Chapitre 1.

Les techniques séparatives : la Chromatographie

1. ASPECTS GENERAUX
Définition
La Chromatographie est une méthode d’analyse physico-chimique de séparation des
constituants d’un mélange homogène liquide ou gazeux, en utilisant deux phases non
miscibles
Les divers constituants sont entraînés d'une manière différentielle par une phase
mobile le long d'une phase stationnaire.
Phase stationnaire = phase qui reste en place, soit dans une colonne, soit sur une
surface plane. C’est une phase immobile; choisie pour sa grande affinité pour les
divers solutés;
Phase mobile = phase qui se déplace sur ou à travers la phase stationnaire, entraînant
l’analyte avec elle.
Elution = processus au cours duquel les analytes sont entraînés à travers une phase
stationnaire par le mouvement d’une phase mobile.

Historique
 1900 : Invention de la chromatographie (Michel TSWETT)
 1938 : Première chromatographie sur couches minces (Ismailov et Schraiber)
 1952 : Naissance officielle de la chromatographie phase gaz (Martin et Synge,
Nobel 1952)
 1955 – 1960 : Age d’or de la chromatographie en phase gazeuse
 Fin des années 60 : Naissance de la chromatographie en phase liquide à haute
performance HPLC
 De nos jours : Amélioration instrumentale (informatisation) et innovation dans
le domaine de la miniaturisation (nanotechnologie

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 2. CLASSIFICATION DES TECHNIQUES CHROMATOGRAPHIQUES

Les méthodes chromatographiques sont classées selon la nature des interactions

physico-chimiques.
Les principaux types de chromatographie sont :
• la chromatographie en phase gazeuse (CPG)
• la chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC)
• la chromatographie en couche mince (CCM).

2.1. Classification selon la nature des phases

2.2.1. Selon la nature de la phase mobile on distingue:
la chromatographie en phase liquide CPL
la chromatographie en phase gazeuse CPG
la chromatographie en phase supercritique CPS
2.2.2. Selon la nature de la phase stationnaire on distingue:
la chromatographie gaz / solide CGS
la chromatographie gaz / liquide CGL
la chromatographie liquide / solide CLS
la chromatographie liquide / liquide CLL

2.2. Classification selon la nature des phases phénomènes mis en jeu dans
la séparation
 La chromatographie d’adsorption basée sur les processus répétés
d’adsorption/désorption par la phase stationnaire (solide)
 La chromatographie d’échange d’ions Échange entre une phase stationnaire
ionisée et un soluté ionisé ou ionisable
 La chromatographie d’exclusion basée sur la séparation des molécules en
fonction de leur taille

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chromatographie sur plaque et la chromatographie sur colonne sont deux types
de chromatographie d’adsorption : la séparation est fondée sur un processus
d’adsorption / désorption des molécules sur la phase stationnaire.
 La chromatographie sur plaque : exemple :
exemple : la chromatographie sur couche mince (CCM)
 La chromatographie sur colonne :
exemple : la Chromatographie Liquide Haute Pression (CLHP), appelée aussi
Chromatographie Liquide Haute Performance.

3. LA CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM)

C’est une technique de chromatographie couramment utilisée pour séparer des

composants dans un but d'analyse (CCM analytique) ou de purification (CCM
préparative). Elle comprend :

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L’éluant migre de bas en haut sur la plaque de silice par capillarité et entraîne les
composés du mélange étudié. C’est le phénomène d’élution qui permet la séparation
des constituants du mélange à analyser.

Si les vitesses de migration des composés sont différentes, ils seront donc séparés.

La plaque de chromatographie est ensuite lue directement si les composés sont

visibles, ou placé sous une lumière UV.

Ils peuvent également être révélés en pulvérisant une solution d’acide sulfurique puis
chauffé dans une étuve.

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Chaque constituant migre d’une certaine hauteur
(hauteur de la tache)
 On appelle rapport frontal ou rétention frontale (Rf) :

Rf = L1/L2
Rf: le rapport entre la distance L1 parcourue par le
constituant divisé par la distance L2 parcourue par le front du
solvant.

Chaque tache correspond à un constituant et on l’identifie par comparaison du Rf avec

un témoin (une même substance migre à la même hauteur dans des conditions
opératoires identiques; même Rf).

Le principal intérêt de la CCM est l'identification rapide des composés d'un mélange.
En contre partie, l'analyse est uniquement qualitative et ne permet pas le dosage d'un
composé.