III.

1 Introduction
Dans ce chapitre nous présenterons les différentes étapes pratiques réalisées dans notre étude,
à savoir :
 Préparation des différents adsorbants utilisés dans cette étude à partir de la plante
Moringa originaire du Mali.
 Détermination des caractéristiques des différents matériaux préparés ;
 Démarche expérimentale de l’adsorption des deux colorants cationique : Crystal violet
‘Crystal violet’ et Vert brillant ‘Green brillant’, et les ions du plomb ‘(Lead)’ en
solution aqueuse sur les différents adsorbants synthétisés ;
 Description des techniques de mesure physico-chimiques.
Matériel végétal
 La récolte
Des échantillons des feuilles de Moringa oleifera ont été récoltés en mois de Mars
2018, dans la région cultivable de la wilaya de Ghardaïa (Figure 7).

Figure 7: Récolte de M. oleifera dans la wilaya de Ghardaïa.

(a) Grains (b) Coquilles (C) Feuilles Oleifera

Figure III.2. Photographie des Grains, Feuilles et Coquilles de Moringa Oleifera
III.3.1. La préparation de la poudre des feuilles, des grains et des coquilles de Moringa
Oleifera
- Préparations de la poudre des feuilles et des coquilles
Les grains, les feuilles et les coquilles ont été lavé avec de l'eau distillée, séché dans une étuve
de précision à 60 °C pendant 3h et laissé une nuit à l’air libre. Les grains, les feuilles et les
coquilles de Moringa Oleifera représentées sur la figure III.2 ont été broyé à l’aide d’un
broyeur électrique jusqu’à l’obtention d’une poudre. Les échantillons de poudre obtenus ont
été passés à travers des tamis pour obtenir une poudre fine dont la taille des particules est
inférieure à 0,5 mm et stocké dans des flacons en polyéthylène.
La poudre des feuilles de Moringa doit être séchée à 50°C pendant 30
minutes pour réduire le taux d’humidité résiduelle au-dessous de 7,5%.
En effet, la poudre de feuilles de Moringa attire fortement l’humidité et
le produit peut se ré-humidifier pendant ou après le broyage.

(a) Poudre des grains (b) poudre des feuilles (c) Poudre des coquilles

Figure III.5. La poudre (a) des grains (b) des feuilles et (b) des coquilles de
Moringa Oleifera

I.2.1.1. Préparations des extraits

I.2.1.1.1. Extrait brut des feuilles de M. oleifera (jus frais de M. oliefera)
Les feuilles fraiches de M. oleifera, nettoyés et écrasés dans un mortier (Figure 8).
Ensuite l’extrait a été filtré à l'aide des compresses stériles, puis la partie liquide extraite a été
stérilisée par des filtres millipore 0,45 μm après une centrifugation à 4000 tpm pendant
20min. Pour éviter toutes transformations des composés, l'extrait des feuilles
de M. oleifera est préparé le jour même des expériences.
 Figure 8 : Ecrasement des Feuilles fraiches de M. oleifera

I.2.1.1.6.Extraction Décoction
30g de la poudre de la plante est mélangé avec 600 ml d’eau distillée dans un erlenmeyer de1
litre. Le mélange est chauffé à 70℃ pendant 60 min sous agitation modérée.Aprés
refroidissement la solution est filtrée puis séchée à l’étuve.Le résidu est pesé puis conservé à
l’abri de la lumière et de la chaleur jusqu’à utilisation.

I.2.1.1.2. Extraction éthanolique

30g de la poudre végétale a été mise en contact avec 300 ml d’un mélange de 70% d’éthanol
et 30% d’eau distillé dans un appareil de type soxhlet.Aprés refroidissement à température
ambiante,l’extrait éthanolique a été filtré puis évaporé par un évaporateur rotatif.

Figure 9 : Extraction éthanolique par soxhlet

I.2.1.1.3. Extraction méthanolique
L’extraction a été effectuée par macération de 30 g de la poudre végétale (M. oleifera)
dans 300 ml d’un mélange Méthanol-Eau (70/30, V/V) . Le mélange a
été agité vigoureusement pendant 48 heures à l’aide d’un agitateur. Après filtration sous vide
(à l’aide d’une pompe) par le papier filtre , la phase alcoolique résultant a été
évaporée à sec sous pression réduite dans un évaporateur rotatif à 50°C pour éliminer le
méthanol (Figure 10).

Figure 10: Etapes Principales réaliser dans la préparation de l’extrait hydro-

méthanolique
I.2.1.2. Rendement d’extraction
Le rendement d’extraction est le rapport entre le poids d’extrait et le poids de la plante
sèche à traiter. Il est exprimé en pourcentage suivant la formule donnée par Falleh et al.
(2008)
R (%) = 100 Mext/Méch.
Où :
R est le rendement en %.
Mext est la masse de l’extrait après évaporation du solvant en gramme.
Méch est la masse sèche de l’échantillon végétal en gramme.

Le taux d’humidité

Le taux d’humidité de plante a été calculé selon la relation suivante :
H% = poids α – poids β / poids α*100
 α: poids d’échantillon (plante fraiche) en gramme
 β : poids d’échantillon (plante sèche) en gramme
 H% : le taux d’humidité exprimé en pourcentage
Criblage phytochimique
Le screening chimique d’une drogue végétale représente toujours la première étape
de l’étude chimique et permet d'orienter les recherches ultérieures.
Les techniques de détection utilisables pour un "screening" des substances actives doivent
être rapides, simples et sensibles afin de ne mettre en oeuvre qu'une faible quantité de matière
végétale. Ces méthodes sont donc limitées à la détection de quelques groups chimiques.
Le screening phytochimique est un test qualificatif qui permet de mettre en évidence les
métabolites primaires et secondaires de notre plante basée sur des réactions de coloration
et/ou de précipitation. Ces tests s’effectuent soit sur la poudre soit sur l’infusé à 5% afin de
mettre en évidence la présence ou l’absence des métabolites primaires ou secondaires
a)- Préparation de l’infusé à 5% :
5g de poudre végétale a été mélangée avec 100 ml d’eau distillée chaude. Le mélange est
filtré après 15 à 20 min. puis on ajuste à 100ml d’eau distillée .

b) Préparation du macérat :
Le macérat a été préparer en laissant tremper 5g de poudre végétal dans 25 ml de
H2SO4 à10%. Après macération pendant 24h à température ambiante du laboratoire
et sous agitation, la solution a été filtré sur papier filtre et lavée à l’eau distillée de
manière à obtenir 25 ml du macérat.
c)Préparation du Décocté :
La préparation du décocté à 1% a été effectuée à partir d’un gramme de la poudre
végétale dans 100 ml d’eau distillée contenue dans un erlenmeyer de 250 ml,puis le
mélange a été porté à l’ébullition pendant 15 minutes.Aprés filtration de la solution,le
filtrat est ajusté afin d’obtenir 100ml du décocté.

4.5.Test des flavonoïdes

1ml d'acide chlorhydrique concentré et quelques gouttes de Fecl3 ajoutés à 1 ml de l'extrait. La
coloration rose-rouge ou jaune, après trois minutes d'incubation à température ambiante,
indique la présence des flavonoïdes (Hadduchi et al. , 2014).
4.6.Test des alcaloïdes
A 2 ml d’infusé, on a ajouté 2 ml d’acide sulfurique (10%). Après 2 mn d’agitation nous
avons filtré. Au filtrat, on a ajouté 2 gouttes du réactif de Dragendorff. L’apparition d’un
précipité rouge orangé indique la présence des alcaloïdes.
4.7.Test des saponines :
A 2 ml de l’infusé, on a ajouté 1 ml d’eau distillée, la solution est fortement agitée. Le
mélange est laissé pendant 20 mn et la teneur en saponosides est estimée en mesurant la
hauteur de la mousse :

26Pas de mouse = test négatif Mousse moins de 1 cm = test faiblement positif Mousse de plus
de 2 cm = test fortement positif Mousse de 1 à 2 cm = test positif (Trease et Evans, 1987).
3.1.3. Caractérisation des tanins
a- Les tanins catéchiques
Dans des tubes à essai 1ml de chacun des 4 extraits est versé puis 3 ml du réactif de Stiasny
(Annexe 3) est ajouté puis mélangé. Le mélange est maintenu au bain marie à 80 °C pendant 40
min ensuite les tanins catéchiques sont caractérisés par l'observation d'un précipité en gros flocons
b- Les tanins galliques
un volume de 1 ml de chaque extrait a été saturé par 1 ml d'acétate de sodium (1%) puis
3 gouttes de chlorure ferrique (FeCl3) à 1% (Annexe 3) sont ajoutées. L‘apparition d‘une
coloration bleu-noirâtre intense indique la présence de tanins galliques (Konkon et al.,
2006
2.1.2.2. Recherche des mucilages
1 ml d’infusé est ajouté à 5 ml d’éthanol absolu. Le mélange est laissé 10 min. on
remarque l’apparition d’un précipité floconneux indiquant la réaction positive

2.1.2.6. Recherche des anthocyanes

Ajouté a 5ml d’extrait alcoolique 15 ml d'H2SO4 a (10% )(milieu acide), après l’agitation,
le mélange est ajouté a 5ml d'NH4OH a (10% )(milieu basique).
La présence d’anthocyanes est affirme par une coloration bleu – violacée en milieu
basique

Recherche des stérols et des triterpènes

5ml de l' extrait éthérique séché à sec, le résidu obtenu est dissout dans 0,5 ml l'anhydride
acétique anhydre puis dans 0,5 ml de chloroforme puis la solution est transférée a un tube à
essai, l'acide sulfurique (1ml) ensuite déposée au font du tube
Le changement de coloration est observée pendant une heure:
Une coloration bleu-vert indique la présence des triterpènes
En cas de réaction positive (présence des stérols), il se forme anneau rouge –brunâtre
au violet a la zone de contact de deux liquide , la couche surnageant étant grise ou
violette.

Résultats et discussion :
III.1. Taux d’extraction :
Les techniques d’extraction, à partir des plantes médicinales, des antioxydants
phytochimiques constituent une étape cruciale, car elle est déterminante de la qualité et de la
quantité de principes actifs recherchés, qui reflètent directement leurs activités
pharmacologiques.
Dans ce présent travail, afin d’optimiser l’extraction des composés phénoliques de
feuilles de Moringa oleifera, deux paramètres sont pris en considération, à savoir le type de la
méthode d’extraction et la concentration du solvant.

Les résultats de rendement ;

Moule 1 ; Décoction

m(1)=5.820g R1=(5.820/30)*100=19.4% 

.Moule 2 :Décoction
m(2)=4.527g R2=(4.527/30)*100=15.09% 
 .Moule 3 :éthanol
m(3)=8.85g R3=(8.85/30)*100=29.5% 

.Moule 4 : Méthanol

m(4)=8.499g R4=(8.499/30)*100=28.33%  

.Moule 5 :éthanol
m(5)=7.342g R5=(7.342/30)*100=24.47% 

Le taux d’humidité de M. oleifera

Les résultats indiquent que le taux d’humidité de la plante M. oleifera est élevé (Figure
15). Cette plante résiste bien à la sécheresse grâce à ses racines tubéreuses lui permettant
d’accumuler de l’eau (Arbonnier, 2000). M. oleifera est capable de tolérer les mauvaises
conditions du sol. Elle est originaire des régions sub-himalayennes du nord-ouest de l'Inde,
mais elle est actuellement trouvée dans les régions tropicales à travers le monde (Quintin et
al., 2011

mi(1)=39.362(5.002) mf(1)=38.650g T1=[(39.362-38.650)/5.002]*100=14.23%

mi(2)=43.246(5.020) mf(2)=42.485g T2=[(43.246-42.485)/5.020]*100=15.15%

mi(3)=39.433(5.029) mf(3)=38.745g T3=[(39.433-38.745)/5.029]*100=13.68%

Résultats du screening phytochimique

I.1. Caractérisation des polyphénols
La couleur noirâtre apparue après addition du FeCl3témoigne la présence des
polyphénols.
 Figure 16 : Résultat du test de la détection des polyphénols
2.Caractérisation des alcaloïdes
Pour les trois réactifs testés, le résultat est positif :
• Précipité orangé avec le réactif de Dragendorff,
• Précipité brun avec le réactif de Bouchardât
• Précipité blanc jaunâtre avec le réactif de Mayer

Figure 17 : Résultat du test de la détection des alcaloïdes

7.Caractérisation des mucilages
L’apparition d’un précipité floconneux indique la présence des mucilages
 Figure 21 : Résultat du test de détection des mucilage

I.9. Caractérisation des tanins

I.9.1. Tanins condensés
Après addition du réactif de Stiasny, aucun précipité floconneux n’est observé, ceci indique
l’absence des tanins condensés dans notre extrait.

Figure 23 : Résultat de détection des tanins condensés

I.9.1. Tanins hydrolysables

L’apparition d’une couleur bleue noirâtre suite à l’addition d’une solution de FeCl3indique la
présence des tanins hydrolysables.

Figure 24 : Résultat de la caractérisation des tanins hydrolysables

I.1.2. Les flavonoïdes
L'observation d'une coloration rose orangé (clair) dans l'extrait Déc et moins foncé dans
l'extrait Inf, foncé dans l'extrait Méth, et pas bien clair dans l'extrait Chloro (Figure 20)
indique la présence des flavonoïdes. Cela signifie que notre plante contient des flavonoïdes
libres qui peuvent être de type flavones.
 Figure 20. Mise en évidence chimique des flavonoїdes (original).
1: Chloro ; 2: Méth ; 3: Inf ; 4: Déc. T: témoin

I.1.5. Les saponosides

L‘apparition dans l'extrait Déc (Figure 23), d‘une mousse persistante avec une hauteur
supérieur à 1cm (plus de 2 cm) indique une présence assez importante des saponines dans la
plante. Par contre on a noté son absence dans l'extrait Inf.

Figure 23. Mise en évidence chimique des saponosides (Méthode 1) (original).

I.1.6. Les sucres réducteurs
Un précipité rouge briqué a été observé dans les quatre extraits (Figure 25) ce qui indique que
les feuilles de notre plante contiennent des sucres réducteurs.
 Figure 25. Mise en évidence chimique des sucres réducteurs (original).
1: Chloro ; 2: Méth ; 3: Inf ; 4: Déc.

I.8. Caractérisation des anthocyanes

Un virage de couleur vers le vert a été observé, ceci indique la présence des anthocyanes

Figure 22 : Résultat de détection des anthocyanes