République Algérienne Démocratique et populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur de la Recherche

Université Abou Bekr Belkaid-Tlemcen
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie et Sciences de la Terre et de l’Univers

Numéro TP : 03
Semestre : 01 Année de graduation : 2022-2023
M1 : BAACHEV
Module : technique d'analyse
Intitulé du TP : Dosage des composés phénoliques par spectrophotomètre

Le but de ce TP est de préparer la gamme d’étalon et de savoir utiliser le spectrophotomètre.

1-Principe des dosages :

Dosage des composés phénoliques :
Ce dosage repose sur la méthode utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu. Ce réactif est constitué d’un mélange
d’acide phosphotungstique et d’acide phosphomolybdique. L’oxydation des phénols réduit ce réactif en un
mélange d’oxydes bleus de tungstène et de molybdène. L’intensité de la couleur est proportionnelle au taux
de composés phénoliques oxydés.

2- Extraction des composés phénoliques totaux présents dans les feuilles d’Quercus lusitanica :
- Peser 5g de feuilles (d’épinard ou de laitue), les découper rapidement et les broyer dans un mortier
contenant une spatule de sable de Fontaine bleu et 100 ml de méthanol ou eau distillé.
- Filtrer le broyat sur un entonnoir recouvert de papier filtre
- Evaporer le filtrat à sec à l’évaporateur rotatif (à 60°C)
- Reprendre les résidus secs dans 5 ml de méthanol absolu.

3-Dosage des composés phénoliques totaux

La teneur en phénols totaux des extraits des plantes a été déterminée par la méthode de Singleton et Rossi
(1965) utilisant le réactif de Folin–Ciocalteu.
Un volume de 200 µl pour chaque extrait est introduit dans des tubes à essais, le mélange 1 ml de Folin
Ciocalteu dilué 10 fois et 0.8 ml de carbonate de sodium à 7.5 % est additionné. Les tubes sont agités et
conservés durant 30 min. L’absorbance est mesurée à 765 nm en utilisant le spe »ctrophotomètre.
Une courbe d’étalonnage à différente concentration d’acide gallique a été préparée.
La teneur en phénols totaux est exprimée en milligramme (mg) équivalents acide gallique par gramme
(g) du poids de la matière sèche (mg EAG/ g MS).

Gamme étalon :
La concentration d’un composé phénolique, l’acide gallique, sera déterminée grâce à une gamme étalon.
Pour cela,
- A partir d’une solution d’acide gallique de 5 g/l, préparer les dilutions suivantes 150, 100, 50, 10,
5 et 0 mg/l (Vf= 5 ml)
- Préparer six tubes comme pour les extraits avec 1 ml de ces dilutions.
- Lire l’absorbance à 765 nm

4- Résultats :
- Tracer la courbe étalon de l’absorbance en fonction de la quantité d’acide gallique en mg
- Déterminer la quantité de composés phénoliques présents dans les extraits aqueux et méthanolique
en mg par g de matière fraîche.