Observer

TP Extraction et identification d’espèces chimiques

Couleurs et molécules

Objectifs : Identifier les pigments présents dans les feuilles d'épinards. Pour cela, il faut tout
d'abord les extraire, puis les séparer par chromatographie.

Introduction : Pigments et photosynthèse.

Les pigments végétaux qui donnent à certains tissus végétaux leur coloration propre, permettent de
réaliser la photosynthèse grâce à leur capacité à absorber et transformer l'énergie lumineuse.

I- Extraction de colorant contenu dans la carotte et les épinards

1- Broyage
• Râper environ 5 g de carottes ou hacher 5 g d’épinard
• Ajouter un peu de sable et 5 mL d’éthanol
• Broyer l’ensemble dans un mortier à l’aide d’un pilon.
• Verser le contenu du mortier dans un bécher.

Quel est le rôle du broyage ?

Que se passe-t-il lors de l’ajout d’éthanol ?

Que peut-on dire de la solubilité des pigments ?

2- Filtration sur büchner

Principe
La filtration à vide (ou filtrage sur Büchner) permet d'accélérer une filtration classique. On verse le
mélange à filtrer dans l'entonnoir où se trouve un papier filtre. En ouvrant le robinet d'eau, la trompe
à eau aspire l'air se trouvant dans la fiole à vide. La pression dans la fiole baissant fortement, le
liquide de l'entonnoir est aspiré vers la fiole alors que les résidus solides restent piégés dans le
papier filtre. Le liquide obtenu au fond de la fiole est appelé filtrat.

Papier filtre

Büchner

Joint en
caoutchouc

Filtrat liquide

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La filtration se réalise sur Büchner : entonnoir à fond plat perforé que l'on recouvre d'un filtre. Le
Büchner est placé sur une fiole à vide reliée à une trompe à eau.
Après l’avoir légèrement humidifié, placer le papier filtre dans le Büchner.
Mettre en route la trompe à vide en ouvrant le robinet d’eau.
Verser lentement le contenu du bécher le long d’une baguette en verre dans le Büchner.
A la fin de la filtration, déconnecter le tuyau en caoutchouc puis fermer le robinet d’eau.

II- Séparation et identification des pigments

1- Préparation de la plaque à chromatographie
Rappel :
La chromatographie est une technique de séparation et d'identification d'espèces chimiques d'un
mélange. Elle est basée sur la différence d'affinité entre deux phases:
- la phase stationnaire ou phase fixe
- la phase mobile ou éluant.

• Introduire l'éluant dans un récipient. Le niveau

de liquide ne devra pas dépasser 0,5 cm en hauteur
par rapport au fond du récipient.
• Boucher le récipient.

• Tracer au crayon de mine à 1 cm du bord inférieur

de la plaque destinée à la chromatographie
• Déposer sur la ligne de dépôt à l'aide d'une
micropipette une goutte de filtrat contenant la
carotène et une goutte de filtrat contenant les
pigments de feuilles d’épinard. Changer de
micropipette pour chaque dépôt.
• Repérer la position des dépôts à effectuer.

Légender le schéma ci-dessus.

2- L’élution

• Placer le papier dans le récipient. Attention : les

taches ne doivent pas être en contact avec l’éluant.
• Attendre que l’éluant soit à 1cm du haut de la plaque
pour la retirer du bécher.

L’éluant est un solvant pur ou un mélage de solvant qui migre

lentement le long de la plaque chromatographique en entraînant
les composants de l’échantillon

Légender le schéma ci-dessus.

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3- Analyses des résultats

Reproduire les taches observées.

Qu’observe-t- on ?

Quelle est la couleur qui se déplace la plus vite ?

Que peut-on conclure quant à la composition des pigments d’épinards ?

« Les feuilles meurent au cours d’un rite qui tous les ans pare les forêts de teintes éclatantes. En
fait, ce phénomène encore mystérieux n’ajoute aucune teinte aux feuilles car c’est plutôt le vert
caractéristique de la chlorophylle qui disparaît. Le pigment vert appelé chlorophylle ne se renouvelle
pas à l’automne, et la chlorophylle commence à s’épuiser . A ce moment là, des pigments jaunes et
orangés appelés caroténoïdes – qui n’ont jamais cessé d’être présents dans les feuilles – deviennent
visibles. »

A l’aide du texte, indiquer quels sont les pigments présents dans les feuilles

Pourquoi les feuilles changent-elles de couleur en automne ?

Chaque constituant d'un mélange, mis en évidence par une tâche,

est caractérisé, sur une phase fixe et un éluant donnés,
par un Rapport frontal, noté Rf et défini par: H
Rf = h/H avec h : distance parcourue par le constituant
H : distance parcourue par l'éluant h

Calculer les rapports frontaux de chaque colorant

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III- Complément : Spectre d’absorption

Absorbance de la solution colorée : L’absorbance A d’une solution colorée est le rapport entre
l’intensité de la lumière incidente et celle de la lumière transmise.

Dans l’étude de la chromatographie on peut dire que les pigments sont composés de 3 substances :
caroténoïdes, les chlorophylles de couleur verte et les xanthophylles.

A partir du spectre d’absorption, répondre aux questions suivantes :

Spectre obtenu par le passage de lumière blanche

à travers de l’eau distillée.

Spectre obtenu par le passage de lumière blanche

à travers de une solution de pigments bruts :

Pigments bruts
% d’absorption

Quels sont les longueurs d’onde des radiations absorbées ?

Quelle est la couleur absorbée par ces fractions colorées ?

En déduire la couleur des carténoïdes et des xanthophylles

400 500 600 700

Longueur d’onde (nm)

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