Faculté de Médecine

d’Alger
Département de Pharmacie

EHS ALI AIT IDIR

Laboratoire de biologie et de Toxicologie

Méthode de glynn et kendall

Dosage de la paracétamolémie

Réaction de diazocopulation
Dr LEKKAT Amira
INTRODUCTION

Le paracétamol appelé aussi acétaminophène est la substance active de nombreuses

spécialités médicamenteuses de la classe des antalgiques et des antipyrétiques non salicylés
La toxicité au paracétamol présente 6,8% des intoxications ( 66% des médicaments )
Indications

 Les syndromes douloureux aigues ( migraines ,douleurs dentaires )

 Les affections chroniques et douleureuses
 Les syndromes febriles
Toxicité

• Au doses usuelles ses inconvénients sont réduits :

 Intoxication aigue: resulte de surdosage involontaire
(automédication), accidentelle (enfant) ou volontaires
hepatite fulminante
 Intoxication chronique : a long terme 
atteinte rénal
Mécanisme d’action toxique

NAPQI se lie au glutathion  dépassement des reserves  il se trouve

libre  se lie au cysteine ,lipide , prt des hepatocytes
Dosage de la paracétamolemie

C’est le dosage de la concentration du paracétamol dans le sang utilisé

pour :
Estimer le risque d’une atteinte hépatique chez le sujet
ECHANTILLONAGE

• 05 ml du sang veineux sur tube sec ou hépariné

• Conservation : - à +4° C si analyse dans les 24h suivant
le prélèvement
- congelé a – 20° C si analyse différée
 RÉACTIFS

1. Solution aqueuse d'acide trichloracétique à 10%.

2. HCl pur « d=1,19 ».
3. Solution aqueuse de NaNO2 (préparée
extemporanément) (100g/L d'eau).
4. Solution aqueuse de sulfamate d'NH4 à 150g/L
5. Solution de NaOH à 0.6N
6. Solution étalon de paracétamol à 1mg/ml dans l'eau
distillée.
PRINCIPE

Après défécation des protéines par l'acide

trichloracétique et sous l'action de l'acide nitreux
naissant, le paracétamol est transformé en un dérivé
nitreux qui se colore en jaune orangé en milieu
alcalin.
 MODE OPÉRATOIRE

A partir d’une solution de paracétamol a 1mg/ml, préparer une gamme d’étalonnage dans des tubes a
centrifuger de 10ml
Concentration 0 50 100 200 300 400 échantillon
(µg/ml)

Sérum témoin (ml) 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0.5

Solution - 100 200 400 600 800 -

Paracétamol
(µl)

Ac 2 2 2 2 2 2 2
trichloracétique
(ml)
 MODE OPÉRATOIRE
1. Agiter au vortex pendant 1minute
2. récupérer 2 ml du liquide de défécation et le mettre dans
dans un autre tube.
3. Ajouter 1 ml d'HCI pur à 2 ml NaNO2.
4. Agiter à la main et attendre 2 minutes
5. Ajouter très doucement 2 ml de sulfamate d'NH4 et 2ml
de NAOH 0.6N
6. Agiter au vortex 15 secondes
7. Lire l'absorbance à 430nm
8. Tracer la courbe d'étalonnage et en déduire la
concentration du paracétamol dans votre échantillon X
 CALCUL

Calculer la paracétamolémie par extrapolation en se

référant à la courbe d’étalonnage, la courbe d’étalonnage
est établie de façon hebdomadaire, en traitant comme
Limite de détection :
sus-décrit, des
Environ 50 mg/l solutions étalons de paracétamol dans le
plasma
Dose normal
toxique (blanc)
chez a 0,50,100,200,300,400
l'enfant mg/l.
: à partir de 200 mg/kg
Les solutions
Chez l'adulte :étalons de la courbe sont instables même à
150 mg/kg
+4°c et doivent être préparées chaque semaine ou
conservées à -20 °c.
R : la méthode n’est utilisable qu’après 4-24 h après
ingestion du toxique
 INTERPRÉTATION
Le nomogramme de prescott a 2 intérêts :
1. Corréler les taux plasmatiques de paracétamol avec le degre de toxicité hépatique *
2. Corréler l’efficacité du trt (NAC) en f° de la paracétamolemie en prenant en considération du délai de
réalisation du prélèvement
RISQUE [mg/l] a la 4éme h [mg/l] a la 15éme h

Hepatite mortelle > ou = á 300 Mais plusieurs limites ! > ou = á 45

Hepatite grave A
-n’est exploitable qu’après 4h d’ingestion
> ou = á 200 > ou = á 30
B
- Interférences avec l’ac salicylique et levodopa
Absent <C
ou = á 150
- Intoxication a dose répété< ou = á 25
1 2

A: paracétamolemie > 300 mg/l a 4h  hepatite mortelle

B : paracétamolemie a 4h > 150mg/l  mettre sous trt antidotal
C: tous les malades a paracétamolemie <100mg/l ne présentent pas un risque d’hépatotoxicité
 BIBLIOGRAPHIE

1-Heard KJ. Acetylcysteine for Acetaminophen Poisoning. N Engl J Med

2008. 359:285-292.
2-B. Mégarbane
et al. Intoxications graves par médicaments et substances illicites en réa
nimation, Recommandations d’expert, SRLF, 2006

Fiche N-acétylcystéine
3- Prescott LF, Roscoe P, Wright N, Brown SS. Plasma-paracetamol half-
life and hepatic necrosis in patients with paracetamol overdosage.
Lancet 1971 ;1:519-522.
4-PARACETAMOL [archive], fiche de sécurité du Programme
International sur la Sécurité des Substances Chimiques.
Réaction de diazocopulation
Introduction

Les benzodiazépines sont une classe de molécules

chimiques hétérocycliques formées d’un
cycle diazépine attaché à un benzène. Ces molécules
forment ensemble une classe thérapeutique de
médicaments psychotropes utilisés dans
le traitement des convulsions
 Recherche par colorimétrie

Principe : Coloration spécifique après hydrolyse acide et

réaction avec un réactif spécifique à partir des urines.
Réactifs :
• Acide chlorhydrique 6N.
• Nitrite de sodium.
• Sulfamates d’ammonium.
• Réactif de Tréfouël (Solution aqueuse de chlorhydrate
de N-alpha-Naphtyl N, N diethylpropylène à 0,1%
Technique : Mettre dans trois tubes à essai 1ml d’urine et
1 ml d’acide chlorhydrique 6N. Introduire les deux
derniers au bain marie bouillant pendant 10 minutes,
refroidir ces derniers sous un courant d’eau froid puis
ajouter dans chaque tube 0,5 ml de sulfamates
d’ammonium et 0,5 ml du réactif de Tréfouël.
La présence des benzodiazépines se traduit par
l’apparition d’un spot violet.
Dosage par spectrophotométrie

Principe : Hydrolyse acide à chaud des dérivés de la

benzodiazépine- 1,4 et de leurs métabolites dans les
liquides biologique, les produits obtenus peuvent être
caractérisés par spectrophotométrie après
diazocopulation
Réactifs :
• Solution de Cholrazépate dipotassique à 100µg/ml
Solution d’HCl 6N
• Solution aqueuse de nitrite de Na à 0.1%
• Solution aqueuse de sulfamate d’ammonium à 0.5%
• Solution aqueuse de dichlorhydrate de nahtyl-
éthylène-diamine à 0.1%
Matériel :
1.Spectrophotomètre
2.Bain-marie thermostaté (60°C)
3.Bain-marie bouillant
Mode opératoire: Dosage Etalon
Dans deux Erlenmeyers : Urines ou Plasma 5ml –
Solution étalon à
– 5ml
100 µg/ml
• Faire bouillir 45 mn. HCl 6N 1ml 1ml

• Après refroidissement, alcaliser à pH = 10 et extraire par 20 ml

d’éther. Laver l’extrait éthéré par 5 ml de la solution saturée de
sulfate de sodium. Sécher la phase organique par un peu de
sulfate de sodium sec.
• Evaporer l’éther
• Reprendre par l’HCl 6N : 2,5ml (plasma) 5ml (urines) 5ml
(étalon)
 Coloration :
50 µg 100 µg 150 µg Plasma Urines Blanc

Etalon 0.5 1 1.5

Plasma 1.5

Urines 1

HCl 6N 1 0.5 0.5 0.5

Eaud 1 1 1 1 1 1

NaNO2 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Agiter, attendre 3 mn

SulfNH4 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Agiter vigoureusement. Attendre 10 mn en agitant de temps en temps

NED 1 1 1 1 1 1
Agiter, porter à 60°C pendant 5 minutes

Lire les D.O à 550 nm  Etablir la courbe d’étalonnage, et lire le taux de benzodiazépines.
 Limites de la diazocopulation

 BZD non diazocopulable : diazepam , tetrazépam

 Réaction croisée avec autre molécule diazocopulable
 Seuil de quantification elevé 50 ug/ml