TITRE : EXTRACTION, DETECTION ET QUANTIFICATIONS DES

FLAVONOIDES DANS LE THE VERT, LE THE ROUGE ET LES GRAINES DE

FOLERE (HIBISCUS SABDARIFFA)

I- Introduction générale

Les métabolites secondaires constituent un ensemble de molécules qui ne sont pas

strictement nécessaires á la survie de la plante, de la bactérie ou du champignon, mais dont la
sécrétion survient en réponse á un besoin précis. Ce sont majoritairement des molécules de
petite taille et de poids moléculaire relativement bas comparés aux métabolites primaires.
Elles peuvent jouer des rôles de répulsifs envers les prédateurs ou d´attractifs, de pigments,
permettant de capter le rayonnement solaire. Ils peuvent également montrer de remarquables
activités biologiques contre des pathogènes humains, c´est pourquoi nombre de ces
métabolites sont utilisés en thérapeutique comme principes actifs.

L´extraction de ces métabolites se fait par des méthodes choisies selon la volatilité des
extraits ciblés. C´est ainsi qu´il existe des méthodes d´extraction de métabolites volatiles
(hydro distillation, etc…) et non volatiles (infusion, décoction, macération etc…). De l´extrait
brut ainsi obtenu du matériel végétal, le chercheur dispose de toute une batterie de test pour
déterminer sa constitution en molécules secondaires. Les méthodes qualitatives renseignent
uniquement sur la présence ou non de classes ou sous-classes de métabolites secondaires
présents dans l´extrait.

Les méthodes quantitatives quand á elles permettent de statuer sur la teneur en chaque
classe ou sous classe de métabolites présente au sein de l´extrait. Ces dernières reposent en
général sur le dosage impliquant des complexassions ou des réactions colorées avec des
réactifs appropriés, suivi d´une évaluation spectrophotométrique suite á laquelle les densités
optiques obtenues sont proportionnelles à la quantité de métabolite présent.

Selon leurs structures de base, les métabolites secondaires peuvent être répartis en diverses
classes à savoir, les terpènes, les alcaloïdes et les composés phénoliques. Ces derniers
(composés phénoliques) sont caractérisés en générale par la présence dans leurs structures
d’au moins un noyau benzénique auquel est lié un ou plusieurs groupements hydroxyles et
sont divisés en plusieurs classes à savoir les phénols simples, les acides phénoliques, les
phénylpropanoides, les stilbènes, les tanins, les xanthones, les lignanes, les quinones et les
flavonoïdes. Cependant, notre travail consistera à extraire, détecter et quantifier les
flavonoïdes dans les matières végétales. Les flavonoïdes sont abondement retrouvés dans les
agrumes en générale dans la peau du citron, dans le poivron, Cranberry, les fruits rouge foncé
tels que le myrtille, cassis, raisin, vin rouge, dans le soja, les oignons, les pommes, le cacao, la
grenache, le café, le thé vert, le ginkgo, les tomates, les carottes, persil, laitues, bricoli, thé
rouge, grain foléré.
Les flavonoïdes ont des propriétés antioxydantes, ils participent à combattre les radicaux
libres, participent à renforcer l’élasticité, antiinflammatoire, l’étanchéité des vaisseaux
sanguins et donc leur résistance, améliorer l’irrigation et la dilatation des artères et régulaient
ainsi la tension artérielle, luttent contre les fibres de collagènes indispensable au maintien de
la santé cellulaire, etc…

Problématique : l’exploitation de la propriété antioxydant des flavonoïdes contenue dans la

matière végétale (thé rouge, thé vert et grain de floreré)
II- Objectif générale et spécifiques
1- Objectif générale
Déterminer la teneur en flavonoïde dans les différents thés (thé vert, thé rouge) et les grains
de foleré qui ont un effet antioxydant permettant de neutraliser ou réduire les dommages
causées par les radicaux libres dans l’organisme.

2- Objectifs spécifiques
- Déterminer de la teneur en flavonoïde dans le thé fait à base de grain d’Hibiscus
sabdariffa (foleré)
- Déterminer la teneur en flavonoïde dans le thé vert
- Déterminer la teneur en flavonoïde dans le thé rouge
- Comparer la teneur en flavonoïde dans ces différents extraits

III- MODE OPORATOIRE

A- Matériels et réactifs
Matériels
- Erlenmeyer pour stocker les différents extraits
- Entonnoir pour de verser l’extrait dans l’erlenmeyer
- Papier filtre pour filtrer la solution
 - Eprouvette graduée pour mesurer le volume d’un liquide avec une précision moyenne
(eau)
- Mortier et pilon pour broyer ou rendre en poudre les grains d’oseille
- Compte goute pour permettre d’introduire un liquide ou réactif goute à goute dans un
milieu réactionnel
- Spatule pour prélever un solide à poudre fine (thé, poudre grains d’oseille
- Tube à essais en pyrex pour les dosages
- Balance pour mesurer les quantités des différents matériels solide à mesurer
- Etiquettes pour différentier les composés et réactifs d’analyse.
- Spectrophotomètre pour la mesure des différents absorbance (DO)
- Pissette pour les rincer les verreries
- Bain marie pour chauffer les différentes solutions (incubation)
- Micropipette et les pipettes graduées pour mesurer les volumes des solutions à
prélever avec précision
- Papier aluminium pour utiliser comme bouchon des tubes à essai lors de l’incubation
- Chronomètre pour mesurer le temps

Réactifs
- Matériel végétal : thé vert, thé rouge et grain d’Hibiscus sabdariffa (foleré)
- Eau distillée
- Méthanol 95%
- Solution de cyanure ferrique
- Copeaux de magnésium et de HCl concentré

- Quercétine

- Nitrite de sodium (NaNO2) 5%

- Trichlorure d’aluminium (AlCL3) 10%

- Hydroxyde de sodium (NaOH) 4%

B- Modes opératoires
 Extraction par décoction des composés phénoliques.
Dans trois (02) Erlenmeyer, on introduit à l’aide d’une spatule respectivement 1g de thé vert
et 1g de thé rouge que l’on a pesé sur la balance puis on introduit 50ml d’eau, on laisse ce
mélange infuser pendant 15minutes. En fin, on filtre cette solution obtenue à l’aide de papier
filtre et le filtrat obtenu est recueilli dans deux Erlenmeyer différents puis on les étiquette ces
derniers.

Prélevons quelques grains de foléré puis introduit dans un mortier et les moudre. On prelève
1g de la farine puis introduire dans un erlenmeyer, on ajoute 50ml d’eau et la laisser infuser
pendant 15minutes, on filtre la solution obtenue et le filtrat est recueilli dans un autre
erlenmeyer qui sera utilisé pour le dosage.
Matériel d’extraction : bécher ou erlenmeyer, eau distillé, plaque chauffante, papier filtre ou
toile, balance, entonnoir, burette graduée.

 Détection des composés phénoliques (pas fait par manque de reactif)

En présence du méthanol puis chauffage et ajout de quelques gouttes de solution de cyanure

ferrique fraîchement préparée, la formation d’un précipité vert marque la présence des
phénols (Harbone, 1976).

Tube témoin Tube 1 Tube 2 Tube 3

0,5 mL d’eau 0,5 mL d’extrait de 0,5 mL d’extrait de 0,5 mL d’extrait de
distillé thé vert thé rouge graine d’oseille
1,5 mL de méthanol
Incubation pendant 15 min
3 gouttes de solution de cyanure ferrique
Observation et interprétation

 Détection des flavonoïdes

Identification tests for flavonoids: Alkaline reagent test Crude extract(extrait brut) is mixed
with 2 ml of 2% NaOH solution. Intense yellow colour (jaune intense) is formed which turned
colourless (incolore) on addition of few drops (quelque goute) of dilute HCl which indicates
the presence of flavonoids
L’extrait brut est mélangé avec 2ml de NaOH 2%. Il se forme une coleure jaune intense qui
vire à incolore en présence de HCl goute à goute

Tube 1 Tube 2 Tube 3 Tube 4

0,5 mL d’eau 0,5 mL d’extrait de 0,5 mL d’extrait de 0,5 mL d’extrait de
distillé thé vert thé rouge graine d’oseille
2 mL de NaOH 2%
Goute à goute de HCl
Observation et interprétation

 Extraction des flavonoides.

On prélève 25ml d’extrait de chaque compose puis on mélange avec 50ml d’acétone ou alcool
(95%) à chaud, ensuite on laisse au repos puis faire la décantation pour séparer le mélange
(les flavonoïdes sont soluble dans l’alcool et l’acétone) et le surnagent recueilli est ensuite
évaporé sous vide pour éliminer l’alcool ou l’acétone utilisé pour l’extraction.

 Dosage des flavonoïdes

Réalisation de l’étalonnage
Tube 1 Tube 2 Tube 3 Tube 4 Tube 5

00μg de 100μg de 200μg de 300μg de 400μg de

quercétine quercétine quercétine quercétine quercétine

1900 μl d’eau distillée

150 μl de nitrite de sodium (NaNO2) 5%
Homogénéisé
Incubation 05 min
150 μl de trichlorure d’aluminium (AlCL3) 10%
Incubation 06 min
500 μl d’hydroxyde de sodium (NaOH) 4%
Mesure de l’absorbance à 510nm
 Tracer la courbe d’étalonnage DO=f(C) avec DO (absorbance à 510nm) et C (concentration
de quercétine en mol.l- 1)

Réalisation du dosage

Tube 1 Tube 2 Tube 3

100 μl d’extrait de thé vert 100 μl d’extrait de thé rouge 100 μl d’extrait de graine
d’oseille
1900 μl d’eau distillée
150 μl de nitrite de sodium (NaNO2) 5%
Homogénéisé
Incubation 05 min
150 μl de trichlorure d’aluminium (AlCL3) 10%
Incubation 06 min
500 μl d’hydroxyde de sodium (NaOH) 4%
Mesure de l’absorbance à 510nm

Calculer la concentration de flavonoide contenue dans chaque extrait en mol.l - 1 et en mol/l/g

Membres du groupe

N° NOMS ET PRENOMS MATRICULES

1. DJIVIHEI ADAKEMTCHANG SOLANGE 19A1291FS
2. DJOUMOTANLE JUSTE 16A0594FS
3. DOUDOU WALKO FLORENCE 19A1329FS
4. DOUKA GALOUA 16A0290FS
5. FALMATA MABIAVA MATH 14B1358FS
6. FENDOUN NGOUCHEME RAPHAEL 19A1290FS
7. FOOKALBO VAGAI OBADIAS 16A0223FS
8. GNIBERKA ALEXANDRE 19A2095FS
9. GUIDADAK ALBERT 15A0026FS
10. HAMAN BOUZOUMBE ZAKARIA 16A0980FS