Université M’hamed Bouguerra Boumerdès TP de Chromatographie

Faculté des Sciences

Département de Chimie
1ere année Master

TP 3 : Chromatographie sur colonne

Expérience 1 : Identification des constituants d'un sirop de menthe

Préparation de la colonne:
Déposer un petit morceau de coton dans le bas de la colonne;
Peser environ 10 g de gel de silice;
Introduire la silice dans la colonne;
Tapoter la colonne afin d’obtenir une surface plane de silice;
Placer un bécher sous la colonne;
Introduire doucement de l’eau distillée (à l’aide d’une pipette par écoulement de long de la paroi de
la colonne). Ajouter une quantité d’eau suffisante pour être environ à 2 cm au dessus de la surface
plane de la silice.
Attention : Il faut toujours du liquide au-dessus de la colonne, sinon celle-ci pourrait se
fissurer en séchant !

Chromatographie du sirop de menthe

Dépôt de l’échantillon à séparer
Déposer très doucement à l’aide d’une pipette, sans toucher les parois de la colonne, l’échantillon de
sirop de menthe: attention à ne pas déformer la surface de la phase stationnaire pendant cette
opération;
Lorsque le sirop de menthe a pénétré à la surface de la phase stationnaire, éluer avec l’éthanol en
remplissant la colonne;
Lorsque le premier colorant arrive en bas de la colonne le récupérer dans une première cuve;
Eluer ensuite avec un autre éluant: un mélange d’éthanol + eau salée;
Lorsque le second colorant parvient en bas de la colonne, le récupérer dans une seconde cuve.

Questions
a. Indiquez les couleurs du premier et du deuxième colorant élué.
b. Expliquez la couleur perçue du sirop de menthe.
c. Quel colorant présente une plus grande affinité pour le gel de silice ? Pour l’eau ?
d. Quel sont les différences et l’intérêt de ce type de chromatographie par rapport à celle sur couche
mince ?

ou Expérience 2 : Séparation qualitative de cations par échange d’ions

Généralités sur les résines échangeuses d'ions

Ni+2, Co+2, Cu+2, Fe+3
Préparation de la colonne :
Placer dans la burette un peu de solution de HCl (9M), la faire passer rapidement de façon à
ce qu’il n’y ait pas de bulle au dessous du robinet. Fermer le robinet.
Placer à l’aide d’une bagueete de verre un petit morceau de coton.
Peser quelque gramme de résine dans un erlenmeyer de 250 cm3 et y ajouter environ 100ml
de HCl (9M). agiter et verser le mélange dans la burette par petites portions.

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Ouvrir le robinet et faire tasser la résine.

Introduire dans le liquide au sommet de la colonne de résine, un second morceau de coton.
Séparation des ions :
Préparer environ 100 ml de solution de 4, 2,5 et 0,25 M de HCl
Faire couler la solution de HCl 9M qui de se trouve dans la burette jusqu’au niveau du coton.
Ajouter 1 cm3 de solution contenant le mélange des sels à séparer.
Faire couler jusqu’au niveau du coton, puis ajouter, en plusieurs fois, 40 ml de HCl 9M.
Récupérer dans une série de tube à essai, des fractions successives de 5 cm3 d’éluat.
Avec l’éluant HCl (9M), on élue les ions Ni+2.
Faire passer sur la colonne, 50 ml de HCl (4M), on voit alors une bande colorée en vert (Co+2)
se déplace vers le bas de la résine.
Récupérer 5ml d’éluat
Faire passer ensuite sur la colonne, 50 ml de HCl (2,5M), puis enfin 80 ml de HCl (0,25M).
On récupère ainsi les ions Cu+2 et Fe+3.

Identification des ions :

Cobalt :
A 1 ml de solution (supposé contenir des ions Co+2), ajouter 1 ml de solution aqueuse de
thiocyanate d’ammonium.
Si la solution contient les ions Co+2, l’addition de quelques ml d’acétone fera apparaitre la
couleur bleu pale des ions Co(SCN)4-2.
Si la solution contient aussi des ions Cu+2, il apparait une coloration brune au moment où l’on
ajoute le thiocyanate d’ammonium. l’addition d’acétone fait apparaitre une coloration dans le
haut du liduide.
Cuivre :
A 1 ml de solution (supposé contenir des ions Cu+2), ajouter 2 ml de solution ammoniacale
concentrée l’apparition d’une coloration bleu pale indique la présence de Cu+2 (cette
coloration est due au complexe Cu(NH3)4+2 .
Fer :
A 1 ml de solution (supposé contenir des ions Fe+3), ajouter 1 ml de solution aqueuse de
thiocyanate d’ammonium (ou de potassium). La présence d’ions Fe+3 Se traduit par
l’apparition d’une coloration rouge sang.
Nickel :
Rendre basique 1ml de solution supposé contenir les ions Ni+2 par addition de solution
ammoniacale, y ajouter un peu de murexide ; si les ions Ni+2 sont présents, on obtien une
cloration orange.

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