Document du professeur 1/8

Niveau 2nde

Physique Chimie

THEME : LA SANTE

PRINCIPE DE LA CHROMATOGRAPHIE

Programme : BO spcial n4 du 29/04/10

LA SANTE
NOTIONS ET CONTENUS

COMPETENCES ATTENDUES

Les mdicaments : un mdicament gnrique et un mdicament princeps contiennent un mme

principe actif mais se diffrencient par leur formulation.
Chromatographie sur couche mince.

Raliser et interprter une chromatographie sur

couche mince (mlanges colors et incolores).

Pr requis :
o Chromatographie de colorants alimentaires
o Mlange
o Corps pur

Mots-cl
o Chromatographie
o Elution
o Rvlation
o Rapport frontal
o Colorant
o Mlange homogne
o Espce chimique pure
Liste de matriel
Poste lve
o Cuve de chromatographie (+ couvercle)
o Plaque de cellulose sur support polyester 4 cm 8 cm
o Plaque de silice sur support polyester sensible aux rayons UV
o Pipettes Pasteur
o Ttine en caoutchouc
o Colorant bleu patent
o Colorant jaune tartrazine
o Colorant alimentaire vert
o Schoir
o Balance
o Coupelle de pese
o Spatule
o Flacon contenant lluant
o Ethanoate de butyle
o Cyclohexane

PIERRON 2011

Ref. 06759
Ref. 07895
Ref. 06492
Ref. 06887
Ref. 91246
Ref. 01326060
Ref. 01327060
Ref. 01329060
Ref. 13238
Ref. 06089
Ref. 13439
Ref. 06652
Ref. 06721
Ref. 01247980
Ref. 01320980

Principe de la chromatographie (page 1)

Document du professeur 2/8

o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Eugnol
Lampe UV
Lunette
Diiode solide
Flacon large ouverture
Plaque chauffante
Hotte aspirante
Blouse de laboratoire
Gants
Actyleugnol
Huile essentielle des clous de girofle du commerce
Alcool brler
Chlorure de sodium
Eau
Papier Whatman
Crayon papier
Rgle

Ref. 01391060
Ref. 13728
Ref. 12525
Ref. 01492100
Ref. 06790
Ref. 15263
Ref. 10500691
Ref. 91715
Ref. 91693

Ref. 01808980

Remarques, astuces
o Pour illustrer la migration de lluant sur la plaque de chromatographie, on pourra
voquer la monte du caf dans un morceau de sucre.
o Pour obtenir un meilleur rsultat lors des chromatographies, on peut scher les
plaques de chromatographie dans une tuve quelques minutes.
o Pour raliser la chromatographie des colorants alimentaires, il est possible dutiliser,
comme plaque de chromatographie, du papier Whatman, papier ayant un faible taux
dimpurets et dont les caractristiques physiques sont uniformes.
o Si pour raliser la chromatographie des colorants alimentaires, on utilise du simple
papier filtre comme plaque de chromatographie, on peut fixer avec un adhsif le haut
du papier filtre sur une tige de verre ce qui vite au papier de tomber lors de llution.
o Pour la prparation de lluant ncessaire la chromatographie des colorants
alimentaires, raliser dans une bouteille de 1,5 L, une solution contenant 1 L deau,
50 cL dalcool brler et 100 g de sel.
o Pour saturer latmosphre de la cuve en vapeur dluant, on appliquera verticalement
un papier filtre contre la paroi puis on versera lluant.
o En labsence de sche-cheveux, les radiateurs de la salle de classe ou une fentre
entrouverte peuvent permettre un schage satisfaisant des plaques de
chromatographie aprs lution.
o Pour raliser les dpts E et HC lors de la chromatographie des huiles essentielles de
clous de girofle, on dilue les solutions commerciales pour ne pas saturer la couche de
silice (5 gouttes de solution commerciale dans 40 gouttes de cyclohexane).
o Pour la prparation de lluant ncessaire la chromatographie de lhuile essentielle
des clous de girofle, raliser dans un flacon de 250 mL, une solution contenant 40 mL
dthanoate dthyle et 200 mL de cyclohexane.

PIERRON 2011

Principe de la chromatographie (page 2)

Document du professeur 3/8

o Les vapeurs de diiode sont toxiques, la rvlation de la plaque de chromatographie des

huiles essentielles de clous de girofle se fait sous la hotte aspirante en utilisant des
gants. Cette plaque sera limine dans le respect de lenvironnement la fin de la
sance.
o Attention, certains lves peuvent tre allergiques au diiode

Prolongements
o Activit documentaire sur lhistoire de la chromatographie
La chromatographie fut dcouverte en 1906 par le botaniste russe, Mikhail Semenovich
TSWETT (ou TSVETT), mais il fallut attendre les annes 1930 pour qu'elle soit largement
utilise. TSWETT avait constat la sparation des constituants colors de la chlorophylle
brute lorsque sa solution migrait le long d'un papier filtre. Les diffrents constituants
formaient en effet des bandes de couleurs distinctes des hauteurs diffrentes.
o Activit documentaire sur les colorants alimentaires
Ltre humain est sensible laspect des aliments quil consomme do lutilisation de
colorants depuis lantiquit. Les premiers colorants taient extraits des plantes (rouge de
betteraves, vert de la menthe ) ou des animaux. Ds le XIXme sicle, ils furent remplacs
par des nombreux colorants de synthse. Depuis la tendance est de substituer les colorants
de synthse par des colorants naturels.

PIERRON 2011

Principe de la chromatographie (page 3)

Document du professeur 4/8

Nom :
Prnom :
Classe :
Date :

Physique Chimie

Thme : La sant
PRINCIPE DE LA CHROMATOGRAPHIE

Objectifs
- Connatre le principe de la chromatographie
- Raliser et interprter une chromatographie sur couche mince (CCM) pour
des mlanges despces chimiques colors et incolores

Principe de la chromatographie.
La chromatographie est une technique qui permet, de sparer diffrents composs dun mlange
homogne et de les identifier. Elle permet galement de vrifier la puret dune substance.
Le mlange homogne, vhicul par un solvant inerte appel luant, compose la phase mobile qui
progresse par migration dans un milieu poreux inerte constituant la phase fixe.
Complter la photographie suivante laide des mots mis en gras dans la phrase prcdente :

Les composs du mlange tant entrans, lors de llution, des vitesses diffrentes, ces derniers sont
spars.
La chromatographie est donc base sur une diffrence de solubilit entre les composs dun mlange dans
un solvant appel luant.

PIERRON 2011

Principe de la chromatographie (page 4)

Document du professeur 5/8

ACTIVIT 1 : Chromatographie de colorants alimentaires.

On dispose de colorants alimentaires Bleu, Vert et Jaune contenus dans certaines ptisseries ou
certains bonbons.
On souhaite savoir si ces colorants sont des espces chimiques pures ou des mlanges homognes.
1. Prparation de la cuve de chromatographie :
Dans une cuve chromatographie, verser de lluant sur une hauteur de 1,5 cm. Couvrir la cuve.
Lluant utilis ici est une solution forme par le mlange d1 L deau, 50 cL dalcool brler et
100 grammes de chlorure de sodium, c'est--dire de sel.
2. Prparation de la phase fixe de chromatographie :
Prendre une plaque de cellulose sur support polyester 4 cm 8 cm.
Tracer au crayon un trait fin parallle au bord infrieur de la plaque une hauteur de 2,5 cm : cest
la ligne de dpot.
Reprer sur cette ligne 3 positions quidistantes notes B,V et J.
Dposer laide de micropipettes ou de piques apritifs dont lextrmit a
t crase, une goutte de chaque colorant alimentaire Bleu, Vert et Jaune
sur la ligne de dpt sur les positions pr repres.
Aprs chaque dpt, scher rapidement laide dun sche-cheveux.
3. Elution :
Descendre la plaque dans la cuve de chromatographie : la technique choisie permet aux taches de
colorants de rester au-dessus de lluant.
Lorsque lluant est 1 cm environ du bord suprieur, sortir la plaque et noter, laide dun crayon,
le niveau de lluant : cest le front de lluant. Scher laide dun sche-cheveux.
4. Analyse :
La plaque de chromatographie a t reproduite ci-dessous :
a. Reprer les dpts nots ici A, B et C en les coloriant dans lordre en Bleu, Jaune ou Vert

A : colorant bleu : bleu patent

E 131
B : colorant jaune : tartrazine
E 102
C : colorant vert

PIERRON 2011

Principe de la chromatographie (page 5)

Document du professeur 6/8

b. Le colorant alimentaire bleu est-il un corps pur ou un mlange ? Justifier.

Le colorant bleu donne une seule tache, il est donc constitu dune seule espce chimique.
Le colorant bleu est une espce chimique pure.
c. Le colorant alimentaire jaune est-il un corps pur ou un mlange ? Justifier.
Le colorant jaune donne lui aussi une seule tache. Le colorant jaune est galement une espce
chimique pure.
d. Le colorant alimentaire vert est-il un corps pur ou un mlange ? Justifier.
Le colorant vert donne deux taches, il est constitu de deux espces chimiques.
Les deux taches sont situes au mme niveau que celles obtenues avec les colorants bleu et
jaune. Le colorant vert est donc constitu de ces deux colorants, cest un mlange despces
chimiques.
e. On calcule, pour chaque constituant, sa vitesse de dplacement ou rapport frontal Rf
daprs la relation suivante :

Ainsi, Pour le constituant A : Rf1 = a1 / d et pour le constituant B : Rf2 = a2 / d

Lintrt du rapport frontal est que si deux espces chimiques ont le mme rapport frontal,
cest quelles sont identiques.
Calculer le rapport frontal des colorants bleu et jaune.

R f (bleu) = 1/4,5 = 0,22

PIERRON 2011

R f (jaune) = 4,5/4,5 = 1

Principe de la chromatographie (page 6)

Document du professeur 7/8

ACTIVITE 2 : Chromatographie de lhuile essentielle des clous de girofle.

1. Prparation de la cuve de chromatographie :
Lluant utilis est un mlange dun volume dthanoate dthyle pour cinq volumes de cyclohexane.
2. Prparation de la plaque de chromatographie :
Sur une plaque de silice sur support polyester sensible aux rayons ultra-violets, nots U.V., tracer
une ligne de dpt 2 cm du bord infrieur
ATTENTION NE PAS POSER LES DOIGTS SUR LA PLAQUE DE SILICE.
Y reprer trois positions quidistantes, notes E, HE et HC.
Dposer :
o une petite goutte deugnol en E,
o une petite goutte dhuile essentielle de clou de girofle prpare au
TP prcdent (C8) en HE,
o une petite goutte dhuile essentielle des clous de girofle du
commerce en HC.
Aprs chaque dpt, scher rapidement laide dun sche-cheveux.
3. Elution :
Placer la plaque dans la cuve de chromatographie contenant 1 cm de hauteur dluant.
Lorsque lluant est 1 cm environ du haut, sortir le papier et noter, laide dun crayon, le front de
lluant. Scher.
4. Rvlation :
Les composs sparer ici sont incolores, il faut les rvler pour pouvoir analyser le
chromatogramme. On utilise alors un rvlateur, cest--dire une substance qui ragit avec les
composs sparer en formant des composs colors ; chaque type de composs correspond un
rvlateur.
Exemples de rvlateur : rayonnement U.V., vapeur de diiode, permanganate de potassium,....
Applications :
Placer la plaque obtenue sous une lampe U.V. et cercler les tches ainsi rvles.
Placer ensuite cette mme plaque dans un rcipient satur de vapeurs de diiode.

PIERRON 2011

Principe de la chromatographie (page 7)

Document du professeur 8/8

5. Analyse :
a. Dessiner la plaque et les tches obtenues lchelle 1.

b. Leugnol est-il un corps pur ou un mlange ? Justifier

Leugnol donne une seule tache, leugnol est donc une espce chimique pure.
c. Que peut-on dire de la composition de lhuile essentielle des clous de girofle prpare au TP
prcdent ?
Les taches obtenues avec lhuile essentielle des clous de girofle, prpare au TP
prcdent, sont identiques celles obtenues avec lhuile essentielle des clous de girofles du
commerce.
Lors de ce TP, nous avions bien extrait lhuile essentielle des clous de girofle
d. Que peut-on dire de la composition de lhuile essentielle des clous de girofle du commerce ?
Lhuile essentielle des clous de girofles du commerce donne plusieurs taches dont une situe
au mme niveau que celle obtenue avec leugnol.
Lhuile essentielle des clous de girofles du commerce est donc constitue dun mlange
despces chimiques dont leugnol.

PIERRON 2011

Principe de la chromatographie (page 8)