Faculter de medecine Année universitaire 2022-2023

Tlemcen

Département de la pharmacie

2ème année pharmacie

Date : 06/02/2023

Nom et prénom du binome :

 Medjdoub Alaae

 Louh abdalkhalek

Sous - groupe : 5a

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 La chromatographie est methode utilisée dans divers domaines,tels

que la chimie fine, la parfumerie, l’œnologie, l’industrie pétrolière,

la biologie, l’industrie des matières plastiques,... etc .

 C’est une technique d'analyse qualitative et quantitative dans laquelle

l'échantillon contenant une ou plusieurs substances estentraîné par un figure 01

couran de phase mobile, qui peut être liquide, gaz ou fluide supercritique, le long d'une

phase stationnaire, qui peut être du papier, de la gélatine, de la silice, un polymère, de la

silice greffée etc. Chaque substance se déplace à une vitesse donnée, dépendant de ses

caractéristiques: ( polaire, non polaire, ionique, etc..), et de celles des deux phases .

 La chromatographie est utilisée pour connaître la concentration de chaque composé

d'un mélange (qualité et quantité) et même leur structure quand elle est couplée (GC-

MS, LC-MS, LC-RMN, etc.).

Histoire :
La première chromatographie a été réalisée en 1906 par le botaniste russe Mikhaïl

Tswett et consistait à séparer les pigments (en grec : "chromato") d'une feuille d'épinard , il

avait observé la séparation des colorants végétaux, dont les chlorophylles, lorsqu'il filtrait

leur solution dans l'éther de pétrole, sur une colonne de carbonate de calcium. Dans ces

conditions, en effet, des zones colorées vertes et jaunes se forment. Tswett constatait :

"Tout comme les rayons lumineux d'un spectre, les différentes composantes d'un mélange

de colorants se déploient sur la colonne de carbonate de calcium selon une loi et peuvent

être analysées qualitativement et quantitativement".

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 Différent type de chromatographie :
Il existe différent types de chromatographie donc la Classification des différentes méthodes

chromatographiques se fait selon la nature des phases et le procédé utilisé :

Selon la nature de la phase mobile:

On distingue deux types de chromatographie:

 Chromatographie en phase liquide la phase stationnaire qui peut être solide ou

liquide

 Chromatographie en phase gazeuse la phase stationnaire qui peut être solide ou

liquide

Selon le procédé utilisé :

on distingue On distingue:

 Chromatographie d’adsorption (CCM ou sur colone )

 Chromatographie de partage

 La chromatographie d’exclusion

 Chromatographie d’échange d’ions

 La chromatographie d’affinité :

 Chromatographies en phase gazeuse (CPG)

 Chromatographie en phase liquide (HPLC)

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 Réaliser et interpréter une chromatographie sur couche mince (CCM) avec un mélange

des acide aminées (alanine ; phénylalanine ... etc) afin de determiner les acides contenue

dans le mélange X .

Présentation du principe :

 La chromatographie sur couche mince CCM est une méthode d’analyse chimique

permettant la séparation et l’identification des espèces chimiques d’un mélange.

 Le mélange, en solution, est déposé sur la phase fixe.

 Lors de la migration (élution), la phase mobile (éluant) entraîne différemment les divers

constituants du mélange.

 Pour voir les espèces chimiques après élution, il est souvent nécessaire de les révéler.

On peut identifier une espèce chimique par comparaison, sur un même

chromatogramme, avec une espèce chimique de référence.

Parmi les utilisations de la CCM on cite :

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 Aprés extraction des plante médicinale on peut identifier les différent composent si elles

sont pure ou non

 C’est une technique d’orientation elle va nous orionté vers la pureté

 Identification des molécules médicinales

a- Préparation de la cuve à chromatographie :

Verser 10mL d’éluant(solvant : butanol+acide acétique+eau) et fermer hermétiquement la

cuve au moyen du couvercle, afin de saturer l’atmosphère intérieure de vapeurs de ce

solvant, pendant environ 10 minutes.

b- Préparation de la plaque de chromatographie :( dépôts)

Sur une plaque chromatographique ( plaque de silice), tracer au crayon un trait à 1cm du

bord inférieur de la plaque. Ce trait s’appelle la ligne de dépôts.

Placer, sur ce trait, trois croix régulièrement espacées sous lesquelles vous écrivez : A, P, X.

A:alanine ; P:phenylalanine ; X : échantion a identifier

c- Dépôts des échantillons :

Déposer sur chaque repère une microgoutte !! (utiliser une micropipette)

dépôt A : une goutte du alanine

dépôt P : une goutte du phénylalanine

dépôt X: une goutte du echantion x

d- Élution :

Placer la plaque dans la cuve, puis recouvrir et attendre que le front du solvant atteigne la

partie supérieure de la plaque,enfin retirer la plaque, marquer le front du solvant au crayon.

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Observer la plaque ainsi les résultats 0obtenue et les interpréter

Aprés séchage de la plaque sillice et on fait une révélation des taches aprés migration soit :

Physiqument :lampe U.V

Chimiquement : ninhydride (regulateur chimique ) pour que on peut observer

les résultats

Rapport frontal :

Le rapport frontal est le quotient de la distance parcourue par le composé déposé au

départ sur la ligne de dépôt (h) par la distance parcourue par l'éluant (H) soit :

Rf = h / H avec toujours : Rf < 1

Le rapport frontal dépend du composé, de l'éluant. Mais il reste le même que le

composé soit pur, dilué ou qu'il soit dans un mélange. Le rapport frontal étant

difficilement reproductible, il faut donc disposer d'un échantillon témoin que l'on met

aussi sur la plaque.

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 H h Rf
4.5 cm 1 Rf 1 =1/4.5 = 0.22 cm
Alanine
4.5 cm 2.6 Rf 2 =2.6/4.5 = 0.57 cm
phénylalanine
1 Rf 3 = 1/4.5 =0.22 cm
Composé
4.5 cm
2.6 Rf 4 = 2.6/4.5 = 0.57 cm
X

D’aprés les observation on constate 2 taches aprés migration de composés X qui sont

semblable aux taches de migration de l’alanine et phénylalanine donc le composé X est un

mélange des acides aminés ( alanine + phénulalanine )