaire ou fixe , l’autre
mobile.
L’appareil utilisé pour effectuer certaines chromatographies se nomme chromatographe . l’image ou
diagramme obtenu par chromatographie est appelé chromatogramme .Il existe de nombreux types
de chromatographies , selon la nature des phases en présence :
-chromatographie de partage liquide/liquide (par exemple sur papier Whatman ayant fixé de
l’eau).
-Chromatographie sur couche mince (CCM)
-Chromatographie en phase vapeur (CPV)
-Chromatographie sur colonne ,chromatographie liquide haute performances (HPLC)
 I. DÉFINITION DE LA CCM ET APPAREILLAGE
1. Définition
La CCM repose principalement sur des phénomènes d’adsorption: la phase mobile est un
solvant ou un mélange de solvants , qui progresse le long d’une phase stationnaire fixée sur une
plaque de verre ou sur une feuille semi-rigide de matière plastique ou d’aluminium.
Après que l’échantillon ait été déposée sur la phase stationnaire, les substances migrent à une
vitesse qui dépend de leur nature et de celle du solvant. Elle est couramment utilisée pour
séparer des composants dans un but d’analyse ( CCM analytique) ou de purification ( CCM
préparative ).
La chromatographie bidimensionnelle fait partie de la CCM. En plus de l’identification
elle permet de détecter une dégradation d’un composé sur la phase stationnaire.
 2. Appareillage
Les principaux éléments d’une séparation chromatographique sur couche mince sont :
-la cuve chromatographique : un récipient habituellement en verre , de forme variable , fermée par un
couvercle étanche.
-La phase stationnaire : une couche d’environ 0,25microgramme de gel de silice ou d’un autre adsorbant
est fixée sur une plaque de verre a l’aide d’un liant comme le sulfate de calcium hydratée ( plâtre de paris )
l’amidon ou un polymère organique .
-l’échantillon : environ un microlitre de solution diluée ( 2 a 5 %) du mélange a analyser , déposer en un
point repère situe au-dessus de la surface de l’ éluant.
-L’éluant : un solvant pur ou un mélange , il migre lentement le long de la plaque en entrainant les
composants de l’echantillon.
La chromatographie bidimensionnelle sur couche mince comporte une deuxième élution.
Rf: rapport frontal
H: hauteur parcouru par l’éluant
h: hauteur parcouru par l’espèce chimique
 II. PRINCIPE ET ETAPES DE LA CCM
1. Principe
Lorsque la plaque sur laquelle on a déposé l’échantillon est placé sur la cuve , l’éluant
monte a travers la plaque stationnaire , essentiellement par capillarité , en outre , chaque
composant de l’echantillon se déplace a sa propre vitesse derrière le front du solvant. Cette
vitesse dépend d’une part , des forces électrostatiques retenant le composant sur la plaque
stationnaire et, d’autre part de sa solubilité dans la phase mobile. Les composés se déplacent donc
alternativement de la phase stationnaire a la phase mobile, l’action de rétention de la phase étant
principalement contrôlée par des phénomènes d’adsorption.
Généralement, en chromatographie sur couche mince, les substances de faible polarité migrent
plus rapidement que les composants polaires.
 *le solvant contenu dans la cuve monte le long de la plaque : c’est l’étape
d’élution. Attendre que l’éluant arrive a environ 1cm du haut de la plaque, puis
retirer la plaque et repérer par un trait la hauteur maximale atteinte par l’éluant
(c’est la ligne de front). Sécher la plaque ( a l’aide d’un sèche-cheveux par
exemple)
Si certains composés sont colorées il n'est pas nécessaire de les relever mais
la plupart sont incolores.
-Révélation du chromatogramme
*Composés colorés : le chromatogramme est directement exploitable.
*Composés incolores: il est nécessaire de faire apparaitre les taches ( c'est
l’étape de révélation).
 2. Les différentes étapes de la CCM
-Préparation de la cuve : préparé le mélange de solvant qui constituera l’ éluant, puis en
verser dans la cuve a chromatographie afin d’obtenir une hauteur de liquide d’environ
1cm .Boucher la cuve afin d’éviter l’évaporation des solvants.
-Préparation de la plaque et dépôt des échantillons:
*tracer au crayon a environ 1,5cm au bord inferieur de la plaque, un trait qui constitue la
ligne de dépôt. Placer sur cette ligne des marques, régulièrement espacées, dont le nombre est
égal a celui des échantillons a déposer
*A l’aide d’une pointe fine, déposer les échantillons sur leurs marques respectives. La
tache de dépôt ne doit pas dépasser 3mm, et il faut changer de pique pour chaque échantillons.
- Elution:
*introduire la plaque verticalement dans la cuve : la ligne de dépôt doit être au dessus du
solvant. Boucher la cuve.
 On peut pour cela utiliser une lampe a ultraviolet , des vapeurs de diiode, une solution de
permanganate de potassium ou une solution acide de vanilline.
ATTENTION : ne pas regarder directement la lumière d’une lampe a ultraviolet.
*Entourer chaque tache au crayon.
-Exploitation de la CCM
*La distance parcouru entre la ligne de dépôt et le centre de la tache dans des conditions
données (phase fixe et éluant connue) est caractéristique de l'espèce chimique : elle est identique
que l’espèce soit pure ou dans un mélange.
*Pour identifier une espèce d’un mélange , on peut donc comparer la distance parcourue
pour une tache d’un mélange avec celle obtenue l’espèce chimique pure.
Les espèces qui ont migré à des à hauteurs identiques sont les mêmes. On peut aussi calculer
le rapport frontal (noté Rf) pour chaque tache observée:
Rf: h/H
 III. AVANTAGES ET LIMITES DE LA CCM

1. Avantages
La CCM est une méthode très simple , sa manipulation ne nécessite pas une formulation
spéciale et le matériel requis pour sa réalisation est simple, disponible et peu couteux.
C’est une méthode séparative non destructive et les modèles séparés peuvent être identifiés grâce
a leurs distances de migration.
La collection des fractions après séparation permet aussi de réaliser une deuxième analyse de
confirmation par une technique plus spécifique telle que l’analyse immunochimique.
Dans le cas des intoxications poly-medicamenteuses, elle offre une meilleure séparation des
molécules et/ou métabolites dont la superposition complique la réalisation des tests
d’identification.
L’avantage le plus marqué de la chromatographie bidimensionnelle comparativement a la
monodimensionnelle est la possibilité de traité des échantillons contenant des milliers d’analytes
 2. Limites
Le manque de sensibilité, de résolution et l’influence des conditions environnementales
surtout la température ambiante et le taux d’humidité sur la répétabilité des résultats.
De plus la nature de la phase stationnaire ne permet pas toujours l’immersion des plaques
dans le réactif de caractérisations imposant la pulvérisation de ces réactifs toxiques.
Enfin la durée de réalisation reste relativement longue comparée aux techniques
chromatographiques en phase liquide et gazeux et les résultats sont souvent difficiles a
interpréter.

IV. APPLICATION DE LA CCM

La CCM est largement utilisée dans de nombreux industries et de nombreux domaines
pharmaceutiques , en analyse clinique en toxicologie environnementales, dans l’agroalimentaire,
dans l’analyse de l’eau et des pesticides et en cosmétiques.
 Voici quelques applications types de la CCM:
*Analyse de résidus médicamenteux et d’antibiotiques dans les échantillons
agro-alimentaires et environnementaux.
*Identifications et quantification des colorants , des ingrédients, des
conservateurs et des édulcorants dans les produits agro-alimentaires et cosmétiques.

*Contrôle qualité et test de pureté sur les formulations pharmaceutiques.

*Dans le cadre d’investigation en police scientifique, la chromatographie est
utilisée pour analyser des prélevées sur une scène de crime.
 CONCLUSION
La CCM est utilisée pour vérifier qu’une espèce synthétisée est pure ou pour
vérifier qu’un mélange contient une espèce chimique particulière. Elle est utilisée
dans plusieurs domaines et comportes des avantages et des limites. En dépit de la
CCM il existe d’autres techniques de séparation et d’identification des molécules.