Extraction – partie 1

Hydrodistillation de l'huile essentielle de clou de girofle ; séparation de l'eugénol et de

l'acétate d'eugénol par extraction acide / base.

I Introduction.

1. Le clou de girofle.

Le clou de girofle est une épice connue en Chine dès le troisième siècle avant JC.
C'est le bouton floral du giroflier, laissé sécher au soleil après récolte. Il a été
importé en Europe au XIIème siècle mais était peu consommé à cause de son prix
prohibitif. La consommation se généralise au XVIème siècle. Sous le règne de Louis
XV (XVIIIème siècle), Pierre Poivre, horticulteur et botaniste, réussit à acclimater des
pieds de giroflier à l'isle de France et à l'île Bourbon, respectivement île Maurice et
Réunion de nos jours.
Les principaux pays producteurs sont la Tanzanie, Madagascar et l'Indonésie.
Les propriétés antiseptiques et anesthésiques du clou de girofle sont connues depuis longtemps, il est
utilisé notamment contre les douleurs dentaires. En Indonésie, on le mélange au tabac dans les cigarettes
kretek (60% tabac, 40% clou de girofle).
Le clou de girofle contient 15 à 20% d'huile essentielle, 16% d'eau, des tanins, un peu d'amidon et des
fibres cellulosiques.

2. L'huile essentielle.

L'huile essentielle de clou de girofle est

O O
principalement constituée d'eugénol (4-allyl-2-
OH O
méthoxyphénol) 80 à 85%, d'acétate d'eugénol O
environ 10%, d'hydrocarbures, de cétones et eugénol acétate d'eugénol
(4-allyl-2-methoxyphenol) (4-allyl-2-methoxyphenyl acetate)
d'esters.

II Manipulation.

L'huile essentielle est extraite par hydrodistillation du clou de girofle préalablement broyé.
Le mélange clou de girofle - eau - glycérol est porté à ébullition, la vapeur obtenue est recondensée,
l'hydrodistillat recueilli contient de l'eau, de l'eugénol, de l'acétate d'eugénol plus d'autres composés
minoritaires.
 montage d'hydrodistillation (source Hachette)

L'eugénol, qui possède une fonction phénol, pourra être séparé du mélange par un traitement acido /
basique de l'hydrodistillat.

1. Mode opératoire.

Peser 10 g de clous de girofle et les broyer dans un mortier. Placer les clous de girofle broyés dans un
ballon bicol de 250 mL.
Mesurer 80 mL d'eau distillée, rincer le mortier avec et la verser dans le ballon bicol. Ajouter quelques
grains de pierre ponce.
Faire le montage, le faire vérifier par l'enseignant avant de commencer la manipulation.
Chauffer afin d'obtenir une ébullition modérée.
Recueillir l'hydrodistillat dans une éprouvette de 100 mL. Observer l'hydrodistillat, pourquoi est-il trouble ?
Noter la température en tête de colonne.
Ajouter de l'eau de façon via l'ampoule de coulée de façon à maintenir un niveau suffisant dans le ballon.
Arrêter l'hydrodistillation après avoir recueilli 60 à 70 mL.
Verser l'hydrodistillat dans une ampoule à décanter de 250 mL, ajouter 30 mL de solution saturée de
chlorure de sodium. Extraire deux fois avec 20 mL de diéthyléther. Les phases organiques sont récupérées
dans un erlenmeyer B (c’est l’extrait brut), et la phase aqueuse dans un erlenmeyer A.
Déposer à l'aide d'un capillaire, un peu de solution éthérée "brute" sur une plaque de CCM.
Quel est le but de l'extraction ?
Les phases organiques réunies sont placées dans l'ampoule à décanter et extraites avec deux fois 40 mL de
soude 2M. La phase organique est récupérée dans l'erlenmeyer B et les phases aqueuses dans un
erlenmeyer C.
Quel est le rôle de la soude ? Que contient la phase organique après l'extraction ? Que contient la phase
aqueuse ?
Les phases aqueuses sont acidifiées avec HCl 4M jusqu'à pH 1.
Quel est le but de l'ajout d'acide ? Qu'observe-t-on ?
La phase aqueuse est placée dans l'ampoule à décanter et extraite avec deux fois 20 mL de diéthyl éther.
Les phases organiques sont réunies dans un erlenmeyer D et séchées sur MgSO4.
La phase organique est filtrée sur papier plissé dans un ballon monocol C préalablement taré et le solvant
est évaporé à l'aide de l'évaporateur rotatif.
Avant d'évaporer, déposer à l'aide d'un capillaire, un peu de solution C sur la plaque de CCM.
La phase organique de l'erlenmeyer B est séchée sur MgSO4 puis filtrée sur papier plissé dans un ballon
monocol B préalablement taré et le solvant est évaporé à l'aide de l'évaporateur rotatif.
Avant d'évaporer, déposer à l'aide d'un capillaire, un peu de solution B sur la plaque de CCM.

2. Résultats.

a. Faire une plaque CCM en prenant comme références l'huile

essentielle de clou de girofle (une goutte dissoute dans quelques
gouttes de diéthyéther), l'eugénol (une goutte dissoute dans
quelques gouttes de diéthyéther) et l'acétate d'eugénol (une goutte
dissoute dans quelques gouttes de diéthyéther).
Faire éluer la plaque dans un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle
5/1.
Révéler à l'UV puis au diiode.
Analyser la plaque : contenu de l'huile essentielle obtenue, efficacité
huile
de l'extraction. huile
essentielle essentielle
B D eugenol
b. Calculer le rendement d'extraction. (extrait brut)
 Extraction – partie 2

Extraction et séparation des colorants des graines de rocouyer (Bixa orellana) par
chromatographie sur gel de silice.

I Introduction.

Le rocouyer est un arbuste originaire d'Amérique du sud. Ses fleurs sont roses et il
donne des fruits rouges à épines remplis de graines, rouges elles aussi. Son fruit, le
rocou ou roucou, annatto, achiote n'est pas comestible. Il est récolté puis séché pour
en extraire la cire qui entoure les graines. La couleur rouge des graines est due à
plusieurs dérivés de caroténoïdes situés dans l'épiderme de la graine, dans lesquels
la bixine (9'Z-6,6'-diapocarotene-6,6'-dioate) est la plus importante, de 70 à 80% des
caroténoïdes totaux. Plusieurs caroténoïdes et dérivés ont été identifiés ; leur
concentration change fortement et peut atteindre jusqu'à 7% de la masse des
graines sèches. Le rocou contient également beaucoup de sélénium, magnésium et
calcium.
Traditionnellement, il est utilisé comme pigment et comme aromate. La bixine est actuellement utilisée
comme colorant alimentaire (code européen E160b) par exemple dans certains fromages Edam, Munster,
Cheshire.

II Manipulation.

Les caroténoïdes sont extraits des graines de rocouyer par extraction solide-liquide à l'aide d'acétone ou
de dichlorométhane. Les trois produits principaux sont la bixine, la méthyl bixine et la norbixine.
Les composés seront séparés par colonne de chromatographie sur gel de silice.

O bixine R = H ; R' = CH3

méthyl bixine R = R' = CH3
OR norbixine R = R' = H

O OR'

1. Mode opératoire.

a. Extraction.
Peser 2 g de graines de rocouyer broyées dans un bécher de 50 mL.
Prélever 20 mL d'une solution de 8% d'éthanol dans l'acétone. NB : le pourcentage est en volume/volume.
Mettre un barreau aimanté dans le bécher et ajouter 5 mL de la solution d'extraction.
Agiter 5 à 10 minutes puis laisser décanter.
Prélever le surnageant à l'aide d'une pipette et le transvaser dans un bécher propre de 50 mL.
Préparer trois plaques CCM et à l'aide d'un capillaire déposer l'extrait de graines sur chacune d'entre elles.
Répéter le dépôt de 5 à 10 fois au même endroit pour que le dépôt soit bien concentré.
En parallèle : choix de l'éluant pour la chromatographie sur colonne, cf b.

Faire deux nouvelles extractions avec 5 mL de solution de 8% d'éthanol dans l'acétone, combiner les
extraits dans le bécher de 50 mL.
Transvaser les extraits dans un ballon rodé, rincer le bécher avec le reste de solution d'extraction et
évaporer les solvants l'aide de l'évaporateur rotatif.

b. Choix de l'éluant pour la chromatographie sur colonne.

Faire migrer les plaques dans les éluants suivants : une plaque dans l'éther de pétrole ; une plaque dans
éther de pétrole - acétone 40% ; une plaque dans l'acétone.
Sortir les plaques des cuves quand l'éluant est à environ 5 mm du bord de la CCM. Marquer le front de
solvant et laisser sécher.
À l'aide d'un crayon, entourer les taches de couleur, un trait plein pour les taches très colorées de forte
intensité, un trait en pointillé pour les taches de plus faible intensité.
Ensuite, révéler la plaque au diiode, entourer les taches non révélées auparavant avec un crayon de
couleur différente.
Déterminer l'éluant le plus approprié pour la séparation des composants de l'extrait.
Pour une séparation optimale sur colonne de gel de silice, le produit majoritaire désiré doit avoir un Rf
d'environ 0,3 avec une différence d'au moins 0,1 avec les autres produits.

c. Séparation des colorants par chromatographie sur gel de silice.

Accrocher la colonne sur un support vertical à l'aide de deux pinces.
Dans un erlenmeyer, peser 12 g de gel de silice pour chromatographie.
Ajouter 30 mL de l'éluant choisi pour la chromatographie, remuer doucement de
sable façon à obtenir une suspension (gel).
silice Verser délicatement la suspension dans la colonne à l'aide d'un entonnoir.
verre fritté
Tapoter la colonne à l'aide d'une pince en bois ou d'un anneau en liège ou en
plastique pour évacuer les bulles d'air.
Éliminer l'excès d'éluant en ouvrant le robinet de la colonne, faire couler de façon à
ce que le niveau d'éluant affleure la silice, recueillir l'éluant dans l'erlenmeyer.
Recommencer l'opération si il reste de la silice dans l'erlenmeyer.

L'extrait brut obtenu précédemment est solubilisé dans 1 à 2 mL de l'éluant choisi. Pourquoi est-il
important de ne pas solubiliser l'extrait dans un trop grand volume d'éluant ?
La solution obtenue est déposée délicatement à l'aide d'une pipette Pasteur sur la colonne en laissant
couler la solution le long des parois. Ouvrir le robinet de la colonne pour faire pénétrer la solution, le
niveau doit être au niveau de la silice. Ajouter délicatement 2 mL d'éluant. Faire pénétrer dans la colonne.
Répéter avec de nouveau 2 mL de solvant. L'extrait brut est maintenant chargé sur la colonne. Ajouter
délicatement du sable à l'aide d'un entonnoir à solide de façon à obtenir une couche d'environ 1 cm. La
colonne est prête pour l'élution.
Ajouter de l'éluant jusqu'en haut de la colonne.
Collecter des fractions d'environ 5 mL dans des
tubes à essais. Attention à collecter les fractions
dans l'ordre du rack.
Collecter jusqu'à l'élution de toute la couleur
orangée, soit environ 30 fractions.
Pour déterminer quelles fractions contiennent la
bixine, faire des CCM d'une fraction sur deux (2, 4,
6 … etc jusque n). Concentrer les taches en 2 4 6 8 10 12 14 16 18

répétant environ 10 fois le dépôt pour une même extrait brut

= référence
tache.
Éluer la ou les CCM.
Déterminer les fractions contenant la bixine.
Combiner les fractions dans un ballon rodé préalablement taré et évaporer les solvants à l'aide de
l'évaporateur rotatif.

2. Résultats.

a. Sachant que la bixine est le produit majoritaire de l'extrait, identifier les taches CCM de la bixine, de la
norbixine et de la méthyl bixine. Justifier.
b. Peser la bixine purifiée et calculer le rendement d'extraction.
 ANNEXES

CCM : chromatographie sur couche mince.

La chromatographie est une méthode physique de séparation de mélanges en leurs constituants ; elle est
basée sur les différences d’affinité des substances à l’égard de deux phases, l’une stationnaire ou fixe,
l’autre mobile.
La chromatographie sur couche mince, ou sur plaque (CCM), est effectuée pour analyser un mélange ou
suivre une réaction. Elle est utilisée en routine dans les laboratoires de chimie organique.
La phase stationnaire solide, ici la silice, est fixée sur une plaque, aluminium, verre ou plastique. La phase
mobile liquide, nommée éluant, est un solvant ou un mélange de solvants.
À l’aide d’un capillaire, on dépose sur la phase stationnaire une petite quantité du mélange à séparer (en
solution) et on place la plaque dans une cuve contenant l’éluant.

La phase mobile migre de bas en haut, couvercle

par capillarité, le long de la phase cuve

stationnaire en entraînant les

plaque CCM
constituants du mélange. C’est le plaque de silice

phénomène d’élution, qui permet la

séparation des constituants du mélange
à analyser. Chaque constituant migre ligne de dépôt

d’une certaine hauteur, caractéristique éluant

de la substance, que l’on appelle rapport

frontal ou rétention frontale (Rf). produit
de départ
mixte produit
d’arrivée
 Spectres UV & IR

Spectre UV-visible de bixine, isolée de Bixa orellana, dans le chloroforme.

Spectre IR de bixine isolée de Bixa orellana (NaCl).