UNIVERSITE MARIEN N’GOUABI

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FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES TRAVAUX PRATIQUES
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DEPARTEMENT DE LICENCE
DE PHYSIOLOGIE VEGETALE
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La photosynthèse

Présenté par :

Ahishakiye Jacques
Groupe I, LII Biologie

Brazzaville, 14 Avril 2022

 INTRODUCTION
Les plantes vertes sont parmi les organismes vivants qui produisent la
matière organique à partir des éléments minéraux ; elles sont
autotrophes grâce à la photosynthèse qui s’effectue sur toute les
parties de la plante qui sont vertes, et qui à travers les différents
pigments permet à la plante verte de convertir l’énergie lumineuse en
énergie chimique. Ces différents pigments regroupés en deux classes
(chlorophylles et caroténoïdes) peuvent être mis en évidence suite à
plusieurs manipulations et grâce aux caractéristiques et propriétés qui
sont propres à chaque pigment. Pour notre TP, la chromatographie sur
papier qui est une méthode qualitative qui permet de différencier les
molécules en fonction de leur solubilité, leur poids moléculaire, leur
vitesse de migration… est la méthode qui a été utilisée.

I- BUT :
Mettre en évidence les différents pigments photosynthétiques.

II- PRINCIPE :
Ecraser les feuilles vertes, puis effectuer une filtration dont le
filtrat sera mélangé à de l’alcool pour avoir l’extrait alcoolique
de pigments ; procéder à la séparation et à la saponification
ainsi qu’à la Phéophytinisation pour ensuite réaliser une
réaction qui aboutit à la formation de la chlorophylle, et
effectuer une chromatographie sur papier pour mettre en
évidence par migration les différents pigments présents dans
les feuilles écrasées.

III- MATERIELS
1. Un tube à chromatographie
2. Les tubes à essai + support
 3. Une éprouvette graduée
4. Un minuteur
5. Un stylo-marqueur
6. Un crayon
7. Des pipettes graduées
8. Un entonnoir
9. Le Papier mouchoir (faisait office d’un papier filtre)
10. Une pissette
11. Les spatules
12. Un petit mortier et un pilon en porcelaine
13. Une marmite de cuisine
14. Une plaque chauffante
15. Une balance

IV- PRODUITS

1. Les feuilles de papaye

2. Les cristaux de sulfate de cuivre (CuSO4)
3. L’éther de pétrole (CH3-(CH2)n-CH3)
4. Le benzène (C6H6)
5. L’hydroxyde de potassium (KOH)
6. L’alcool (R-OH)
7. L’acide chlorhydrique (HCl)
8. Le carbonate de potassium (K2CO3)
9. L’eau (H2O)
10. Le sable
11. L’essence

V- MODE OPERATOIRE
• Préparation de l’extrait total
1. Prélever 20ML d’alcool
2. Peser à l’aide d’une balance 4g de feuilles vertes (feuilles de
papaye) ;
3. Mettre les feuilles pesées dans le mortier, après les avoir
découpé en petits morceaux et y ajouter : une pincée de sable
(pour faciliter le broyage) et une autre de carbonate de
potassium (pour intercepter la formation de la phéophytine)
avec un peu d’alcool (qui joue le rôle du solvant) ;
4. Commencer à broyer, tout en ajoutant dans le mortier un peu
des 20ML d’alcool au fur et à mesure jusqu’à ce que les feuilles
soient bien écrasées ;
5. Après broyage, marquer un tube à essai : écrire sur le tube : E.T ;
E.T pour : extrait total.
6. Mettre ensuite à l’ouverture du tube E.T un papier mouchoir qui
servira de filtre, puis transvaser le produit du broyage dans le
tube E.T en retenant les débris (toute phase solide issue du
broyage) dans le papier mouchoir et laissant passer vers le tube
E.T l’extrait de phase liquide ;
7. Marquer un deuxième tube, écrire dessus : T0 ; puis prélever
10ML de E.T et les mettre dans le tube T0

• Préparation de l’extrait alcoolique de

pigments :
Vider le reste du tube E.T dans une éprouvette graduée, puis
diluer à l’alcool jusqu’à atteindre un volume de 25ML : c’est
l’extrait alcoolique de pigments (EAP).

a. Séparation des pigments ‘’selon Kruss’’

o Manipulation :
1. Marquer un tube à essai, écrire dessus : T1
2. Pipeter 2ML de l’extrait alcoolique de pigments (EAP)
puis les mettre dans le tube T1 et ensuite ajouter 3ML
 d’essence à l’aide d’une autre pipette et 2 gouttes
d’eau ;
3. Laisser reposer pendant 5 minutes
o Résultat et observation :
Après 5 minutes, on observe deux compartiments, deux phases dans
le tube T1 ; la phase supérieure est de couleur verte (les pigments
chlorophylliens) et celle inférieure de couleur jaune (les pigments
caroténoïdes).
T1

b. Saponification
o Manipulation :
1. Marquer un tube à essai, écrire dessus : T2
2. Refaire la manipulation effectuer pour le tube T1
3. Ajouter dans le tube T2 une pincée d’hydroxyde de
potassium (KOH)
4. Agiter et laisser reposer pendant 5 minutes

o Résultat et observation :
Au bout de 5 minutes, on n’observe aucune précipitation du sel de
chlorophylles ; en d’autres termes, il n’y a pas eu d’inversion : la
couleur verte (les pigments chlorophylliens) est restée en phase
supérieure et la couleur jaune (les pigments caroténoïdes) en phase
inférieure.

T2
 c. Phéophytinisation
o Manipulation :
1. Marquer un tube à essai, écrire dessus : T3
2. Pipeter 2ML de l’extrait alcoolique de pigments
(EAP) et les mélanger avec 2 gouttes d’acide
chlorhydrique à 10% dans le tube T3 ;
3. Agiter le tube T3
o Résultat et interprétation :
On observe directement après manipulation la couleur brune, celle-ci
traduit la formation de la phéophytine : l’acide chlorhydrique a
déplacé le noyau Magnésium (Mg) hors du centre de la molécule de
chlorophylle. T3

d. Formation de la chlorophylle
o Manipulation :
1. Marquer un tube à essai, écrire dessus : T4
2. Refaire la manipulation effectuer pour le tube T3
3. Ajouter dans le tube T4 quelques cristaux de sulfate
de cuivre (CuSO4)
4. Mettre la marmite de cuisine qui contient de l’eau
sur la plaque chauffante, puis mettre le tube T4
dans cette marmite pour chauffer le contenu du
tube

o Résultat et interprétation :
Après quelques minutes de chauffage, on observe l’apparition de la T4
couleur verte dans la solution du tube 4 ; le sulfate de cuivre a
produit les ions Cu+2 qui ont permet au noyau de Mg de réintégrer le
centre de la molécule de chlorophylle
 e. Chromatographie sur papier
o Manipulation :
1. Prélever 6ML de benzène et 2ML d’éther de pétrole et le
mettre dans le tube à chromatographie
2. En attachant le papier à chromatographie sur le bouchon,
essayez de positionner cet ensemble (bouchon et papier)
à l’extérieur du tube à chromatographie afin de marquer
au crayon sur le papier le niveau où s’arrête la solution
contenue dans le tube à chromatographie
3. A partir de la marque faite sur le papier, prendre une
petite quantité de l’extrait pur conservé dans le tube T0 et
déposer successivement les gouttes sur cette marque.
Pour chaque dépôt de goutte, il faut souffler jusqu’à ce
qu’elle sèche avant d’ajouter une autre goutte.
4. Placer ensuite l’ensemble (bouchon et papier ayant la
tache de chlorophylle) sur le tube de chromatographie de
sorte que la tache soit trempée dans la solution contenue
dans tube.
5. Laisser le tube à chromatographie à l’obscurité pendant
18 minutes afin de permettre la migration des pigments.
o Résultat et observation :
On observer du haut vers le bas : un pic jaune contenant des
xanthophylles, un pic vert clair contenant de la chlorophylle « a » et
un pic vert foncé à la base contenant de la chlorophylle « b ».
Caroténoïdes
Chlorophylle a
Chlorophylle b

Tache initiale

Papier à chromatographie