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AT3 – J1 /J2/J3 :Utilisation d'une ressource marine – les micro-algues

Projet 3 : L'océan, une ressource naturelle fragile et à protéger

Utilisation d'une ressource marine : les micro-algues
AT N°3 – J1 et J2
Corrigé : /40 points (CR : 26 – TK : 14)

J1 :(/8)
- Réflexions préliminaires :
Q1. Signification de l'expression « culture discontinue » : (0,5 pt)
Les cultures sont menées pendant des périodes de temps déterminées (de 3 à 7 jours), sans renouvellement
du milieu de culture.

Q2. Rôle des composants du milieu Sabouraud + Chloramphénicol :(1 pt)

Constituants Masse Rôle

Peptone pepsique de viande 10 g Sources de C et de N
Glucose 20 g Source de C et d'énergie
Chloramphénicol 0,5 g Antibiotique : inhibe la culture des bactéries
Agar 15 g Solidifiant

Q3. Logigramme de la manipulation de dénombrement (dilution et technique des spots) de la FP1 :

(2 pts)
Transfert de 1 mL de tube en tube avec pipette graduée stérile

5 tubes d'eau
Solution de
physiologique
surnageant
stériles de 9 mL

Dilutions
des
100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
solutions

Déposer 20 µL ( = spot) de chacune des dilutions à l'aide de la P200 et de cônes stériles

100
10-1
Gélose 10-5 Lecture :
Sabouraud +
Dénombrement des
Chloramphénicol
Incuber 48h à 30°C colonies de chaque
10-4 10-2
spots
10-3

Q4. Compléter liste du matériel de la Fiche Protocole 1 : (1pt)

- 5 tubes de 9 ml EDS
- 5 pipettes graduées stériles de 1 mL

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Q5. Compléter la dernière ligne du tableau du composition du milieu de l'Annexe 3 : (1 pt)

Volumes Na2CO3 KNO3 NaCl (NH4)3PO4 Thé vert FeSO4 MgSO4 K2SO4 CaCl2
préparés concentré
1L 16 g 2g 1g 0,1 g 1 mL 10 mg 0,1 g 0,5 g 0,1 g
50 mL 0,8 g 0,1 g 0,05 g 0,005 g 0,05 mL 0,5 mg 0,005 g 0,025 g 0,005 g

m. ou .V initial×50.10−3 L
Équation générale : m. ou . V final= (0,5 pt)
1L

- Manipulations T1, T2 et T3 :
Q6. Tableau des observations à l'objectif 40 des états frais : (1 pt)

États frais Culture Surnageant de culture

- Présence de longues cellules - Présence de cellules rondes, avec ou
filamenteuses et spiralées, vertes = sans bourgeonnement = levures.
Observations à
micro-algues ;
l'objectif 40
- Présence de cellules rondes, incolores
avec ou sans bourgeonnement = levures.

Q7. Qualité générale de cette culture de micro-algues :(0,5 pt)

La présence de levures indique une contamination de la culture de micro-algues.

Q8. Résultats d'absorbances obtenus en T2 : Aculture = 0,995 Asurnageant = 0,585

- Interprétation de la différence d'Absorbance : (0,5 pt)
La présence des micro-algues dans la culture explique la forte absorbance, due à un trouble important.
Par contre, le fait de ne pas avoir une absorbance nulle dans le surnageant, confirme la présence de cellules
en suspension = les levures contaminantes.

Q9. Indiquer la position de chaque dilution : voir gabarit

- Manipulation T4 : Culture de micro-algues

Q10. Résultat d'absorbance obtenue à t0 AT0 = 0,101

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J2 (/10)
- Réflexions préliminaires :
Q11. Schéma réactionnel du dosage volumétrique de la vitamine C présenté dans la FP3 : (1 pts)

Dans la
burette : - Concentration : CDCPIP = 10-3 mol/L
Solution de
2,6 DCPIP - Volume : VDCPIP = Veq

Dans fiole :
- Extrait de micro-algues : E = Vvit.C = 5 mL et Cvit.C = ?
- 5 mL d'acide métaphosphorique
- 10 mL d'eau bouillie et refroidie

Q12. Comment peut-on observer la fin du dosage par la méthode au DCPIP ? (0,5 pt)
Changement de couleur de la solution dans la fiole car le DCPIP ne se fixe plus avec la vitamine C, mais est
en excès.
- Couleurs de la solution présente dans la fiole d'Erlenmeyer avant et après l'équivalence :
→ Avant l'équivalence : Incolore (DCPIP fixé à vit.C)
→ Après l'équivalence : rose (DCPIP libre en milieu acide). (0,5 pt)

- Manipulations T5 : Culture de la micro-algue

Q13. Résultat d'absorbance obtenue à t1
AT1 =
- Comparer à l'absorbance obtenue à t0 (Q10). Conclure sur une augmentation de la croissance de
spiruline.

Q14. Peut-on dire que les micro-algues sont dans des conditions optimales de croissance ?

- Manipulation T6 : Dénombrement des levures par la technique des spots

Q15. Tableau des résultats du dénombrement par la méthode des spots : (1 pt)
Dilution 100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
Nb UFC/spot ND ND 49 26 1 0
ND = Non-Dénombrable.

Q16. Calcul de la concentration en levures Nspots en UFC/mL dans le surnageant de culture à l'aide de
la FP1 - J1: (1 pt)
VmL = 20 µL = 0,020 mL
Spots dénombrables et retenus (entre 50 et 2 UFC) : spot 10-2 et spot 10-3
Nombre de spot par dilution : 1 et d1 = 10-2
∑colonies (49+26)
N spots= = −2
=3,4.105 UFC /mL
V mL×1,1×d 1 0,020×1,1×10

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- Manipulation T7 : Dosage de la vitamine C

Q17. Rappeler la concentration massique théorique de vitamine C de la solution de contrôle =
CmvitC;théo. (0,5 pt)
Remarque : CmvitC;théo. correspond à la valeur conventionnelle Yref dans la FM1.
CmvitC;théo. = 0,30 g/L = Yref

Q18. Rappeler l'équation du dosage de la vitamine C par le DCPIP. (0,5 pt)

2,6 DCPIP + Acide ascorbique Dérivé réduit + Acide déhydro-ascorbique
incolore
- Établir l'égalité molaire entre la vit.C et le DCPIP : nvit.C =n DCPIP (0,5 pt)

Q19. Tableau de résultats : (0,5 pt)

Véq.étalon (mL) Véq.essai (mL)
8.30 8.40

Q20. A l'aide de l'égalité molaire, calculer la concentration molaire en vit.C expérimentale dans la
solution étalon de contrôle : CvitC;étalon en mol/L .
Donner les équations aux grandeurs, aux unités et aux valeurs numériques.(1 pt)
Si : nvit.C =n DCPIP alors : C vit.C ×V vit.C =C DCPIP ×V DCPIP
mol
×mL
C DCPIP ×V DCPIP mol L
- EAG : C vit.C = - EAU : =
V vit.C L mL
10−3×8,30 −3
- EAVN : Etalon C vit.C.étalon= =1,66 .10 mol / L
5

Q21. A l'aide de l'égalité molaire, calculer la concentration molaire en vit.C dans l'échantillon à
analyser : CvitC;essai en mol/L(0,5 pt)
−3
10 ×8,40
- EAVN : Essai C vit.C.étalon= =1,68 .10−3 mol / L
5

Q22. En déduire la concentration massique en vitamine C dans la solution étalon de contrôle et dans
l'échantillon à analyser : CmvitC;étalon et CmvitC;essai en g/L.
Remarque : CvitC;étalon correspond à la valeur mesurée du contrôle YEC dans la FM1.(1 pt)
- EAG : Cmvit.C =C vit.C ×M vit.C
- EAVN : Étalon Cmvit.C.étalon =1,66.10−3×176,12=0,292 g / L = YEC
Essai Cmvit.C.essai =1,68 .10−3×176,12=0,295 g / L

Q23. A partir de la valeur de CmvitC;théo. (Yref), et à l'aide de l'incertitude relative donnée IR %,

déterminer les valeurs limites d'acceptabilité Linf et Lsup (0,5 pt)
95 95 105 105
Linférieure =Y ref ×( )=0,3×( )=0,285 g / L L supérieure=Y ref ×( )=0,3×( )=0,315 g / L
100 100 100 100

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Q24. A partir des valeurs limites d'acceptabilité et de la valeur expérimentale mesurée, valider la
méthode de dosage (exactitude de la mesure (FM2).(0,5 pt)
La valeur mesurée YEC appartient à l’intervalle d’acceptabilité : Linf < 0,292 < Lsup) :
• la valeur mesurée YEC est exacte, donc conforme : l’exécution de la procédure de mesure est satisfaisante
dans les conditions du jour ;
• en conséquence, la valeur mesurée obtenue pour l'échantillon inconnu est acceptée.

Q25. Exprimer le résultat retenu de CmvitC;essai à l'aide de l'incertitude.(0,5 pt)

k x uc = 2 x 0,004 = 0,008 g.L-1 => 1er c.s. est 8 donc garder 1 c.s. (3 décimales)
Cmvit.C.essai =0,295±0,008 g / L

J3 (/8)
– Manipulations T8 : Dénombrement de levures en cellule de numération
Q26. Tableau de résultats du dénombrement des 10 rectangles (0,5 pt)
N°
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Rectangle
Nbre de
0 1 2 0 1 2 1 0 1 0
Cellules

- Calcul de la valeur du nombre de levures dans une chambre complète ( = 100 rectangles) :
N 100.rectangle=10×∑ nrectangle =8×10=80 (1 pt)

Q27. Calcul de la concentration en levures NMalassez en UFC/mL dans le surnageant de culture :(1 pt)
nombre de cellules comptées 80
N Malassez= = =80 UFC /µL=8.104 UFC /mL
nombre de rectanglescomptés×volume d '1 rectangle 100×0,01

- Manipulation T9 : Dosage spectrophotométrique des phytostérols

Q28. Tableau des valeurs des absorbances : (0,5 pt)
Microcuve Blanc réactif Étalon Extrait E1 Extrait E2
Concentration en PS
0 27 ? ?
(en mg/L)
A à 505 nm 0.000 0.301 0.380 0.383

Q29. Calcul de la concentration massique en phytostérols dans les 2 essais d'extrait : (1 pt)
A Extrait−E1 AEtalon AExtrait −E1×C Etalon
A = k x C donc = donc EAG : C Extrait−E1 = ou AT2 j3-J4 FP2 (Dosage du P)
C Extrait− E1 C Etalon A Etalon
mol
∅×
mol L
EAU : =
L ∅
C Etalon ×A Extrait−E1 27×0,380
Essai 1 : C Extrait−E1= = =34,09 mg / L
A Etalon 0,301
C Etalon×A Extrait−E2 27×0,384
Essai 2 : C Extrait−E2 = = =34,45 mg / L
AEtalon 0,301

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Q30. Compatibilité métrologique des 2 essais : (1 pt)

lCm E1−Cm E2 l=l 34,09−34,45l=0,36 mg / L
2,8×Sr =2,8×1,2=3,36 mg / L donc l Cm vit.C.1−Cmvit.C.2 l< 2,8×Sr et les valeurs sont compatibles
Cm E1+ Cm E2 34,09+ 34,45
La valeur retenue est la moyenne : Cm Extrait−PS = = =34,27 mg / L
2 2
Q31. Expression du résultat à l'aide de l'incertitude :
k x uc = 2 x 0,1 = 0,2 mg.L-1 => 1er c.s. est 2 donc garder 2 c.s. (2 décimales)
CExtrait-PS = 34,27+/-0,20 mg/L (1 pt)

- Exploitation :
Q32. Détermination de la concentration en levures Nabs en UFC/mL dans le surnageant de culture : (1
pt)
1,25.10 5×A surnageant 1,25.10 5×0,287
Asurnageant = 0,287 donc : Nabs= = =3,6 .104 UFC /mL
1 1

Q33. Comparaison des trois méthodes de dénombrement réalisées dans l'AT3: (1 pt)
Méthode de Comptage en cellule de
Mesure de l'absorbance Technique des spots
dénombrement Malassez
Concentration en
2,6.106 3,4.105
levures en UFC/mL
Temps de mise en œuvre 2 à 3 min 15 min 15 à 20 min
Temps d'obtention du
Immédiat Immédiat 48 h
résultat
Technique de
Technique de Technique de
dénombrement indirecte
dénombrement directe, dénombrement indirecte,
Comparaison permettant seulement une
assez rapide et assez assez longue mais très
estimation, mais très
fiable. fiable.
rapide.

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